本文關(guān)鍵詞：雙氫青蒿素對前列腺癌PC-3細(xì)胞UCHL1基因表達(dá)的調(diào)控機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：研究雙氫青蒿素對人前列腺癌PC-3細(xì)胞株中抑癌基因UCHL1表達(dá)的影響,并探討其可能的調(diào)節(jié)機(jī)制。方法：PC-3細(xì)胞經(jīng)不同濃度(25、50和100μmol/L)的DHA處理48 h后,并設(shè)空白對照組。采用FCM法檢測各組細(xì)胞的凋亡率和細(xì)胞周期變化。采用免疫熒光染色法檢測UCHL1和DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶1(DNAmethyltransferase 1,DNMT1)蛋白在細(xì)胞內(nèi)的定位及表達(dá)量。蛋白質(zhì)印跡法檢測UCHL、DNMT1、磷酸化Akt(phosphorylated Akt,p-Akt)和Akt蛋白的表達(dá)；并且以1 pmol/L磷酸肌醇-3激酶(phosphoin-ositide 3-kinase, PI3K)家族抑制劑Wortmanin作為陽性對照,比較DHA處理組p-Akt蛋白的表達(dá)量。結(jié)果：DHA能明顯誘導(dǎo)PC-3細(xì)胞凋亡,并使細(xì)胞停滯在G2/M期,與空白對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。DHA處理組中DNMT1蛋白由細(xì)胞核轉(zhuǎn)到細(xì)胞質(zhì),與空白對照組比較,DNMT1蛋白在細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)中總的表達(dá)水平明顯下調(diào)(P0.05)；而UCHL1蛋白表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)明顯上調(diào)(P0.05)。與空白對照組比較,DHA處理組與陽性對照組中UCHL1蛋白表達(dá)均上調(diào),DNMT1表達(dá)水平均下降(均P0.05),p-Akt蛋白表達(dá)下調(diào)(P0.05,而Akt蛋白表達(dá)量無明顯變化(P0.05)；其中,高濃度DHA處理組中p-Akt蛋白表達(dá)下調(diào)更為顯著,更接近于陽性對照組。結(jié)論：DHA能夠抑制DNMT1的表達(dá),恢復(fù)UCHL1抑癌基因表達(dá),誘導(dǎo)前列腺癌PC-3細(xì)胞凋亡,阻滯細(xì)胞周期進(jìn)程,其作用機(jī)制可能與抑制PI3K/Akt信號通路的活性有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：前列腺腫瘤 雙氫青蒿素 DNA(胞嘧啶-5-)-甲基轉(zhuǎn)移酶 癌基因蛋白質(zhì)akt 泛素羧基末端水解酶1
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.25
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-14
• 參考文獻(xiàn)13-14
• 1 材料與方法14-15
• 1.1 細(xì)胞系14
• 1.2 主要試劑14
• 1.3 主要儀器14-15
• 1.4 藥物的配制15
• 2 實(shí)驗(yàn)方法15-21
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)15
• 2.2 PC-3細(xì)胞藥物處理及分組15-16
• 2.3 細(xì)胞收集16
• 2.4 FCM法檢測細(xì)胞凋亡率16
• 2.5 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期16-17
• 2.6 細(xì)胞免疫熒光染色法檢測UCHL1和DNMT1蛋白17-18
• 2.7 蛋白質(zhì)印跡法檢測UCHL1、DNMT1、p-Akt和Akt蛋白18-20
• 2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法20-21
• 3 結(jié)果21-27
• 3.1 DHA誘導(dǎo)前列腺癌PC-3細(xì)胞凋亡21
• 3.2 DHA誘導(dǎo)前列腺癌PC-3細(xì)胞發(fā)生G2/M期阻滯21-22
• 3.3 DHA作用后前列腺癌PC-3細(xì)胞內(nèi)UCHL1和DNMT1蛋白的定位及表達(dá)22-25
• 3.4 DHA作用后前列腺癌PC-3細(xì)胞中Akt信號通路相關(guān)蛋白的表達(dá)25-27
• 4. 討論27-31
• 4.1 目前臨床治療前列腺癌的方法27
• 4.2 DHA對人前列腺癌PC-3細(xì)胞的影響27-28
• 4.3 在前列腺癌PC-3細(xì)胞株中DNMT1是UCHL1抑癌基因表達(dá)的關(guān)鍵點(diǎn)28
• 4.4 DHA抑制DNMT1表達(dá)恢復(fù)UCHL1的抑癌作用與P13K/Akt通路有關(guān)28-31
• 5 附圖及說明31-33
• 全文總結(jié)33-34
• 參考文獻(xiàn)34-36
• 文獻(xiàn)綜述36-43
• 參考文獻(xiàn)41-43
• 致謝43-44
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄44

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本文編號：328494