目的構(gòu)建腎癌G250抗原肽與HBcAg重組基因的原核表達質(zhì)粒pET28a（+）/C-G250肽-C,并通過大腸桿菌進行原核表達并純化,分析表達融合蛋白的免疫原性及抗原性。方法 PCR擴增編碼G250抗原中249～268氨基酸的基因片段,將G250肽插入去除主要免疫優(yōu)勢區(qū)的重組質(zhì)粒pGEMEX/HBcAg中,獲得重組質(zhì)粒pGEMEX/C-G250肽-C,為更換酶切位點,以pGEMEX/C-G250肽-C為模板,PCR擴增C-G250肽-C基因片段,最終將目的基因亞克隆入原核表達質(zhì)粒pET28a（+）中,IPTG誘導(dǎo)融合蛋白表達,利用Ni 2+-NTA親和層析法純化重組融合蛋白,SDSPAGE鑒定融合蛋白的表達,純化后融合蛋白經(jīng)腹腔注射免疫BALB/c小鼠,間接ELISA法檢測小鼠血清中抗體的滴度。結(jié)果酶切及基因測序鑒定證實融合基因正確重組于表達質(zhì)粒pET28a（+）中,原核表達并純化后,該分離純化融合蛋白純度達95%以上,其相對分子質(zhì)量約為22.35。BALB/c小鼠經(jīng)4次免疫后,所有小鼠血清中均可檢測到抗體,免疫第6周其血清中抗體滴度可達到1∶5.12×105,抗G250肽抗體滴度達到... 

【文章來源】：西安交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2014,35(01)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1材料與方法
2結(jié)果
3討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]EGFRvIII/PEP-3 cDNA與HBcAg重組基因原核表達載體的構(gòu)建、表達與免疫分析[J]. 段小藝,王健生,郭佑民,韓俊麗,王全穎,楊廣笑.  細胞與分子免疫學(xué)雜志. 2007(01)
[2]重組基因c-Aβ-c的構(gòu)建及其表達蛋白的免疫原性分析[J]. 馮改豐,胡海濤,李月英,韓華,王全穎,楊廣笑.  細胞與分子免疫學(xué)雜志. 2005(05)



本文編號：3470873