本文關(guān)鍵詞：尿道下裂患者包皮組織中雄激素受體基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:尿道下裂是由于陰莖尿道發(fā)育異常而導(dǎo)致的,是男性新生兒中最常見的生殖器發(fā)育畸形。盡管研究不斷的深入,尿道下裂的病因仍就有許多的未知。然而,目前正處于尿道下裂病因?qū)W、流行病學(xué)和實驗室研究的新的分水嶺。據(jù)推測,由內(nèi)源性或外源性因素導(dǎo)致,在陰莖和尿道發(fā)育關(guān)鍵期(8至14周)性激素濃度的變化,可能在尿道下裂的發(fā)生起一部分作用。因為某些內(nèi)源性或外源性因素,如激素水平,飲食和接觸化學(xué)物質(zhì)可能會導(dǎo)致表觀遺傳改變,特別是在胎兒發(fā)育過程中,母親所暴露的條件。本實驗的研究目的在于探討雄激素受體基因甲基化狀態(tài)與表達情況以及雙氫睪酮水平是否與尿道下裂的發(fā)生有關(guān)。方法:將15例尿道下裂患者作為實驗組,15例年齡相似的包皮環(huán)切術(shù)患者作為對照組進行研究。1包皮組織以4%多聚甲醛溶液固定,常規(guī)制備病理切片,蘇木精-伊紅(HE)染色后觀察組織病理變化。2檢測各患者血清雙氫睪酮水平。患兒血液經(jīng)離心后,上清裝入EDTA管中凍存在-20℃冰箱。使用雙氫睪酮ELISA試劑盒(Diagnostic Biochem,加拿大)檢測分析血清DHT濃度。血清DHT的檢測靈敏度為6.0pg/ml。3我們使用實時MS-q PCR對亞硫酸氫鈉處理過的DNA進行甲基化分析,因為這種技術(shù)是適合高度敏感和特異的甲基化檢測。4使用TRIzol(Invitrogen公司)提取總RNA以Prime ScriptTM RT reagent KIT試劑盒(takara,日本)將m RNA逆轉(zhuǎn)錄成c DNA。以c DNA為模板,采用實時定量聚合酶鏈反應(yīng),檢測AR-m RNA在包皮組織中的表達情況(上游引物5’-AAGGCTATGAATGTCAG CCCA-3’,下游引物5’-CATTGAGGCTAGAGAGCAAGGC-3’)。5提取組織在冰上勻漿提取總蛋白,BCA法測量各個組織的蛋白濃度,使用Western-Blot法分析包皮組織中AR基因蛋白的表達情況。結(jié)果:1通過HE染色法觀察組織病理的改變,發(fā)現(xiàn)無論尿道下裂患者,還是包皮環(huán)切術(shù)的患者,組織表皮層都是角化的復(fù)層扁平上皮,上皮由上至下:角質(zhì)細胞層、透明細胞層、顆粒細胞層、棘細胞層和基底細胞層,真皮層主要為結(jié)締組織。只是相對于包皮環(huán)切術(shù)患者,尿道下裂包皮組織上皮基底層突觸變多,部分位置棘層、顆粒層變薄,整體分布不均勻。2通過雙氫睪酮ELISA試劑盒檢測對血清DHT濃度的分析。發(fā)現(xiàn)尿道下裂患兒血清DHT水平明顯低于包皮環(huán)切術(shù)患兒(22.17±5.1 vs.123.15±11.9 pg/ml,mean±SE;P0.05)。3通過MS-q PCR對包皮組織標本中AR基因甲基化的檢測,發(fā)現(xiàn)尿道下裂患者包皮組織標本中AR基因甲基化程度高于包皮環(huán)切術(shù)患者。(甲基化百分比:64.1±3.7vs.50.9±2.4,mean±SE;P0.05)4通過q PCR對組織AR基因m RNA表達的檢測,發(fā)現(xiàn)尿道下裂患者包皮組織標本中AR基因m RNA表達程度低于于包皮環(huán)切術(shù)患者。(RQ=0.198±0.028,mean±SE;P0.05)5通過Western-Blot法分析包皮組織中AR基因蛋白的表達情況,發(fā)現(xiàn)尿道下裂患者包皮組織標本中AR基因蛋白表達程度明顯低于包皮環(huán)切術(shù)患者。(OD:0.254±0.288 vs.OD:1.355±0.154,mean±SE;P0.05)結(jié)論:多年來,遺傳學(xué)的探索發(fā)現(xiàn)尿道下裂的新的候選基因都集中在DNA序列本身。雖然一些因素可能仍有待確定,可從本實驗來看,DNA甲基化可能是尿道下裂患者在沒有DNA序列變化的情況下出現(xiàn)異常的基因表達模式。新技術(shù)的改進,讓DNA甲基化狀態(tài)檢測更方便快速,本實驗是第一次在國內(nèi)建立了雄激素受體甲基化狀態(tài)檢測的MS-q MSP方法。根據(jù)實驗結(jié)果,得出以下結(jié)論:1尿道下裂患兒包皮組織,部分位置皮膚棘層、顆粒層變薄,整體分布不均勻,可能與AR受體表達的減少,尿道下裂的發(fā)生有關(guān)。2尿下裂患者血清DHT水平明顯降低,可以作為尿道下裂臨床診斷的一個新指標。3尿道下裂患者包皮組織AR基因甲基化狀態(tài)高于包皮環(huán)切術(shù)患者,這可能是尿道下裂患者出現(xiàn)的表觀遺傳變異。4尿道下裂患者包皮組織AR基因的高甲基化狀態(tài),可能是引起組織m RNA及蛋白低表達的關(guān)鍵因素,與尿道下裂的發(fā)生具有一定意義。
【關(guān)鍵詞】：尿道下裂 雄激素受體 表觀遺傳變異 DNA甲基化 雙氫睪酮
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R695
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫10-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-24
• 結(jié)果24-26
• 附圖26-28
• 附表28-29
• 討論29-31
• 結(jié)論31-32
• 參考文獻32-35
• 綜述 尿道下裂病因?qū)W研究進展35-48
• 參考文獻41-48
• 致謝48-49
• 個人簡歷49

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 安宇;劉雪輝;唐耘熳;劉競;李俊;羅一釗;邱明星;;先天性尿道下裂和單純性陰莖下曲患者陰莖皮膚組織中雄激素受體表達研究[J];中國修復(fù)重建外科雜志;2012年04期

2 何軍;趙曉昆;徐冉;李遠偉;王新君;;5a-還原酶的表達和睪酮測定與尿道下裂的關(guān)系[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2007年08期

  本文關(guān)鍵詞：尿道下裂患者包皮組織中雄激素受體基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：322992