本文關(guān)鍵詞：NCOA5在腎癌中的基礎(chǔ)與臨床研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:檢測腎上皮細(xì)胞株293、HK2,腎癌細(xì)胞株ACHN、OS-RC-2,以及腎癌組織中NCOA5的表達(dá),分析NCOA5與腎癌患者臨床特點之間的關(guān)系;建立高表達(dá)NCOA5的腎癌穩(wěn)定株細(xì)胞,研究NCOA5對細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的影響。方法:(1)用Western blot檢測腎上皮細(xì)胞株293、HK2,腎癌細(xì)胞株ACHN、OS-RC-2中NCOA5的表達(dá),統(tǒng)計分析腎上皮細(xì)胞與腎癌細(xì)胞中NCOA5表達(dá)的差異。(2)用免疫組化檢測臨床腎癌組織標(biāo)本中NCOA5的表達(dá),統(tǒng)計分析NCOA5表達(dá)與臨床特點之間的關(guān)系。(3)通過含有NCOA5基因的慢病毒及空載體慢病毒感染腎癌細(xì)胞ACHN和OS-RC-2,流式細(xì)胞儀分選并建立高表達(dá)NCOA5的腎癌穩(wěn)定株。(4)用Western blot檢測轉(zhuǎn)染NCOA5基因前后,腎癌細(xì)胞株中NCOA5蛋白的表達(dá),統(tǒng)計分析是否有差異。(5)用CCK-8法、細(xì)胞劃痕及Transwell實驗分別檢測轉(zhuǎn)染NCOA5對腎癌細(xì)胞的生長增殖、細(xì)胞侵襲及遷移等影響。結(jié)果:(1)Western blot結(jié)果顯示293、HK2、ACHN、OS-RC-2細(xì)胞中NCOA5的相對表達(dá)量分別為0.52±0.02、0.34±0.01、0.11±0.02、0.04±0.02,293細(xì)胞株中NCOA5的表達(dá)量最高,OS-RC-2中NCOA5表達(dá)量最低,而腎癌細(xì)胞株中NCOA5的表達(dá)水平低于腎上皮細(xì)胞中的表達(dá)。(2)免疫組化結(jié)果顯示14例腎癌病例中NCOA5陽性表達(dá)9例,陽性率為64.3%,癌旁組織中NCOA5均為陽性表達(dá)(x2=6.087、P=0.0410.05),表明NCOA5在腎癌中的表達(dá)低于癌旁組織。分析顯示腎癌組織中NCOA5的表達(dá)高低還與患者年齡、腫瘤最大直徑、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期情況、核分化等級顯著相關(guān)(x2=7.778、10.370、5.833、5.833、7.778,p=0.021、0.003、0.031、0.031、0.021均0.05)。而與患者性別、病理類型、腫瘤部位無顯著相關(guān)(x2=4.321、2.121、0.026,p=0.086、0.258、1.000均0.05)。在年齡大、腫瘤直徑大、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、高臨床分期、高的核分化等級的病例中,NCOA5的表達(dá)相對較低。(3)轉(zhuǎn)染NCOA5后ACHN、OS-RC-2細(xì)胞傳代時間延長,并導(dǎo)致大量細(xì)胞死亡;而空載體慢病毒轉(zhuǎn)染后傳代時間無明顯變化,未出現(xiàn)大量細(xì)胞死亡。在換用更高培養(yǎng)條件的DMEM培養(yǎng)基后,并經(jīng)大量細(xì)胞流式分選,最終建立了高表達(dá)NCOA5的ACHN腎癌穩(wěn)定株,OS-RC-2細(xì)胞因轉(zhuǎn)染NCOA5后大量細(xì)胞死亡,未能建立相應(yīng)的穩(wěn)定株。(4)Western Blot檢測顯示ACHN、NC-ACHN、NCOA5-ACHN細(xì)胞中NCOA5的相對表達(dá)量分別為0.13±0.06、0.16±0.01、0.81±0.03。NCOA5-ACHN組中NCOA5表達(dá)含量相對高于ACHN、NC-ACHN組中NCOA5表達(dá)含量(P0.05)。(5)CCK-8實驗檢測得到ACHN、NC-ACHN、NCOA5-ACHN組與對照組吸光度的差值,在24 h分別為0.32±0.04、0.31±0.03、0.21±0.02;48 h分別為0.54±0.10、0.58±0.07、0.34±0.03;72 h分別為1.10±0.14、1.04±0.11、0.63±0.16;與ACHN組相比較,NCOA5-ACHN組細(xì)胞的增殖能力明顯減弱(P0.05),NC-ACHN組無明顯變化(P0.05),表明過表達(dá)NCOA5后細(xì)胞增殖能力下降(P0.05)。