SB431542對高糖環(huán)境中小鼠足細胞Cdk5/p35表達的影響
發(fā)布時間：2021-07-15 08:21
目的應用SB431542及Roscovitine處理高糖培養(yǎng)的足細胞,觀察抑制轉化生長因子（TGF）-β1通路對高糖培養(yǎng)足細胞中Cdk5/p35表達的影響及抑制Cdk5激酶活性對高糖和TGF-β1誘導足細胞凋亡的影響。方法采用不同濃度SB431542（0.1,1.0,10μmol/L）處理高糖培養(yǎng)的足細胞,Western印跡法及RT-PCR技術檢測各處理組Cdk5及p35蛋白和mRNA的表達變化情況。應用流式細胞術檢測Roscovitine對高糖及TGF-β1刺激足細胞凋亡的影響。結果高糖（HG組）Cdk5和p35的蛋白及mRNA表達水平明顯增高,顯著高于正常血糖組（NG）組和甘露醇組（M組）（P<0.05）,并且呈時間依賴性升高。加入SB431542后,高糖培養(yǎng)導致的足細胞內Smad-2蛋白磷酸化水平明顯降低。同時,HG+SB431542組足細胞內Cdk5和p35的蛋白及mRNA表達水平呈濃度依賴性顯著降低,明顯低于HG組（P<0.05）。加入Roscovitine后,高糖及TGF-β1誘導足細胞的足細胞凋亡水平顯著下降（P<0.05）。結論高糖可能通過活化TGF-...
【文章來源】：中國老年學雜志. 2016,36(08)北大核心CSCD
【文章頁數】：4 頁
【部分圖文】：
Western印跡法檢測各組足細胞中Cdk5/p35蛋白的表達
.03±1.59)%〕，明顯高于NG組〔(5.53±0.81)%，P＜0.05〕，而應用Ｒoscovitine后，HG+ＲOS組和TGF-β1+ＲOS組足細胞的凋亡率出現(xiàn)降低〔(14.65±1.57)%和(17.24±1.05)%〕，顯著低于高糖和TGF-β1培養(yǎng)的細胞(P＜0.05)。見表3～表5。表2SB431542對高糖刺激足細胞中Cdk5/p35蛋白表達的影響(n=3，OD值，x±s)組別Cdk5p35NG組0．24±0．050．23±0．13HG3h組0．61±0．241)0．56±0．061)HG6h組0．88±0．221)0．77±0．181)HG12h組1．14±0．161)1．09±0．111)與NG組比較:1)P＜0．05，表3同圖2Western印跡檢測不同濃度SB431542處理高糖培養(yǎng)足細胞后Cdk5/p35蛋白的表達表3Cdk5/p35mＲNA在各組足細胞中的表達(n=3，x±s)組別Cdk5p35NG組1．00±0．231．00±0．11HG3h組2．12±0．251)4．56±0．541)HG6h組5．79±0．581)7．33±1．061)HG12h組9．66±0．931)12．7±1．371)表4Cdk5/p35、p-Smad-2蛋白在各組足細胞中的表達(n=3，OD值，x±s)組別Cdk5p35p-Smad-2NG組0．43±0．080．27±0．060．21±0．08HG組0．83±0．110．71±0．050．62±0．03HG+SB431542(0．1μmol/L)組0．49±0．081)2)0．41±0．081)2)0．37±0．111)2)HG+SB431542(1．0μmol/L)組0．34±0．071)2)0．21±0．041)2)0．16±0．061)2)HG+SB431542(10μmol/L)組0．11±0．051)2)0．07±0．031)2)0．04±0．021)2)與NG組比較:1)P＜0．05;與HG組比較:2)P＜0．05，下表同·1796·中國老年學雜志2016年4月第36卷
樣緩沖液，500μl/管(按1∶4用MilliQ水/滅菌蒸餾水稀釋)，反復吹打均勻;分別加入5μlFITC標記的AnnexinV和5μlPI，混勻后避光室溫孵育10min，立即上流式細胞儀檢測結果。1.3統(tǒng)計學方法采用SPSS13.0軟件行方差分析。2結果2.1高糖對足細胞中Cdk5/p35表達的影響Western印跡法檢測結果顯示，HG組足細胞內Cdk5和p35的蛋白表達水平在高糖培養(yǎng)后有顯著增高，明顯高于NG組和M組(P＜0.05，圖1)，并且隨高糖培養(yǎng)時間的延長逐漸增高(圖1)。ＲT-PCＲ檢測結果顯示，Cdk5和p35的mＲNA表達水平在HG組呈時間依賴性顯著升高(表1)。圖1Western印跡法檢測各組足細胞中Cdk5/p35蛋白的表達表1高糖對足細胞中Cdk5/p35蛋白表達的影響(n=3，OD值，x±s)組別Cdk5p35NG組0．27±0．020．25±0．03M組0．24±0．030．23±0．05HG組1．28±0．191)2)1．12±0．141)2)與NG組比較:1)P＜0．05;與M組比較:2)P＜0．052.2SB431542對高糖刺激足細胞中Cdk5/p35表達的影響Western印跡檢測結果顯示，應用SB431542后，HG+SB431542組足細胞中phospho-Smad-2蛋白表達水平顯著降低(圖2)，提示高糖刺激引起的TGF-β1通路活化被抑制。應用SB431542后，HG+SB431542組足細胞中Cdk5和p35的蛋白表達水平有明顯降低，顯著低于NG組和HG組(P＜0.05)，并與SB431542的濃度密切相關，呈濃度依賴性降低，10μmol/LSB431542的抑制效果最顯著(圖2)。定量PCＲ的檢測結果顯示，HG+SB431542組足細胞內Cdk5和p35的mＲNA表達水平同SB431542的濃度密切相關，呈濃度依賴性降低，顯著低于NG組和HG組(P＜0.05，表2)。2.3抑制Cdk5激酶活性對高糖及TGF-β1刺激足細胞凋亡的影響高糖和TGF-β1培養(yǎng)足細胞后，細胞凋亡率顯著升高〔(20.01±1.72)%和(22.03±1.59)%〕，明顯高于NG組〔(5.5
