本文關(guān)鍵詞：抗腫瘤藥物TSA和GSK2126458及快速冷凍對(duì)精母細(xì)胞減數(shù)分裂遺傳重組的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：減數(shù)分裂是男性精原細(xì)胞向精子分化的重要過程,它的正常發(fā)生和完成很大程度上依賴于減數(shù)分裂前期I的同源染色體聯(lián)會(huì)、交換和分離,與遺傳重組密切相關(guān)。研究已經(jīng)證實(shí)精母細(xì)胞減數(shù)分裂前期I發(fā)生異常,會(huì)使減數(shù)分裂發(fā)生紊亂、停滯,甚至導(dǎo)致無精。因此,對(duì)減數(shù)分裂遺傳重組頻率和聯(lián)會(huì)的分析將有助于理解精子發(fā)生障礙的機(jī)制,從而揭示男性不育的病因。隨著腫瘤治療技術(shù)的快速發(fā)展,男性腫瘤患者存活率不斷提高的同時(shí),其對(duì)生育力保存的需求也不斷增加。因此,如何安全保存男性腫瘤患者的生育力,使之將來獲得健康子代備受關(guān)注,也是目前生殖醫(yī)學(xué)和腫瘤學(xué)面臨的共同難題。為了達(dá)到延長(zhǎng)患者生命與生育力保存相平衡的最終目標(biāo),臨床醫(yī)生在制定抗腫瘤治療方案時(shí),首先要考慮抗腫瘤藥物對(duì)男性生殖細(xì)胞的藥物毒性及安全性。在眾多抗腫瘤藥物中具有代表性的兩種藥物有:傳統(tǒng)抗腫瘤藥物曲古霉素A(Trichostation A,TSA)及新型抗腫瘤藥物GSK2126458。目前這兩種藥物已開始用于抗腫瘤治療的臨床研究,但是其對(duì)男性生精細(xì)胞是否有影響?國內(nèi)外尚未見報(bào)道。睪丸組織冷凍已經(jīng)成為男性生育力保存的另一重要手段。但是睪丸組織冷凍技術(shù)本身也仍然存在許多問題,如:睪丸組織冷凍方法(有程序化慢速冷凍和快速冷凍等)尚沒有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn);冷凍保護(hù)劑的選擇也尚存爭(zhēng)議。目前關(guān)于不同冷凍方法對(duì)人睪丸組織精母細(xì)胞減數(shù)分裂的影響,僅有少數(shù)關(guān)于程序化慢速冷凍的報(bào)道,而對(duì)于應(yīng)用最多的快速冷凍法是否有影響?國內(nèi)外尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。因此,深入研究抗腫瘤藥物和快速冷凍法對(duì)精母細(xì)胞遺傳重組的影響,不僅能評(píng)估其安全性,也為男性腫瘤患者進(jìn)行生育力保存選擇最佳時(shí)機(jī)和冷凍方法提供依據(jù)。目的:本研究采用免疫熒光法,對(duì)比不同濃度抗腫瘤藥物TSA和GSK2126458對(duì)雄性小鼠生精功能、精母細(xì)胞減數(shù)分裂遺傳重組位點(diǎn)及聯(lián)會(huì)保真度的影響;對(duì)比快速冷凍前后人睪丸組織精母細(xì)胞減數(shù)分裂遺傳重組及不同來源人睪丸組織中MLH1基因的表達(dá)差異。旨在評(píng)估兩種抗腫瘤藥物及快速冷凍法的安全性,為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。方法:1.抗腫瘤藥物TSA和GSK2126458對(duì)雄性小鼠生精功能的影響。將18只小鼠隨機(jī)分為:TSA(0.1)組(3只);TSA(0.2)組(3只);GSK(0.1)組(3只);GSK(0.2)組(3只);對(duì)照組(6只)。各組一部分睪丸組織采用鋪展法制片和免疫熒光法進(jìn)行同源染色體遺傳重組和聯(lián)會(huì)的保真度分析;另一部分組織切片制備及HE染色。各組獲取附睪液中的精子進(jìn)行密度及活率等觀察。2.快速冷凍對(duì)人精母細(xì)胞減數(shù)分裂遺傳重組的影響。將4例前列腺癌患者的睪丸組織隨機(jī)分為兩部分:一部分新鮮鋪片,另一部分快速冷凍。采用快速冷凍與未冷凍的睪丸組織采用鋪展法制片和免疫熒光法進(jìn)行同源染色體遺傳重組和聯(lián)會(huì)的保真度分析。3.不同來源睪丸組織中MLH1基因的表達(dá)。分為梗阻性無精癥組(n=8),非梗阻性無精癥組(n=14)和正常生精組(n=12)。采用定量RT-PCR分析各組MLH1基因的表達(dá)。