發(fā)布時間：2017-04-26 19:15

  本文關(guān)鍵詞：巨噬細(xì)胞對前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3作用及機(jī)制的探討，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究巨噬細(xì)胞對人的前列腺癌細(xì)胞(PC-3)的增殖、凋亡、遷移和侵襲的影響及其對前列腺癌血管形成的作用,并探討其中的機(jī)制。方法:CD14+免疫磁珠法分選人外周血中的單核細(xì)胞,加入M-CSF(50ng/ml)誘導(dǎo)7天后將單核細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榫奘杉?xì)胞,然后將其極化為四個亞型;其中,加入無FBS的RPMI1640培養(yǎng)基誘導(dǎo)48h的巨噬細(xì)胞M0亞型,加入LPS(100ng/ml)和IFN-γ(100 ng/ml)共同刺激誘導(dǎo)過夜的巨噬細(xì)胞M1亞型,加入IL-4(20 ng/ml)刺激過夜的的巨噬細(xì)胞M2亞型,而在含有50%的PC-3條件培養(yǎng)基中培養(yǎng)誘導(dǎo)7天的單核細(xì)胞將會極化為TAM亞型,高內(nèi)涵細(xì)胞成像分析系統(tǒng)檢測四種巨噬細(xì)胞亞型表面標(biāo)志CD14/CD163表達(dá)水平的差異;熒光定量PCR檢測四種巨噬細(xì)胞亞型中IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12、IL-23、CXCL9、CCL13以及l(fā)et-7家族的m RNA的相對表達(dá)水平;ELISA酶聯(lián)免疫法檢測四種巨噬細(xì)胞亞型的上清液中TGF-β、TNF-α、IL-10、IL-12的表達(dá)水平;MTT法檢測四種巨噬細(xì)胞亞型對前列腺癌細(xì)胞PC-3增殖的作用差異;凋亡試劑盒檢測四種巨噬細(xì)胞亞型對前列腺癌細(xì)胞PC-3凋亡的影響;劃痕實驗法和Transwell小室法檢測四種巨噬細(xì)胞亞型對前列腺癌細(xì)胞PC-3遷移和侵襲的影響;體外血管形成實驗檢測四種巨噬細(xì)胞亞型對前列腺癌細(xì)胞PC-3血管生成的影響。結(jié)果:在四種亞型的巨噬細(xì)胞中,實時PCR檢測到細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、IL-12、IL-23與CXCL9在M1亞型中的m RNA表達(dá)水平顯著高于M0、M2和TAM亞型,而IL-10在M2亞型及TAM亞型中的m RNA表達(dá)水平顯著高于M0和M1亞型,CCL13在M2亞型中的m RNA表達(dá)量明顯高于其他三種亞型;ELISA酶聯(lián)免疫法檢測到IL-10與IL-12在四種亞型上清液中的表達(dá)趨勢和實時PCR的結(jié)果是一致的,TGF-β在TAM亞型上清液中是顯著高于其他三種亞型的,而TNF-α則是在M1亞型的上清液中表達(dá)水平最高;另外,熒光定量PCR還檢測到let-7家族中,m RNA的表達(dá)差異倍數(shù)最顯著的三個亞型分別是let-7b、let-7c和let-7g-5bp,其中l(wèi)et-7b和let-7c在TAM亞型中的m RNA的表達(dá)水平明顯高于其他三種亞型,而let-7g-5bp的m RNA的表達(dá)水平在M2亞型中是明顯升高的;M0和M1亞型的巨噬細(xì)胞能夠抑制前列腺癌細(xì)胞PC-3的增殖,M2和TAM亞型則能夠明顯促進(jìn)PC-3細(xì)胞的增殖;四種亞型的巨噬細(xì)胞對PC-3細(xì)胞的凋亡作用并沒有顯著的差異;M2和TAM亞型能顯著促進(jìn)PC-3細(xì)胞的遷移和侵襲能力,以及促進(jìn)前列腺癌的血管生成。結(jié)論:M1亞型的巨噬細(xì)胞能夠抑制前列腺癌細(xì)胞PC-3的增殖;M2亞型和TAM亞型能夠促進(jìn)PC-3細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲以及前列腺癌的血管形成能力;其作用機(jī)制可能與不同亞型巨噬細(xì)胞的細(xì)胞因子表達(dá)譜相關(guān);micro RNA let-7家族中l(wèi)et-7b與let-7g-5bp的差異表達(dá)可能會調(diào)控巨噬細(xì)胞的極化狀態(tài),抑制M1亞型轉(zhuǎn)變,促進(jìn)細(xì)胞向M2亞型極化。
【關(guān)鍵詞】：巨噬細(xì)胞 PC-3細(xì)胞 細(xì)胞因子 微小RNA let-7
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.25
【目錄】：

• 摘要3-5
• abstract5-9
• 中英文縮略詞表9-10
• 第1章 引言10-13
• 第2章 材料與方法13-24
• 2.1 實驗細(xì)胞株13
• 2.2 主要材料與試劑13-14
• 2.3 實驗主要儀器和設(shè)備14
• 2.4 主要試劑的配制14-15
• 2.5 實驗方法15-23
• 2.5.1 免疫磁珠法分離血液中單核細(xì)胞15-16
• 2.5.2 巨噬細(xì)胞的獲取及極化16
• 2.5.3 PC-3 和HUEVC的體外培養(yǎng)16-17
• 2.5.4 條件培養(yǎng)基的制備：17
• 2.5.5 熒光定量PCR分析巨噬細(xì)胞中相關(guān)細(xì)胞因子、趨化因子和micro RNA let-7 家族m RNA的相對表達(dá)水平17-20
• 2.5.6 ELISA法檢測細(xì)胞因子20-21
• 2.5.7 MTT檢測21
• 2.5.8 細(xì)胞凋亡率的檢測21-22
• 2.5.9 劃痕實驗22
• 2.5.10 Transwell侵襲實驗22-23
• 2.5.11體外血管生成實驗23
• 2.6 數(shù)據(jù)處理23-24
• 第3章 結(jié)果24-43
• 3.1 巨噬細(xì)胞亞型的形態(tài)學(xué)觀察及鑒定24-26
• 3.2 四種亞型的巨噬細(xì)胞對PC-3 細(xì)胞的影響26-34
• 3.2.1 四種亞型的巨噬細(xì)胞對PC-3 細(xì)胞增殖的影響26-27
• 3.2.2 四種亞型的巨噬細(xì)胞對PC-3 細(xì)胞凋亡的影響27-29
• 3.2.3 四種亞型的巨噬細(xì)胞對PC-3 細(xì)胞遷移的影響29-30
• 3.2.4 四種亞型的巨噬細(xì)胞對PC-3 細(xì)胞侵襲力的影響30-32
• 3.2.5 四種亞型的巨噬細(xì)胞對PC-3 細(xì)胞血管形成的影響32-34
• 3.3 四種亞型的巨噬細(xì)胞中相關(guān)的細(xì)胞因子、趨化因子以及micro RNAlet-7 家族表達(dá)水平的測定34-43
• 3.3.1 四種亞型的巨噬細(xì)胞中細(xì)胞因子表達(dá)水平的檢測34-39
• 3.3.2 四種亞型的巨噬細(xì)胞中趨化因子表達(dá)水平的檢測39-40
• 3.3.3 四種亞型的巨噬細(xì)胞中micro RNA let-7 家族表達(dá)水平的檢測40-43
• 第4章 討論43-48
• 第5章 結(jié)論48-49
• 致謝49-50
• 參考文獻(xiàn)50-54
• 綜述54-62
• 參考文獻(xiàn)59-62

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：329067