【參考文獻】：
期刊論文
[1]Cdk5抑制劑Roscovitine對糖尿病大鼠腎功能及nestin表達的影響[J]. 張悅,周毅,張怡,劉巍. 中國藥理學通報. 2013(08)
本文編號：3285350
【文章來源】：中國老年學雜志. 2016,36(08)北大核心CSCD
【文章頁數】：4 頁
【部分圖文】：
Western印跡法檢測各組足細胞中Cdk5/p35蛋白的表達
.03±1.59)%〕，明顯高于NG組〔(5.53±0.81)%，P＜0.05〕，而應用Ｒoscovitine后，HG+ＲOS組和TGF-β1+ＲOS組足細胞的凋亡率出現(xiàn)降低〔(14.65±1.57)%和(17.24±1.05)%〕，顯著低于高糖和TGF-β1培養(yǎng)的細胞(P＜0.05)。見表3～表5。表2SB431542對高糖刺激足細胞中Cdk5/p35蛋白表達的影響(n=3，OD值，x±s)組別Cdk5p35NG組0．24±0．050．23±0．13HG3h組0．61±0．241)0．56±0．061)HG6h組0．88±0．221)0．77±0．181)HG12h組1．14±0．161)1．09±0．111)與NG組比較:1)P＜0．05，表3同圖2Western印跡檢測不同濃度SB431542處理高糖培養(yǎng)足細胞后Cdk5/p35蛋白的表達表3Cdk5/p35mＲNA在各組足細胞中的表達(n=3，x±s)組別Cdk5p35NG組1．00±0．231．00±0．11HG3h組2．12±0．251)4．56±0．541)HG6h組5．79±0．581)7．33±1．061)HG12h組9．66±0．931)12．7±1．371)表4Cdk5/p35、p-Smad-2蛋白在各組足細胞中的表達(n=3，OD值，x±s)組別Cdk5p35p-Smad-2NG組0．43±0．080．27±0．060．21±0．08HG組0．83±0．110．71±0．050．62±0．03HG+SB431542(0．1μmol/L)組0．49±0．081)2)0．41±0．081)2)0．37±0．111)2)HG+SB431542(1．0μmol/L)組0．34±0．071)2)0．21±0．041)2)0．16±0．061)2)HG+SB431542(10μmol/L)組0．11±0．051)2)0．07±0．031)2)0．04±0．021)2)與NG組比較:1)P＜0．05;與HG組比較:2)P＜0．05，下表同·1796·中國老年學雜志2016年4月第36卷
樣緩沖液，500μl/管(按1∶4用MilliQ水/滅菌蒸餾水稀釋)，反復吹打均勻;分別加入5μlFITC標記的AnnexinV和5μlPI，混勻后避光室溫孵育10min，立即上流式細胞儀檢測結果。1.3統(tǒng)計學方法采用SPSS13.0軟件行方差分析。2結果2.1高糖對足細胞中Cdk5/p35表達的影響Western印跡法檢測結果顯示，HG組足細胞內Cdk5和p35的蛋白表達水平在高糖培養(yǎng)后有顯著增高，明顯高于NG組和M組(P＜0.05，圖1)，并且隨高糖培養(yǎng)時間的延長逐漸增高(圖1)。ＲT-PCＲ檢測結果顯示，Cdk5和p35的mＲNA表達水平在HG組呈時間依賴性顯著升高(表1)。圖1Western印跡法檢測各組足細胞中Cdk5/p35蛋白的表達表1高糖對足細胞中Cdk5/p35蛋白表達的影響(n=3，OD值，x±s)組別Cdk5p35NG組0．27±0．020．25±0．03M組0．24±0．030．23±0．05HG組1．28±0．191)2)1．12±0．141)2)與NG組比較:1)P＜0．05;與M組比較:2)P＜0．052.2SB431542對高糖刺激足細胞中Cdk5/p35表達的影響Western印跡檢測結果顯示，應用SB431542后，HG+SB431542組足細胞中phospho-Smad-2蛋白表達水平顯著降低(圖2)，提示高糖刺激引起的TGF-β1通路活化被抑制。應用SB431542后，HG+SB431542組足細胞中Cdk5和p35的蛋白表達水平有明顯降低，顯著低于NG組和HG組(P＜0.05)，并與SB431542的濃度密切相關，呈濃度依賴性降低，10μmol/LSB431542的抑制效果最顯著(圖2)。定量PCＲ的檢測結果顯示，HG+SB431542組足細胞內Cdk5和p35的mＲNA表達水平同SB431542的濃度密切相關，呈濃度依賴性降低，顯著低于NG組和HG組(P＜0.05，表2)。2.3抑制Cdk5激酶活性對高糖及TGF-β1刺激足細胞凋亡的影響高糖和TGF-β1培養(yǎng)足細胞后，細胞凋亡率顯著升高〔(20.01±1.72)%和(22.03±1.59)%〕，明顯高于NG組〔(5.5
【參考文獻】：
期刊論文
[1]Cdk5抑制劑Roscovitine對糖尿病大鼠腎功能及nestin表達的影響[J]. 張悅,周毅,張怡,劉巍. 中國藥理學通報. 2013(08)
本文編號：3285350
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