結(jié)果:1.TSA(0.1)組的每個(gè)細(xì)胞上MLH1的數(shù)目明顯高于對(duì)照組(P0.05),與TSA(0.2)組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。兩TSA組MLH1數(shù)目為0的SC平均數(shù)目均低于對(duì)照組(P0.05,P0.05)、MLH1數(shù)目為1的SC平均數(shù)目均高于對(duì)照組(P0.05,P0.05)。TSA(0.1)組小鼠左側(cè)睪丸重量明顯低于對(duì)照組(P0.05)。2.兩GSK組中MLH1的數(shù)目、MLH1數(shù)目為0-3的SC平均數(shù)目、XY染色體上含有MLH1位點(diǎn)的細(xì)胞比例、含gaps、splits的細(xì)胞比例及小鼠體重、睪丸重量、精子密度、精子活力及精子活率比較,均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。3.兩TSA組每個(gè)細(xì)胞上MLH1的數(shù)目明顯高于兩GSK組(P0.01,P0.05)。TSA(0.1)組MLH1數(shù)目為0的SC平均數(shù)目均明顯低于其它三組(均P0.05),MLH1數(shù)目為1的SC平均數(shù)目均明顯高于其它三組(均P0.05)。4.同一病例新鮮與凍融后人睪丸組織減數(shù)分裂的重組頻率和聯(lián)會(huì)保真度都沒有差異(P0.05)。5.兩無精癥組中MLH1的表達(dá)顯著高于均正常生精組(P0.05);而且非梗阻性無精癥組中MLH1的表達(dá)顯著高于梗阻性無精癥組(P0.05)。結(jié)論:1.兩濃度TSA均增加雄性小鼠精母細(xì)胞減數(shù)分裂遺傳重組頻率。2.兩濃度GSK2126458對(duì)雄性小鼠精母細(xì)胞減數(shù)分裂遺傳重組頻率、聯(lián)會(huì)及生精功能均無明顯影響。3.TSA對(duì)雄性小鼠精母細(xì)胞減數(shù)分裂遺傳重組頻率的影響大于GSK2126458,建議臨床上男性抗腫瘤藥物治療優(yōu)先選擇GSK2126458。4.快速冷凍不影響人睪丸組織精母細(xì)胞減數(shù)分裂遺傳重組頻率及聯(lián)會(huì)保真度,是男性生育力保存的有效方法。5.無精癥患者M(jìn)LH1基因高表達(dá),可能與MLH1基因介導(dǎo)調(diào)控人類睪丸精子發(fā)生有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：GSK2126458 曲古霉素A 快速冷凍 聯(lián)會(huì)復(fù)合體 減數(shù)分裂 遺傳重組 MLH1
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R697
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-13
• 英文縮寫詞表13-14
• 前言14-18
• 1 資料和方法18-26
• 2 結(jié)果26-36
• 3 討論36-44
• 4 結(jié)論44-45
• 5 參考文獻(xiàn)45-48
• 附圖48-53
• 綜述部分 抗腫瘤藥物和凍融對(duì)精母細(xì)胞減數(shù)分裂遺傳重組影響的研究進(jìn)展53-65
• 參考文獻(xiàn)62-65
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷65-66
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表文章情況66

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 歐蕾;郭藝紅;孫瑩璞;蘇迎春;;凍融復(fù)蘇微量精子行卵細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)單精子注射術(shù)的療效及臨床妊娠結(jié)局分析[J];中華男科學(xué)雜志;2010年04期

  本文關(guān)鍵詞：抗腫瘤藥物TSA和GSK2126458及快速冷凍對(duì)精母細(xì)胞減數(shù)分裂遺傳重組的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號(hào)：315406