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SB431542對高糖環(huán)境中小鼠足細胞Cdk5/p35表達的影響

發(fā)布時間:2021-07-15 08:21
  目的應用SB431542及Roscovitine處理高糖培養(yǎng)的足細胞,觀察抑制轉化生長因子(TGF)-β1通路對高糖培養(yǎng)足細胞中Cdk5/p35表達的影響及抑制Cdk5激酶活性對高糖和TGF-β1誘導足細胞凋亡的影響。方法采用不同濃度SB431542(0.1,1.0,10μmol/L)處理高糖培養(yǎng)的足細胞,Western印跡法及RT-PCR技術檢測各處理組Cdk5及p35蛋白和mRNA的表達變化情況。應用流式細胞術檢測Roscovitine對高糖及TGF-β1刺激足細胞凋亡的影響。結果高糖(HG組)Cdk5和p35的蛋白及mRNA表達水平明顯增高,顯著高于正常血糖組(NG)組和甘露醇組(M組)(P<0.05),并且呈時間依賴性升高。加入SB431542后,高糖培養(yǎng)導致的足細胞內Smad-2蛋白磷酸化水平明顯降低。同時,HG+SB431542組足細胞內Cdk5和p35的蛋白及mRNA表達水平呈濃度依賴性顯著降低,明顯低于HG組(P<0.05)。加入Roscovitine后,高糖及TGF-β1誘導足細胞的足細胞凋亡水平顯著下降(P<0.05)。結論高糖可能通過活化TGF-... 

【文章來源】:中國老年學雜志. 2016,36(08)北大核心CSCD

【文章頁數】:4 頁

【部分圖文】:

SB431542對高糖環(huán)境中小鼠足細胞Cdk5/p35表達的影響


Western印跡法檢測各組足細胞中Cdk5/p35蛋白的表達

足細胞,印跡


.03±1.59)%〕,明顯高于NG組〔(5.53±0.81)%,P<0.05〕,而應用Roscovitine后,HG+ROS組和TGF-β1+ROS組足細胞的凋亡率出現(xiàn)降低〔(14.65±1.57)%和(17.24±1.05)%〕,顯著低于高糖和TGF-β1培養(yǎng)的細胞(P<0.05)。見表3~表5。表2SB431542對高糖刺激足細胞中Cdk5/p35蛋白表達的影響(n=3,OD值,x±s)組別Cdk5p35NG組0.24±0.050.23±0.13HG3h組0.61±0.241)0.56±0.061)HG6h組0.88±0.221)0.77±0.181)HG12h組1.14±0.161)1.09±0.111)與NG組比較:1)P<0.05,表3同圖2Western印跡檢測不同濃度SB431542處理高糖培養(yǎng)足細胞后Cdk5/p35蛋白的表達表3Cdk5/p35mRNA在各組足細胞中的表達(n=3,x±s)組別Cdk5p35NG組1.00±0.231.00±0.11HG3h組2.12±0.251)4.56±0.541)HG6h組5.79±0.581)7.33±1.061)HG12h組9.66±0.931)12.7±1.371)表4Cdk5/p35、p-Smad-2蛋白在各組足細胞中的表達(n=3,OD值,x±s)組別Cdk5p35p-Smad-2NG組0.43±0.080.27±0.060.21±0.08HG組0.83±0.110.71±0.050.62±0.03HG+SB431542(0.1μmol/L)組0.49±0.081)2)0.41±0.081)2)0.37±0.111)2)HG+SB431542(1.0μmol/L)組0.34±0.071)2)0.21±0.041)2)0.16±0.061)2)HG+SB431542(10μmol/L)組0.11±0.051)2)0.07±0.031)2)0.04±0.021)2)與NG組比較:1)P<0.05;與HG組比較:2)P<0.05,下表同·1796·中國老年學雜志2016年4月第36卷

足細胞,Western印跡法


樣緩沖液,500μl/管(按1∶4用MilliQ水/滅菌蒸餾水稀釋),反復吹打均勻;分別加入5μlFITC標記的AnnexinV和5μlPI,混勻后避光室溫孵育10min,立即上流式細胞儀檢測結果。1.3統(tǒng)計學方法采用SPSS13.0軟件行方差分析。2結果2.1高糖對足細胞中Cdk5/p35表達的影響Western印跡法檢測結果顯示,HG組足細胞內Cdk5和p35的蛋白表達水平在高糖培養(yǎng)后有顯著增高,明顯高于NG組和M組(P<0.05,圖1),并且隨高糖培養(yǎng)時間的延長逐漸增高(圖1)。RT-PCR檢測結果顯示,Cdk5和p35的mRNA表達水平在HG組呈時間依賴性顯著升高(表1)。圖1Western印跡法檢測各組足細胞中Cdk5/p35蛋白的表達表1高糖對足細胞中Cdk5/p35蛋白表達的影響(n=3,OD值,x±s)組別Cdk5p35NG組0.27±0.020.25±0.03M組0.24±0.030.23±0.05HG組1.28±0.191)2)1.12±0.141)2)與NG組比較:1)P<0.05;與M組比較:2)P<0.052.2SB431542對高糖刺激足細胞中Cdk5/p35表達的影響Western印跡檢測結果顯示,應用SB431542后,HG+SB431542組足細胞中phospho-Smad-2蛋白表達水平顯著降低(圖2),提示高糖刺激引起的TGF-β1通路活化被抑制。應用SB431542后,HG+SB431542組足細胞中Cdk5和p35的蛋白表達水平有明顯降低,顯著低于NG組和HG組(P<0.05),并與SB431542的濃度密切相關,呈濃度依賴性降低,10μmol/LSB431542的抑制效果最顯著(圖2)。定量PCR的檢測結果顯示,HG+SB431542組足細胞內Cdk5和p35的mRNA表達水平同SB431542的濃度密切相關,呈濃度依賴性降低,顯著低于NG組和HG組(P<0.05,表2)。2.3抑制Cdk5激酶活性對高糖及TGF-β1刺激足細胞凋亡的影響高糖和TGF-β1培養(yǎng)足細胞后,細胞凋亡率顯著升高〔(20.01±1.72)%和(22.03±1.59)%〕,明顯高于NG組〔(5.5

【參考文獻】:
期刊論文
[1]Cdk5抑制劑Roscovitine對糖尿病大鼠腎功能及nestin表達的影響[J]. 張悅,周毅,張怡,劉巍.  中國藥理學通報. 2013(08)



本文編號:3285350

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