發(fā)布時間：2017-05-04 12:09

  本文關鍵詞：黃芩素在前列腺癌細胞誘導自噬的相關機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：前列腺癌(PCa)是西方國家男性最常見的惡性癌癥之一,一直嚴重威脅著中老年男性健康。在臨床上,雄激素阻斷內分泌療法一直是前列腺癌治療的最常用方法。但是,雄激素阻斷內分泌療法在激素非依賴性前列腺癌(hormone refractory prostate cancer,HRPC)治療上的失效迫使人們不斷尋找新的治療藥物與治療方法。而蛋白酶體抑制劑作為一種新興的抗腫瘤藥物,如NPI-0052等,現(xiàn)已得到國內外學者的廣泛重視。臨床研究發(fā)現(xiàn),蛋白酶體不僅是有效的抗癌藥物,也可能是潛在的自噬誘導劑。而在很多情況下,蛋白媒體抑制所誘導的自噬過程與其抑癌作用是相互拮抗的,是腫瘤細胞耐藥性產生的重要原因。其中,黃芩素作為一種新型的蛋白酶體抑制劑,可在體外誘導前列腺癌細胞的凋亡、細胞周期阻滯等增殖抑制作用。而在本課題前期研究發(fā)現(xiàn),黃芩素可顯著誘導前列腺癌細胞凋亡及細胞增殖抑制。但是,在體內研究中發(fā)現(xiàn),黃芩素在前列腺癌裸鼠移植瘤中所起的抑制效果并不明顯。進一步體外研究發(fā)現(xiàn),黃芩素還可以引起前列腺癌的細胞自噬,引起細胞內自噬體增多,及自噬體聚集的增多。而黃芩素在前列腺癌細胞內所誘導的自噬與黃芩素所誘導的抗腫瘤作用(如細胞凋亡)的關系及自噬的誘導機制尚未闡明。最新研究發(fā)現(xiàn),PI3K/AKT/m TOR信號通路作為前列腺癌細胞內重要的信號傳導通路,與細胞的生長、增殖及血管生成密切相關。而在黃芩素所引起的生物學效應中,PI3K/AKT/m TOR信號通路及其下游通路NF-κB、GSK-3β通路也起著重要作用。與此同時,PI3K/AKT/m TOR信號通路及其下游通路NF-κB、GSK-3β通路也與多種腫瘤自噬的形成有密切的關系。而這些通路對前列腺癌細胞內的細胞自噬過程的誘導機制并未闡明。因此,為闡明黃芩素所誘導的自噬與凋亡的關系,本課題通過黃芩素與自噬抑制劑、凋亡抑制劑的聯(lián)用,及對兩大通路活性的分析,進一步闡明細胞凋亡與細胞自噬在黃芩素所誘導的細胞死亡中的作用。另一方面,為闡明PI3K/AKT/m TOR信號通路在黃芩素所誘導的自噬過程中所起的作用,本課題對黃芩素作用的前列腺癌細胞進行了細胞學水平的分析,著重分析黃芩素作用后,細胞內自噬水平的變化、細胞內自噬水平的變化、PI3K/AKT/m TOR通路下游NF-κB、GSK-3β活性的變化、及PI3K/AKT/m TOR通路各個調控點(如AKT、m TOR的關系)的活性變化。事實證明,黃芩素可作用于PI3K/AKT/m TOR信號通路,抑制PI3K/AKT/m TOR信號通路,及其下游通路,如NF-κB、GSK-3β通路的活性的顯著變化,并引起自噬水平的上調。這也進一步闡明PI3K/AKT/m TOR信號通路在對黃芩素誘導的前列腺癌細胞自噬形成所起的重要作用。與此同時,這些結果不僅為黃芩素在前列腺癌實體瘤所產生耐藥性的解決提供一個可靠的解釋,也可以為黃芩素對其他腫瘤的研究提供一些有用的參考。
【關鍵詞】：黃芩素 前列腺癌 細胞自噬 細胞凋亡 PI3K/AKT/m TOR信號通路
【學位授予單位】：哈爾濱工業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.25
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 第1章 緒論10-28
• 1.1 課題背景及研究的目的和意義10-11
• 1.2 前列腺癌的研究進展11-14
• 1.2.1 前列腺癌的發(fā)生與發(fā)展11-13
• 1.2.2 前列腺癌的診斷及療法13-14
• 1.3 自噬溶酶體途徑14-19
• 1.3.1 細胞自噬的基本過程14-15
• 1.3.2 細胞自噬的主要調控通路15-16
• 1.3.3 細胞自噬與細胞凋亡16-18
• 1.3.4 細胞自噬與惡性腫瘤18-19
• 1.4 PI3K/AKT/m TOR信號通路19-23
• 1.4.1 PI3K/AKT/mTOR信號通路概況19-21
• 1.4.2 PI3K/AKT/mTOR信號通路與惡性腫瘤21-22
• 1.4.3 PI3K/AKT/mTOR信號通路的應用研究進展22-23
• 1.5 黃芩素作用機制研究進展23-26
• 1.5.1 黃芩素的抗腫瘤作用23-25
• 1.5.2 黃芩素對PI3K/AKT/m TOR通路的影響25-26
• 1.6 主要研究內容26-28
• 1.6.1 研究內容26-27
• 1.6.2 技術路線27-28
• 第2章 實驗材料與方法28-33
• 2.1 實驗對象與試劑28-29
• 2.1.1 實驗對象28
• 2.1.2 實驗試劑28-29
• 2.2 實驗方法29-33
• 2.2.1 常規(guī)細胞培養(yǎng)29-30
• 2.2.2 Western Blot檢測30-31
• 2.2.3 實時定量RT-PCR31-32
• 2.2.4 自噬斑檢測32
• 2.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析32-33
• 第3章 黃芩素誘導的前列腺癌細胞自噬過程的發(fā)現(xiàn)33-37
• 3.1 引言33
• 3.2 自噬斑的觀察33-34
• 3.3 自噬相關蛋白表達的分析34-35
• 3.4 自噬相關蛋白基因表達水平的分析35-36
• 3.5 本章小結36-37
• 第4章 黃芩素所誘導的細胞自噬與凋亡的關系37-45
• 4.1 引言37
• 4.2 抑制黃芩素誘導的前列腺癌細胞的自噬對細胞凋亡通路的影響37-42
• 4.3 抑制黃芩素誘導的前列腺癌細胞的凋亡對細胞自噬通路的影響42-44
• 4.4 本章小結44-45
• 第5章 黃芩素所誘導的自噬與PI3K/AKT/mTOR通路的關系45-53
• 5.1 引言45
• 5.2 黃芩素所誘導的前列腺癌細胞的自噬與NF-кB通路的分析45-47
• 5.3 黃芩素所誘導的前列腺癌細胞的自噬與GSK-3β通路的分析47-49
• 5.4 黃芩素所誘導的前列腺癌細胞的自噬與PI3K/AKT/mTOR通路的分析4049-52
• 5.4.1 黃芩素對AKT的抑制作用49-50
• 5.4.2 黃芩素對mTOR的抑制作用50-52
• 5.5 本章小結52-53
• 結論53
• 展望53-54
• 參考文獻54-58
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文及其它成果58-60
• 致謝60

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本文編號：345038