慢性腎臟�。╟hronic kidney disease,CKD）具有發(fā)病率逐年增高、治療手段有限、轉(zhuǎn)歸預(yù)后差、醫(yī)療費用昂貴等特點,已成為全球范圍內(nèi)的公共健康問題。2012年對我國成年人進行的一項大型橫斷面研究結(jié)果顯示CKD發(fā)病率為10.8%,累及大概1.19億人群^[1]。而流行性病學研究表明急性腎損傷（acute kidney injury,AKI）是CKD的獨立危險因素,急性腎損傷的程度、發(fā)生頻率及持續(xù)時間都與CKD進展有關(guān),AKI到CKD的轉(zhuǎn)變是進展性腎功能惡化的重要病因。AKI到CKD轉(zhuǎn)變是復雜的病理生理過程,目前研究包括腎小管細胞不完全再生（發(fā)生EMT和G2/M細胞周期停滯等）、持續(xù)慢性炎癥反應(yīng)（M1巨噬細胞表型轉(zhuǎn)變?yōu)镸2）、線粒體功能障礙、遺傳學修飾（DNA甲基化和microRNA表達）、RAS激活、內(nèi)皮細胞失功能和微血管稀疏等^[2]。腎小管上皮細胞是新陳代謝極度活躍細胞,對氧化還原反應(yīng)失衡尤其敏感,大量研究表明腎小管上皮細胞氧化損傷在AKI、AKI-CKD以及CKD的發(fā)生發(fā)展中均具有重要作用^[3]。在體內(nèi)維... 

【文章來源】：鄭州大學河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：107 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

1.1.：葉酸腎損傷小鼠模型回顧性研究實驗流程圖

圖 4.1.1.2.：葉酸損傷后低肌酐組和高肌酐組腎臟形態(tài)和功能變化對比。圖 A：葉酸損傷第 28 天對照組、低肌酐組、高肌酐組腎臟形態(tài)學改變。圖 B：葉酸損傷 28 天時低肌酐組與高肌酐組腎重體重比值。**P<0.01vs 低肌酐組。圖 C：高肌酐組與低肌酐組血肌酐變化：根據(jù)第 28 天時所有小鼠的血肌酐中位數(shù)分為兩組，再回顧性統(tǒng)計所有小鼠在不同時間點的肌酐值。*P<0.05 vs 低肌酐組。4.1.2 小鼠急性腎損傷的轉(zhuǎn)歸與腎小管氧化應(yīng)激損傷程度有關(guān)為了進一步探討葉酸誘導的 AKI 進展為 CKD 的發(fā)病機制，如圖 4.1.2.，與低肌酐組相比，高肌酐組小鼠腎臟膠原纖維增多，纖維粘連蛋白（Fibronectin ，F(xiàn)N）表達也增強，表明急性腎臟損傷后高肌酐組的腎臟發(fā)生纖維化病變，已具備慢性腎臟病的典型病理改變；而與溶劑對照組相比，低肌酐組 FN 和膠原Ⅰ的表達也有所增多，表明低肌酐組也有一定的慢性損傷。磷酸化組蛋白 H3（p-Histone H3）是評估有絲分裂停滯，細胞周期異常的重要指標，免疫組化結(jié)果顯示 p-Histone H3在腎小管上皮細胞中有陽性表達（三角箭頭所示），與低肌酐組比較，高肌酐組陽性表達增多，這與 western blot 結(jié)果一致。8-OHdG 和硝基酪氨酸（Nitrotyrosine）作為機體氧化應(yīng)激損傷的重要生物學指標，免疫組化

圖 4.1.2.：在葉酸誘導的小鼠腎損傷模型中，腎小管上皮細胞氧化應(yīng)激損傷程度與腎臟預(yù)后相關(guān)。A：在葉酸損傷第 28 天，腎組織標本進行 Masson's trichrome 染色檢測膠原纖維的變化（標尺為 200μm）；Fibronectin 免疫熒光染色檢測其表達（標尺為 50 μm）；p-HistoneH3 免疫組化染色檢測其表達（標尺為 20 μm），黑色三角箭頭顯示為腎小管上皮細胞中p-Histone H3 陽性著色；8-OHdG 免疫組化染色檢測腎組織氧化應(yīng)激損傷（標尺為 50 μm）。B：葉酸損傷第 28 天將各組腎組織勻漿，用 western blot 方法檢測 FN、CollagenⅠ、p-HistoneH3 和 Nitrotyrosine 的蛋白表達水平。4.2 在葉酸誘導的小鼠腎損傷前瞻性分析研究中，AKI 到 CKD 的進展與腎小管上皮細胞持續(xù)的氧化應(yīng)激損傷有關(guān)4.2.1 葉酸誘導的小鼠腎損傷前瞻性分析研究為了進一步研究前期實驗結(jié)果，我們設(shè)計了葉酸誘導腎損傷模型的前瞻性研究。圖 4.2.1.1 所示，為了讓小鼠的急性腎損傷程度盡可能一致，避免因急性損傷程度不同導致的長期預(yù)后不同，在損傷后的第 3天急性期時收集所有小鼠血標本，檢測血肌酐，選擇血肌酐值在 2.0-2.4 之間的小鼠進行長期研究，并在入選的小鼠中隨機選擇 5只處死，留取腎組織等標本備用。在第 7、14、28天時間


本文編號：3410894