本文關(guān)鍵詞：低頻遺傳變異與中國男性非梗阻性無精子癥遺傳易感性的關(guān)聯(lián)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：不孕不育在本世紀(jì)已成為人類生殖健康領(lǐng)域最為常見的疾病之一,其預(yù)防、診斷和治療不僅標(biāo)志著生殖健康水平的高低,也直接關(guān)系著人類的生存繁衍。據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)統(tǒng)計(jì),不孕不育已經(jīng)影響了世界范圍內(nèi)10-15%的夫婦,其中由于男性問題導(dǎo)致的不育將近50%。而無精子癥,即射出的精液中沒有精子,是引起男性不育的重要原因。臨床上精液經(jīng)3次離心鏡檢仍未見精子,且排除不射精和逆行射精等情況后方可確診。按照有無輸精管道梗阻,可將無精子癥分為梗阻性和非梗阻性兩種。其中非梗阻性無精子癥(non-obstructive azoospermia,NOA)占了很大一部分。流行病學(xué)數(shù)據(jù)表明,成年男性NOA患病率將近1%,對(duì)于男性生殖有嚴(yán)重影響。因此,如何識(shí)別高危人群,針對(duì)性地開展篩查,早期診斷NOA是當(dāng)前面臨的重要挑戰(zhàn)。既往研究表明,NOA的形成是環(huán)境因素與遺傳因素共同作用的結(jié)果,其中遺傳因素約占男性不育因素的15%-30%。而在相同暴露因素下,遺傳背景的差異可能影響個(gè)體對(duì)NOA的易感性。目前已報(bào)道的遺傳因素包括:染色體數(shù)目異常,Y染色體微缺失,多種生物學(xué)通路中基因的突變以及常染色體多態(tài)等。在眾多遺傳因素中,單個(gè)常染色體多態(tài)位點(diǎn)的效應(yīng)比較弱,但是在人群中穩(wěn)定且普遍存在。近年來,全基因組關(guān)聯(lián)研究(Genome-wide Association Studies,GWAS)作為一種探索復(fù)雜疾病病因的強(qiáng)有力工具,已經(jīng)被應(yīng)用到了NOA病因的研究之中。該技術(shù)能快速篩查全基因組范圍內(nèi)的常見遺傳標(biāo)志以發(fā)現(xiàn)與特定表型相關(guān)的遺傳變異,所采用的研究樣本量較大,并通常輔以多個(gè)獨(dú)立的研究進(jìn)行后期的驗(yàn)證和篩選。前期,本課題組通過多階段病例對(duì)照研究先后發(fā)現(xiàn)了染色體1p13.3,1p36.32,1q42.13,6p21.32,6p22,10q25.3及12p12.1等七個(gè)區(qū)域的多個(gè)NOA易感基因,從遺傳角度出發(fā),解釋了部分noa的發(fā)病原因,提示遺傳變異在noa的發(fā)病中起著重要的作用。但是,gwas所發(fā)現(xiàn)的常見遺傳變異(最小等位基因頻率(minorallelefrequency,maf)≥5%)的效應(yīng)相對(duì)較弱(oddsratio,or:1.1-1.5),且88.9%位于基因非編碼區(qū)或荒漠區(qū),僅能解釋noa的小部分遺傳機(jī)制。而低頻遺傳變異(maf5%)的遺傳貢獻(xiàn)尚不明確,科學(xué)家們推測(cè)這類遺傳變異可能具有更大的效應(yīng),對(duì)其重要性的忽視或?yàn)檫z傳度遺失的重要原因之一。因此,有必要開展一項(xiàng)基于二代測(cè)序篩選技術(shù)的外顯子關(guān)聯(lián)研究(exome-wideassociationstudy,exwas),以系統(tǒng)研究低頻遺傳變異與中國男性noa遺傳易感性之間的關(guān)聯(lián)。本研究采用多階段病例對(duì)照研究設(shè)計(jì)對(duì)單個(gè)遺傳變異進(jìn)行研究:初篩階段所納入的病例為2005年4月至2012年1月在江蘇省生殖醫(yī)學(xué)中心收治的noa患者,共962例;對(duì)照為從2004年至2006年間在江蘇省參與社區(qū)慢性非傳染性疾病篩查的健康人群中隨機(jī)選取的男性個(gè)體(已婚育),共1,348例。一期驗(yàn)證納入了來源于江蘇及上海地區(qū)的714例noa病例及1,398例有健康生育史男性對(duì)照。二期驗(yàn)證則納入了來源于武漢及沈陽地區(qū)的1,454例noa病例及3,850例有健康生育史男性對(duì)照。初篩階段采用美國illumina公司的infinium#174;humanexomebeadchip芯片對(duì)962例noa病例及1,348例健康對(duì)照進(jìn)行基因分型,該芯片包含了從超過12,000個(gè)個(gè)體的全基因組測(cè)序和外顯子組測(cè)序數(shù)據(jù)中挑選出的247,870個(gè)遺傳變異。在對(duì)研究變量和研究對(duì)象進(jìn)行質(zhì)量控制后,共939例病例和1,335例對(duì)照、40,936個(gè)低頻遺傳變異進(jìn)入后續(xù)分析,后期采用logistic回歸模型在相加模型下計(jì)算遺傳變異關(guān)聯(lián)p值、比值比(oddsratio,or)值以及95%可信區(qū)間(confidenceinterval,ci)。