本文關(guān)鍵詞：AP-2α和Ets-1在前列腺癌細(xì)胞DU145和LNCaP中的表達(dá)水平及對(duì)PP2A-Aα的調(diào)控作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：蛋白磷酸酶2A(PP2A)是一種絲氨酸/蘇氨酸磷酸酶。它能控制細(xì)胞內(nèi)許多蛋白的磷酸化,從而調(diào)控細(xì)胞的生命活動(dòng)。如:蛋白質(zhì)合成,細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo),細(xì)胞周期,細(xì)胞凋亡,代謝和應(yīng)激反應(yīng),由蛋白激酶引發(fā)的信號(hào)通路的調(diào)節(jié)�，F(xiàn)在對(duì)PP2A的復(fù)雜性和它的功能的了解進(jìn)展迅速。最近的研究主要在于PP2A與人類疾病相關(guān)變化,尤其是癌癥。PP2A是由3個(gè)亞基構(gòu)成:催化亞基,結(jié)構(gòu)亞基和調(diào)節(jié)亞基。亞基的交替與許多人類惡性腫瘤有關(guān),PP2A抑制劑或直接激活PP2A藥物為癌癥治療帶來了曙光。目前關(guān)于PP2A-Aα基因是如何調(diào)控的研究已經(jīng)有了一些進(jìn)展,本實(shí)驗(yàn)分別構(gòu)建了過表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子ETS-1與AP-2α的表達(dá)載體并分別轉(zhuǎn)入了LNCa P細(xì)胞,沉默了DU145細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄因子ETS-1與AP-2α。并利用Western blot技術(shù)與凝膠遷移滯后實(shí)驗(yàn)初步證明這些轉(zhuǎn)錄因子與PP2A-Aα表達(dá)水平的關(guān)系。通過實(shí)驗(yàn)我們得出了這些結(jié)論:(1)轉(zhuǎn)錄因子Ets-1、AP-2α在DU145和LNCa P細(xì)胞系中都有表達(dá);(2)在DU145和LNCa P細(xì)胞系中,轉(zhuǎn)錄因子ETS-1不影響PP2A-Aα基因的表達(dá);(3)凝膠遷移滯后實(shí)驗(yàn)證明,轉(zhuǎn)錄因子AP-2α在體外能與PP2A-Aα基因啟動(dòng)子序列特異性的結(jié)合;(4)對(duì)于LNCa P細(xì)胞,過表達(dá)AP-2α能使PP2A-Aα的表達(dá)量減少,對(duì)于DU145細(xì)胞,沉默AP-2α能使PP2A-Aα的表達(dá)量增多,這證明AP-2α能夠負(fù)向調(diào)節(jié)PP2A-Aα基因的表達(dá);綜上所述,AP-2α在DU145和LNCa P細(xì)胞中負(fù)性調(diào)節(jié)PP2A-Aα的表達(dá)水平。
【關(guān)鍵詞】：Ets-1 AP-2α PP2A-Aα 前列腺癌 DU145 LNCaP
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.25
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTACT5-10
• 第一章 前言10-24
• 1 AP-2 家族10-13
• 1.1 基因構(gòu)成與進(jìn)化史10
• 1.2 結(jié)構(gòu)特點(diǎn)10-11
• 1.3 位置及功能11-13
• 1.4 AP-2 蛋白的研究方向13
• 2 ETS-1 轉(zhuǎn)錄因子13-20
• 2.1 ETS-1 介紹13-14
• 2.2 ETS-1 的基因位點(diǎn)組織：14-15
• 2.3 ETS-1 蛋白結(jié)構(gòu)：15-17
• 2.4 通過泛素化和SUMO化調(diào)控ETS-1：17-18
• 2.5 ETS-1 的表達(dá)模式：18-19
• 2.6 造血系統(tǒng)腫瘤中的ETS-1：19-20
• 3 PP-2A家族20-24
• 3.1 PP2A結(jié)構(gòu)癌癥相關(guān)的基因突變20-22
• 3.2 PP2A的抑制蛋白與PP2A激活藥物22-23
• 3.3 總結(jié)23-24
• 第二章 材料、試劑以及研究方法24-34
• 1 本實(shí)驗(yàn)的材料24
• 2 本實(shí)驗(yàn)的試劑24
• 3 實(shí)驗(yàn)儀器24
• 4 實(shí)驗(yàn)方法24-34
• 4.1 培養(yǎng)前列腺癌細(xì)胞DU145、前列腺癌細(xì)胞LNCaP。24-25
• 4.2 Western blot技術(shù)檢測(cè)Ets-1, AP-2α 的表達(dá)水平25-28
• 4.2.1 列腺癌細(xì)胞DU145、前列腺癌細(xì)胞LNCaP總蛋白的提取25-26
• 4.2.2 蛋白質(zhì)濃度的測(cè)定26
• 4.2.3 聚丙烯酰胺凝膠電泳26-28
• 4.3 過表達(dá)AP-2α/ETS-1 的DU145和LNCaP細(xì)胞系的建立28-34
• 4.3.1 過表達(dá)載體的擴(kuò)增28-29
• 4.3.2 lipfectamine2000轉(zhuǎn)染DU145和LNCaP細(xì)胞29-30
• 4.3.3 特異性siRNA對(duì)AP-2α 和ETS-1 進(jìn)行敲除30
• 4.3.4 凝膠遷移滯后實(shí)驗(yàn)（EMSA）分析DU145和LNCaP細(xì)胞核蛋白中AP-2α 轉(zhuǎn)錄因子與PP2A-Aα 基因啟動(dòng)子序列的體外相互作用30-31
• 4.3.5 DU145和LNCaP細(xì)胞核蛋白的提取31
• 4.3.6 雙鏈DNA探針的退火31
• 4.3.7 雙鏈DNA探針的標(biāo)記及純化31-32
• 4.3.8 核蛋白與雙鏈DNA相互作用的標(biāo)記反應(yīng)32
• 4.3.9 非變性聚丙烯酰胺凝膠的配制和電泳32-33
• 4.3.10 非變性聚丙烯酰胺凝膠的干膠及顯影33-34
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論34-42
• 1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果34-39
• 1.1 確定AP-2α 和ETS-1 在前列腺癌細(xì)胞DU145和LNCaP中的表達(dá)。34-35
• 1.2 AP-2α 在體外與PP2A-Aα 基因啟動(dòng)子序列的結(jié)合35-36
• 1.3 在DU145細(xì)胞沉默AP-2α 導(dǎo)致PP2A-Aα 上調(diào)36-37
• 1.4 在LNCaP細(xì)胞中過表達(dá)AP-2α 導(dǎo)致PP2A-Aα 的表達(dá)明顯下降37-38
• 1.5 在DU145細(xì)胞中，沉默ETS-1 不改變PP2A-Aα 的表達(dá)水平38-39
• 1.6 在LNCaP細(xì)胞中，，過表達(dá)ETS-1 不改變PP2A-Aα 的表達(dá)水平39
• 2 實(shí)驗(yàn)討論39-42
• 參考文獻(xiàn)42-52
• 附錄52-53
• 致謝53-55

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本文編號(hào)：321339