目的探究miR-608在前列腺癌中的功能并揭示相關的作用機制。方法（1）采用miRNA加尾法qRT-PCR測定miR-608在前列腺癌細胞系DU145和PC3以及前列腺正常細胞系RWPE-1中的表達量。采用前列腺癌組織芯片miR-608顯色原位雜交的方法分析miR-608在前列腺癌組織和配對的癌旁組織中的表達情況。（2）采用BSP甲基化測序手段評估前列腺癌細胞中miR-608基因轉錄起始位點處的 CpG島的甲基化狀態(tài)。進一步,采用 5-氮雜-2’脫氧胞苷（5-aza-2’-deoxycytidine）DNA甲基化酶抑制劑處理前列腺癌細胞,并測定處理前后前列腺癌細胞系中miR-608的表達量。（3）Lipofectamine 2000用于在前列腺細胞系中轉染miR-608 mimic。采用CCK8法細胞活性測定、細胞集落形成實驗、流式細胞儀細胞周期測定、流式細胞儀細胞凋亡和活性caspase-3測定、細胞劃痕愈合實驗和Transwell細胞遷移實驗研究miR-608在前列腺癌細胞系DU 145和PC3中的功能。另外,瘤內注射miR-608/NC mimic的PC3細胞裸鼠皮下成瘤實驗被用... 

【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

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緒論
    參考文獻
第一章 MicroRNA-608在人前列癌細胞和組織中的表達情況及其調控機制
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗材料
        2.2 實驗方法
    3 結果
        3.1 MiR-608在前列腺癌細胞系中呈現(xiàn)低表達
        3.2 前列腺癌組織芯片信息
        3.3 MiR-608在前列腺癌組織中呈現(xiàn)低表達
        3.4 MiR-608基因轉錄起始位點處的CpG島甲基化狀態(tài)
        3.5 甲基化酶抑制劑提升miR-608在PC3細胞系中的表達量
    4 討論
    5 結論
    6 參考文獻
第二章 MicroRNA-608對人前列腺癌細胞增殖、細胞周期、細胞凋亡和細胞遷移的影響
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗材料
        2.2 實驗方法
    3 結果
        3.1 MiR-608脂質體轉染前列腺癌細胞系效率評估
        3.2 MiR-608過表達抑制前列腺癌細胞生長增殖
        3.3 MiR-608過表達誘發(fā)前列腺癌細胞G2/M周期阻滯
        3.4 MiR-608過表達抑制前列腺癌細胞遷移
        3.5 MiR-608過表達誘發(fā)前列腺癌細胞凋亡
        3.6 MiR-608抑制PC3細胞裸鼠皮下成瘤
    4 討論
    5 結論
    6 參考文獻
第三章 MicroRNA-608在人前列腺癌中的作用靶點及其調控前列腺癌的相關機制
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗材料
        2.2 實驗方法
    3 結果
        3.1 MiR-608靶基因作用位點數據庫預測
        3.2 MiR-608過表達下調前列腺癌細胞中RAC2、PAK4、BCL2L1及其下游蛋白的表達
        3.3 RAC2和BCL2L1是miR-608的直接作用靶點
        3.4 敲低RAC2和BCL2L1可以重現(xiàn)過表達miR-608在前列腺癌細胞中的作用
        3.5 RAC2和BCL2L1在前列腺癌組織中呈現(xiàn)高表達
        3.6 RAC2/BCL2L1拯救實驗
        3.7 MiR-608靶向PAK4的編碼區(qū)
        3.8 敲低PAK4可以重現(xiàn)過表達miR-608在前列腺癌細胞中的作用
        3.9 PAK4拯救實驗
    4 討論
    5 結論
    6 參考文獻
綜述
    參考文獻
作者簡歷及在讀期間取得的科研成果


【參考文獻】：
期刊論文
[1]miRNA的生物合成過程[J]. 李偉,金由辛.  生物化學與生物物理進展. 2005(08)



本文編號：3206469