發(fā)布時間：2021-06-26 02:46

　　【目的】尿蛋白是加速慢性腎臟病進展的重要驅動因素。白蛋白是尿蛋白的主要成分,可通過多種機制誘導腎小管上皮細胞損傷。線粒體損傷和功能障礙是白蛋白誘導腎小管上皮細胞損傷的重要原因之一。線粒體自噬能選擇性地清除功能失調或受損的線粒體,在維持線粒體穩(wěn)態(tài)中具有重要作用。我們前期的研究表明,白蛋白超負荷通過PINK1/Parkin通路增強了近端腎小管上皮細胞中的線粒體自噬,然而增強的線粒體自噬在白蛋白超負荷模型中的具體作用目前仍不清楚。因此,本研究應用Parkin siRNA和Parkin過表達質粒轉染的方法對白蛋白超負荷模型中的線粒體自噬進行調控,檢測人近端腎小管上皮細胞中線粒體功能、氧化應激水平及細胞損傷的變化,進一步探索PINK1/Parkin通路介導的線粒體自噬在白蛋白超負荷所致近端腎小管上皮細胞損傷中的作用及機制�！痉椒ā浚�1）研究對象:人近端腎小管上皮細胞（HK-2）。（2）尿白蛋白超負荷模型:用人血清白蛋白（8mg/ml）處理體外培養(yǎng)的HK-2細胞8h。（3）siRNA轉染及分組:應用Parkin siRNA轉染干預線粒體自噬,設置對照組（Ctrl）、白蛋白組（ALB）、陰性對照si... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

ParkinsiRNA轉染后白蛋白超負荷模型中線粒體溶酶體共定位的變化

圖2 Parkin過表達質粒轉染后白蛋白超負荷模型中線粒體溶酶體共定位的變化注： Ctrl：對照組；ALB：白蛋白組；Vehi +ALB：empty vector+白蛋白組；Parkin+ALB：Parkin 過表達質粒+白蛋白組2.1.2 通過免疫印跡技術檢測 Parkin siRNA 轉染及 Parkin 過表達質粒轉染后白蛋白超負荷模型中線粒體自噬的變化為了進一步證實熒光探針雙染所見，我們通過免疫印跡技術檢測各組 HK-2細胞中線粒體自噬關鍵調節(jié)蛋白 Pink1 和 Parkin 及自噬標記蛋白 LC3-II 和 p62的表達情況。圖 3 的結果表明：①與對照組相比，白蛋白組和 scrambled siRNA+白蛋白組中 Pink1、Parkin 和 LC3-II 的表達水平顯著增加，p62 的表達水平顯著減少，差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；②白蛋白組與 scrambled siRNA+白蛋白組比較，Pink1、Parkin、LC3-II 和 p62 的表達水平無明顯變化（P>0.05）；③與 scrambled siRNA+白蛋白組相比，Parkin siRNA+白蛋白組的 HK-2 細胞中Parkin 蛋白的表達水平顯著降低，Pink1 和 LC3-II 的表達水平也顯著降低，并且p62 的表達水平顯著增加，差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。此外，圖 4 的結果表明：①與對照組相比，白蛋白組和 empty vector+白蛋

天津醫(yī)科大學碩士學位論文白組中 Pink1、Parkin 和 LC3-II 的表達水平均顯著增加，p62 的表達水平均顯著減少，差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；②白蛋白組與 empty vector+白蛋白組比較，Pink1、Parkin、LC3-II 和 p62 的表達水平均無明顯變化（P>0.05）；③與empty vector+白蛋白組相比，Parkin 過表達質粒+白蛋白組的 HK-2 細胞中 Pink1、Parkin 和 LC3-II 的表達水平均顯著增加，p62 的表達水平顯著減低，差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。以上這些結果表明，Pink1/Parkin 通路參與了白蛋白超負荷模型中線粒體自噬的激活，Parkin siRNA 轉染可抑制白蛋白超負荷模型中線粒體自噬的激活，而 Parkin 過表達質粒轉染增強了白蛋白超負荷模型中線粒體自噬的激活。


本文編號：3250472