發(fā)布時(shí)間：2021-06-26 02:46

　　【目的】尿蛋白是加速慢性腎臟病進(jìn)展的重要驅(qū)動(dòng)因素。白蛋白是尿蛋白的主要成分,可通過多種機(jī)制誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞損傷。線粒體損傷和功能障礙是白蛋白誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞損傷的重要原因之一。線粒體自噬能選擇性地清除功能失調(diào)或受損的線粒體,在維持線粒體穩(wěn)態(tài)中具有重要作用。我們前期的研究表明,白蛋白超負(fù)荷通過PINK1/Parkin通路增強(qiáng)了近端腎小管上皮細(xì)胞中的線粒體自噬,然而增強(qiáng)的線粒體自噬在白蛋白超負(fù)荷模型中的具體作用目前仍不清楚。因此,本研究應(yīng)用Parkin siRNA和Parkin過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的方法對白蛋白超負(fù)荷模型中的線粒體自噬進(jìn)行調(diào)控,檢測人近端腎小管上皮細(xì)胞中線粒體功能、氧化應(yīng)激水平及細(xì)胞損傷的變化,進(jìn)一步探索PINK1/Parkin通路介導(dǎo)的線粒體自噬在白蛋白超負(fù)荷所致近端腎小管上皮細(xì)胞損傷中的作用及機(jī)制�！痉椒ā浚�1）研究對象:人近端腎小管上皮細(xì)胞（HK-2）。（2）尿白蛋白超負(fù)荷模型:用人血清白蛋白（8mg/ml）處理體外培養(yǎng)的HK-2細(xì)胞8h。（3）siRNA轉(zhuǎn)染及分組:應(yīng)用Parkin siRNA轉(zhuǎn)染干預(yù)線粒體自噬,設(shè)置對照組（Ctrl）、白蛋白組（ALB）、陰性對照si... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

ParkinsiRNA轉(zhuǎn)染后白蛋白超負(fù)荷模型中線粒體溶酶體共定位的變化

圖2 Parkin過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后白蛋白超負(fù)荷模型中線粒體溶酶體共定位的變化注： Ctrl：對照組；ALB：白蛋白組；Vehi +ALB：empty vector+白蛋白組；Parkin+ALB：Parkin 過表達(dá)質(zhì)粒+白蛋白組2.1.2 通過免疫印跡技術(shù)檢測 Parkin siRNA 轉(zhuǎn)染及 Parkin 過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后白蛋白超負(fù)荷模型中線粒體自噬的變化為了進(jìn)一步證實(shí)熒光探針雙染所見，我們通過免疫印跡技術(shù)檢測各組 HK-2細(xì)胞中線粒體自噬關(guān)鍵調(diào)節(jié)蛋白 Pink1 和 Parkin 及自噬標(biāo)記蛋白 LC3-II 和 p62的表達(dá)情況。圖 3 的結(jié)果表明：①與對照組相比，白蛋白組和 scrambled siRNA+白蛋白組中 Pink1、Parkin 和 LC3-II 的表達(dá)水平顯著增加，p62 的表達(dá)水平顯著減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；②白蛋白組與 scrambled siRNA+白蛋白組比較，Pink1、Parkin、LC3-II 和 p62 的表達(dá)水平無明顯變化（P>0.05）；③與 scrambled siRNA+白蛋白組相比，Parkin siRNA+白蛋白組的 HK-2 細(xì)胞中Parkin 蛋白的表達(dá)水平顯著降低，Pink1 和 LC3-II 的表達(dá)水平也顯著降低，并且p62 的表達(dá)水平顯著增加，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。此外，圖 4 的結(jié)果表明：①與對照組相比，白蛋白組和 empty vector+白蛋

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文白組中 Pink1、Parkin 和 LC3-II 的表達(dá)水平均顯著增加，p62 的表達(dá)水平均顯著減少，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；②白蛋白組與 empty vector+白蛋白組比較，Pink1、Parkin、LC3-II 和 p62 的表達(dá)水平均無明顯變化（P>0.05）；③與empty vector+白蛋白組相比，Parkin 過表達(dá)質(zhì)粒+白蛋白組的 HK-2 細(xì)胞中 Pink1、Parkin 和 LC3-II 的表達(dá)水平均顯著增加，p62 的表達(dá)水平顯著減低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。以上這些結(jié)果表明，Pink1/Parkin 通路參與了白蛋白超負(fù)荷模型中線粒體自噬的激活，Parkin siRNA 轉(zhuǎn)染可抑制白蛋白超負(fù)荷模型中線粒體自噬的激活，而 Parkin 過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染增強(qiáng)了白蛋白超負(fù)荷模型中線粒體自噬的激活。


本文編號：3250472