研究背景慢性腎臟病已成為全世界“公共健康問(wèn)題”。2010年,全球約260萬(wàn)尿毒癥患者因腎功能喪失而需依賴透析或者腎移植來(lái)維持生命,約230萬(wàn)到710萬(wàn)名患者因無(wú)條件接受透析或腎移植治療而過(guò)早死亡。因此,任何能夠防止或延緩慢性腎臟病發(fā)展至尿毒癥的策略都具有極其重要的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)意義,發(fā)現(xiàn)干預(yù)腎纖維化的新靶點(diǎn)是創(chuàng)建臨床防治慢性腎臟病策略的第一步。腎臟纖維化是各種進(jìn)展性腎臟病發(fā)展為終末期腎衰竭的共同通路。TGF-β被認(rèn)為是致腎臟纖維化最重要最強(qiáng)烈的誘導(dǎo)因子之一,在多種腎臟細(xì)胞中都具有促纖維化的作用,包括腎小管上皮細(xì)胞。TGF-β首先與TGF-β Ⅱ型受體（TβRⅡ）結(jié)合,TβRⅡ磷酸化TGF-β Ⅰ型受體（TβRI）,活化的TβRI可以招募并磷酸化Smad2和Smad3,磷酸化的Smad2和Smad3與Smad4結(jié)合并共同進(jìn)入細(xì)胞核,在細(xì)胞核內(nèi)調(diào)控促纖維化基因的轉(zhuǎn)錄,Smad3蛋白的磷酸化過(guò)程被認(rèn)為是整個(gè)通路的核心環(huán)節(jié)。既往關(guān)于腎臟纖維化的研究主要集中于關(guān)鍵蛋白的編碼基因上,即傳統(tǒng)的關(guān)鍵基因突變導(dǎo)致其編碼的蛋白發(fā)生改變進(jìn)而引起生物學(xué)功能的異常。然而,隨著分子生物學(xué)機(jī)制研究的深入,人們發(fā)現(xiàn)表觀遺... 

【文章來(lái)源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁(yè)數(shù)】：128 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１－３小干擾ＲＮＡ敲降候選ＩｎｃＲＮＡｓ后觀察ＴＧＦ－ｐｉ所致的促纖維化基因的表達(dá)??Ｆｉｇ．?１－３?Ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ｆｉｂｒｏｇｅｎｉｃ??

??的蛋白表達(dá)，敲降／ｎｃ－ｒａ／的效率如圖２－１?Ａ所示。我們將／ｎｃ－ｒｓ／的ｓｉＲＮＡ序列??克隆至ｐＬＶ３／Ｈｌ／ＧＦＰ＋Ｐｕｒｏ載體上包裝慢病毒后感染ＨＫ２和ＨＫＣ８細(xì)胞，結(jié)果??顯示兩種ｓｈＲＮＡ慢病毒可以有效降低／／７ｃ－；Ｔ５／的表達(dá)水平（Ｐ＜０．００１）（圖２－１??Ｂ＆Ｃ）。我們檢測(cè)敲降／／？〇７＂５７后對(duì)促纖維化基因表達(dá)的影卩向，Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ顯不??在ＴＧＦ－ｐｌ作用下，相比較于敲降陰性對(duì)照組，ＣＯＬ?Ｉ、ａＳＭＡ及ＳＮＡＩＬ的蛋??白水平明顯升高（Ｐ＜０．０１）（圖２－１?Ｄ），與之前的結(jié)果一致。這些結(jié)果表明／ｒｔｃ－７＾／??可以抑制ＴＧＦ－ｐｉ所致的促纖維化基因的表達(dá)。??Ａ?Ｂ?Ｃ??ＰＢＳ?ＭＴＧＦ－ｐｌ?ＰＢＳ?ＢＢＴＧＦ－ｐｌ?ＰＢＳ?？ｉＴＧＦ－ｐｉ??＾?Ｐ＜００Ｑ１?ｙ，?＾－〇〇〇１?＾??ｐ．０００１?ＥＨ２２１?ｐｉ?—１〇ｌ?Ｐ＜０００１??ｆｐＢ－?ｉ＼?ｔｉｌ８－?ｉ?齋嚴(yán)??ｉｌｌ６－１?ｉｐ６－１?ｉ°ｉ６－?ｉ??ｇ－Ｊ?Ｉ?４－?Ｊ?Ｘ?ｖｌｌ?４－?ｇ－１?０?４－??ｉｉｉ：ｌｉｔｌ?�。椋椋海欤欤欤�?ｍｉｌｉｉ??＃ｖ°?／／??Ｄ?ｃ，?＾?

在過(guò)表達(dá)／？ｃ－７３／的細(xì)胞中，細(xì)胞核中的綠色熒光明顯較弱，主要的??綠色熒光信號(hào)仍然處于細(xì)胞質(zhì)中；而用兩條ｓｉＲＮＡ分別敲降／ａ７ｃ－；Ｔ５７的細(xì)胞中，??代表Ｓｍａｄ３的綠色熒光信號(hào)則幾乎全部位于細(xì)胞核內(nèi)（圖２－５）。??ＰＢＳ??ＴＧＦ－｜３１（２ｈ）???－?ｖｅｃｔｏｒ?ｌｎｃ－ＴＳ?Ｉ?ｓｉＮＣ?ｓｉｌｎｃ－７ＳＩ－１?ｓ＼＼ｎｃ－ＴＳ＼－２??圖２－５免疫熒光顯示ｈｃ－ｒｓ／可以抑制ＴＧＦ－ｐｉ所致的Ｓｍａｄ３核轉(zhuǎn)位??Ｆｉｇ．?２－５?Ｃｏｆｏｃａｌ?ｉｍａｇｅｓ?ｓｈｏｗｉｎｇ?ｔｈａｔ?Ｉｎｃ－ＴＳＩ?ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ?ＴＧＦ－ｐｌ－ｉｎｄｕｃｅｄ?ｎｕｃｌｅａｒ?ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ?ｏｆ??Ｓｍａｄ３??熒光共聚焦顯微鏡拍照顯示過(guò)表達(dá)／？ｃ－；Ｔ５７可以抑制ＴＧＦ－（３ｌ所致的Ｓｍａｄ３??的核轉(zhuǎn)位，而敲降／ｎｃ－７１Ｓ／可以增強(qiáng)ＴＧＦ－ｐｉ所致的Ｓｍａｄ３的核轉(zhuǎn)位。Ａｃｔｉｎ??ｆｉｌａｍｅｎｔｓ：肌動(dòng)蛋白微絲。ＤＡＰＩ：?４’，６－二脒基－２－苯基卩引口朵。??５４??


本文編號(hào)：3269331