第一部分過氧化氫誘導腎小管上皮細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激模型的建立目的:過氧化氫（H₂O₂）刺激人腎小管上皮細胞（HK-2細胞系）構建內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激體外模型,檢測肝再生增強因子（augmenter of liver regeneration,ALR）在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激過程中的表達。方法:用不同濃度的過氧化氫（100μM,200μM或400μM）處理HK-2細胞6h、12h或24h,檢測細胞活力以篩選最適處理條件。流式細胞儀檢測細胞活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平。Western blot檢測ALR在H₂O₂處理細胞3h、6h、12h、24h和48h后的蛋白表達水平。Western blot檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激標志蛋白GRP78（glucose-regulated protein 78）在200μM H₂O₂處理細胞12h的蛋白表達水平。結果:H₂O₂對HK-2細胞存活率的抑制呈濃度依賴性。腎小管上皮細胞中... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

過氧化氫對腎小管上皮細胞活力的影響

重慶醫(yī)科大學博士研究生學位論文圖 1.2 過氧化氫對腎小管上皮細胞活性氧 ROS 水平的影響 Effect of hydrogen peroxide on the level of reactive oxygen species RQuantification of the ROS level in HK-2 cells by DCFH-DA staining(B) The bar graph shows the statistical analysis of FITC fluorescencmeans P < 0.01.胞儀檢測 200μM H2O2處理 HK-2 細胞后 FITC 熒光強度得組的平均熒光值為 56±6.807；6h 組、12h 組和 24h 組 FITC.7±17.38、877.3±12.33 和 1588±56.64，反映細胞內(nèi) ROS間的延長而累積增多，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。氫對 HK-2 細胞 ALR 蛋白表達水平的影響

重慶醫(yī)科大學博士研究生學位論文用 200μM 的 H2O2分別處理腎小管上皮細胞 3h、6h、12h、24h 和 48h，提白檢測 ALR 的蛋白表達水平結果顯示（圖 1.3），ALR 的蛋白表達水平與對比，3hALR 的蛋白表達水平?jīng)]有顯著差異，6hALR 的蛋白表達水平顯著升0.05），12hALR 的蛋白表達水平顯著升高（P<0.05）并達到最大值，而后 2hALR 的蛋白表達水平下降。過氧化氫對 HK-2 細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激水平的影響


本文編號：3307037