目的:分析并闡明酒精對原代睪丸間質(zhì)祖細(xì)胞（PLC）雄激素合成的調(diào)控機(jī)制,為日后臨床診斷和治療免疫相關(guān)及酒精作用導(dǎo)致的男性性腺機(jī)能低下、生殖障礙及睪酮缺乏等疾病提供新的靶標(biāo)和治療方法。方法:首先以不同濃度的酒精分別處理PLC,然后通過分子生物學(xué)及放射性酶聯(lián)免疫方法（RIA）檢測PLC中雄激素合成酶的表達(dá)量及雄激素產(chǎn)量。然后,利用RT-PCR方法,分析PLC中miR-299a-5p的表達(dá)量。其次,利用轉(zhuǎn)錄組測序的方法（RNA-Seq）從基因表達(dá)水平上分析抑制miR-299a-5p的表達(dá)對不同發(fā)育階段LC雄激素合成及其調(diào)控具體靶標(biāo)。使用免疫沉淀方法（CO-IP）結(jié)合信息學(xué)方法,分析miR-299a-5p及其調(diào)控靶標(biāo)NFκB1介導(dǎo)的信號通路。最后,以長效miR-299a-5p抑制劑進(jìn)行睪丸內(nèi)局部注射,從動物實驗驗證該miRNA調(diào)控PLC雄激素的合成功能。結(jié)果:RIA測定結(jié)果顯示,終濃度為30μM,120μM和480μM酒精可使PLC合成孕酮的產(chǎn)量分別為4.62±0.13,3.56±0.41及0.91±0.43 ng/106細(xì)胞,與對照組相比,分別下降了26.4%,42.6%和85%。RT-PC... 

【文章來源】：暨南大學(xué)廣東省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同發(fā)育階段LC及其雄激素合成過程

圖1.1不同發(fā)育階段LC及其雄激素合成過程ubstrates,products and gene expression of Key Enzymes from androgen synthedifferent developmental stages示實際合成激素通路，綠色虛線表示不能合成激素通路，紅色框內(nèi)表示在LC中都表達(dá)的雄激素合成酶）

圖1.3野生型及IGF-1敲除老鼠生殖系統(tǒng)大小的比較mparison of reproductive system size between wild type and IGF-1 k（左邊: 野生型；右邊：IGF-1敲除）長因子 3（INSL-3）是 LC 增殖分化的標(biāo)志性蛋白，可標(biāo)映 LC 的功能狀況[46]，對 LC 雄激素合成以及精子發(fā)生都SL-3 蛋白的表達(dá)量是隨著 LC 譜系的發(fā)育以及 LC 數(shù)量的INSL-3 在 LC 中為組成型表達(dá)，不受 cAMP 等多種內(nèi)外源 INSL-3 會導(dǎo)致隱睪、骨質(zhì)疏松及精子發(fā)育不良[49-51]。胰進(jìn) LC 增殖和 LHCGR 的表達(dá)[52, 53]。轉(zhuǎn)基因小鼠模型結(jié)果質(zhì)干細(xì)胞的數(shù)量，但抑制其增殖和分化，最終導(dǎo)致動物睪血清睪酮水平低下[52, 53]。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]大鼠睪丸Leydig細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定[J]. 劉建中,郭海彬,鄧春華,歐詠虹,彭愛萍.  中華男科學(xué)雜志. 2006(01)
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[3]酒精對大鼠生殖細(xì)胞損傷的研究[J]. 劉長云,楊利麗,杜玉華,盧映,張培森,王永芹,童祥華,張志清,孫思祿.  濰坊醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2000(04)
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博士論文
[1]小鼠卵泡發(fā)育過程中MiRNA-383和MiRNA-320的功能研究[D]. 陰棉棉.中國科學(xué)技術(shù)大學(xué) 2013



本文編號：3264601