目的:巨噬細(xì)胞在腎結(jié)石形成中的作用仍不十分清楚。在這項研究中,我們研究了巨噬細(xì)胞極化在吡格列酮抑制腎臟結(jié)晶形成和炎性損傷作用中的相關(guān)機(jī)制。材料和方法:雄性C57小鼠被分為對照組,3天100mg/kg乙醛酸組,6天100mg/kg乙醛酸組,6天100mg/kg乙醛酸加5mg/kg吡格列酮組,6天100mg/kg乙醛酸加10mg/kg吡格列酮組,6天100mg/kg乙醛酸加15mg/kg吡格列酮組。分別在第4天或第7天收集腎臟標(biāo)本。在體外實驗中使用小鼠骨髓來源的巨噬細(xì)胞（BMDM）。我們利用Pizzolato染色和偏振光光學(xué)顯微鏡檢測晶體的形成。PPARγ、巨噬細(xì)胞相關(guān)基因、炎癥相關(guān)基因的表達(dá)及巨噬細(xì)胞的數(shù)量分別采用Western blot、q PCR、免疫組化和免疫熒光等方法來檢測。我們采用TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡,采用PAS染色評價腎小管損傷。采用免疫共沉淀法來確定蛋白質(zhì)之間的相互作用。我們使用Ch IP方法和q PCR確定PPARγ是否直接與pre-mi R-23的啟動子結(jié)合。我們使用熒光素酶報告基因檢測法來確定mi R-23和下游分子之間的相互作用。結(jié)果:實驗過程中,乙醛酸組小鼠腎... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 引言
2 材料與方法
    2.1.試劑和細(xì)胞系
    2.2.動物程序
    2.3.腎臟CAOX晶體的觀察
    2.4.免疫組化(IHC)和免疫熒光(IF)
    2.5.細(xì)胞凋亡和腎小管損傷
    2.6.WESTERN BLOTTING
    2.7.QRT-PCR分析
    2.8.巨噬細(xì)胞分化和極化
    2.9.免疫共沉淀分析
    2.10.MIRNA-FISH
    2.11.染色質(zhì)免疫沉淀測定(CHIP)測定
    2.12.熒光素酶報告基因測定
    2.13.寡核苷酸和轉(zhuǎn)染
    2.14.統(tǒng)計分析
3 實驗結(jié)果
    3.1.吡格列酮減少了高草酸尿小鼠模型中腎草酸鈣晶體的形成、腎小管損傷、細(xì)胞凋亡和小鼠體重減輕
    3.2.吡格列酮減少了高草酸尿小鼠模型中腎臟巨噬細(xì)胞的浸潤及M1型巨噬細(xì)胞的極化
    3.3.PPARΓ活性對COM誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞M1 / M2表型變化的調(diào)節(jié)作用
    3.4.MIR-23 可能是PPARΓ在翻譯水平上調(diào)節(jié)IRF1和PKNOX1表達(dá)的重要介質(zhì)
    3.5.PPARΓ通過與MIR-23 啟動子中的1個PPRE結(jié)合而增加MIR-23 的表達(dá),并且IRF1和PKNOX1是MIR-23 的兩個靶基因
    3.6.MIR-23 在調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化和炎癥方面有著重要的作用
    3.7.MIR-23 是PPARΓ在調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化和炎癥中的重要調(diào)節(jié)因子
    3.8.MIR-23 過表達(dá)減少了小鼠高草酸尿癥模型腎結(jié)晶形成、巨噬細(xì)胞浸潤、M1型極化、腎小管損傷和細(xì)胞凋亡
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
附錄 1(攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文目錄)



本文編號：3431147