(6)細(xì)胞劃痕實驗24小時ACHN、NC-ACHN、NCOA5-ACHN各組細(xì)胞邊界間距離變化分別為:0.820±0.017、0.785±0.031、0.482±0.015,經(jīng)檢驗ACHN、NC-ACHN組之間無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),NCOA5-ACHN組與其它兩組均有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),NCOA5-ACHN組細(xì)胞遷移的細(xì)胞數(shù)量明顯降低。(7)利用Transwell侵襲實驗顯示ACHN、NC-ACHN、NCOA5-ACHN組穿膜細(xì)胞數(shù)分別是410±14、418±16、107±9,經(jīng)分析ACHN、NC-ACHN組穿膜細(xì)胞數(shù)無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),而NCOA5-ACHN組穿膜細(xì)胞數(shù)與其它兩組均有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),可見在腎癌細(xì)胞株ACHN過表達(dá)NCOA5后細(xì)胞的侵襲力明顯降低。結(jié)論:(1)本實驗通過Western blot檢測證明NCOA5在人腎上皮細(xì)胞293、HK2中的表達(dá)要明顯高于人腎癌細(xì)胞ACHN、OS-RC-2,且不同的上皮細(xì)胞和腎癌細(xì)胞之間的表達(dá)量均存在差異。(2)免疫組化分析人腎癌組織中NCOA5的相對表達(dá)比癌旁組織要低,且NCOA5的表達(dá)量與與患者年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況、臨床分期、核分化等級有關(guān)。(3)本實驗通過慢病毒感染NCOA5基因,建立了穩(wěn)定表達(dá)NCOA5的ACHN細(xì)胞株,成功提高了ACHN中NCOA5的表達(dá)。(4)高表達(dá)NCOA5可抑制腎癌細(xì)胞株ACHN的增殖、遷移與侵襲力。
【關(guān)鍵詞】：腎癌 NCOA5 Western Blot 免疫組化 慢病毒 過表達(dá) CCK-8 細(xì)胞劃痕試驗 Transwell
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.11
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 引言11-14
• 第一部分 檢測腎癌細(xì)胞株及腎癌組織中NCOA5 的表達(dá)及其臨床意義14-32
• 實驗材料和設(shè)備14-17
• 實驗方法與步驟17-24
• 實驗結(jié)果24-30
• 討論30-32
• 第二部分 NCOA5 對腎癌細(xì)胞株的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等方面的影響32-52
• 實驗材料和設(shè)備32-35
• 實驗方法與步驟35-43
• 實驗結(jié)果43-48
• 討論48-52
• 結(jié)論52-53
• 參考文獻(xiàn)53-56
• 綜述56-64
• 參考文獻(xiàn)60-64
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文64-65
• 中英文對照縮略詞表65-67
• 致謝67-68

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 ;NCOA5基因缺陷可同時誘發(fā)肝癌和糖尿病[J];山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2014年01期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 朱亞軍;NCOA5在腎癌中的基礎(chǔ)與臨床研究[D];蘇州大學(xué);2015年

  本文關(guān)鍵詞：NCOA5在腎癌中的基礎(chǔ)與臨床研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：323362