滿足以下要求的位點(diǎn)納入一期驗(yàn)證:1)病例與對(duì)照關(guān)聯(lián)p值≤1.0×10-4;2)滿足上述標(biāo)準(zhǔn)的位點(diǎn)之間存在高連鎖不平衡(linkagedisequilibrium,ld)(r20.8)時(shí),僅納入p值最低的位點(diǎn);3)位點(diǎn)基因分型圖質(zhì)量較好,分簇清楚。一期驗(yàn)證的位點(diǎn)關(guān)聯(lián)分析結(jié)果滿足p≤0.05時(shí)將進(jìn)入二期驗(yàn)證。初篩階段,本研究除對(duì)單個(gè)遺傳位點(diǎn)進(jìn)行分析外,還運(yùn)用兩種方法進(jìn)行了以基因?yàn)榛A(chǔ)的關(guān)聯(lián)分析:Burden test的MAF界值為1%,共納入6,919個(gè)基因;SKAT-O(sequence kernel association optimal test)的MAF界值為5%,共納入7,979個(gè)基因進(jìn)入后續(xù)分析。最終本研究發(fā)現(xiàn)了3個(gè)與NOA發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)顯著相關(guān)的低頻遺傳變異。其中位于染色體6p22.2區(qū)域HISTIH1E基因上的低頻遺傳變異rs2298090及位于染色體6p21.33區(qū)域FKBPL基因上的低頻遺傳變異rs200847762均顯著降低了中國漢族男性患NOA的風(fēng)險(xiǎn)性(rs2298090 AG:OR=0.29,95%CI=0.21-0.40,P=6.93×10-14;rs200847762 GA:OR=0.10,95%CI=0.05-0.22,P=1.16×10-8);而位于染色體6p21.33區(qū)域MSH5基因上低頻遺傳變異rs11754464 GA與NOA發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的增加顯著相關(guān)(OR=1.78,95%CI=1.43-2.22,P=1.03×10-6)。條件分析(Conditional analysis)提示,該三個(gè)遺傳變異為染色體6p21.33、6p22.2區(qū)域NOA易感性的獨(dú)立效應(yīng)位點(diǎn)。此外,以基因?yàn)榛A(chǔ)的關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)CFTR基因與NOA發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)顯著相關(guān)(P=5.77×10-7)。但是,該基因上的與NOA相關(guān)性最顯著的遺傳變異rs113757788未能在一期江蘇及上海地區(qū)人群中得到驗(yàn)證。在剔除了該位點(diǎn)之后,CFTR基因與NOA的關(guān)聯(lián)未達(dá)到Bonferroni校正后的顯著性水平(P=5.05×10-3)。本研究首次在全外顯子范圍內(nèi)篩選了與NOA易感性相關(guān)的低頻遺傳變異,填補(bǔ)了這類GWAS所未能涉及到的遺傳變異與NOA發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)研究的空白。對(duì)識(shí)別和評(píng)價(jià)NOA的遺傳易感因素,探討NOA的遺傳易感機(jī)制,指導(dǎo)NOA的機(jī)制研究具有重要理論價(jià)值。
【關(guān)鍵詞】：非梗阻性無精子癥 遺傳易感性 低頻遺傳變異 高密度外顯子芯片
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R698.2
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-15
• 材料與方法15-30
• 結(jié)果30-48
• 討論48-51
• 總結(jié)51-52
• 參考文獻(xiàn)52-57
• 綜述57-77
• 參考文獻(xiàn)69-77
• 附錄一 主要縮略詞中英文對(duì)照77-78
• 附錄二 已發(fā)表論文78-80
• 致謝80-81

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 ;Expression and significance of Rap1A in testes ofazoospermic subjects[J];Asian Journal of Andrology;2004年01期

  本文關(guān)鍵詞：低頻遺傳變異與中國男性非梗阻性無精子癥遺傳易感性的關(guān)聯(lián)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：335872