本文關鍵詞：抗腫瘤藥物TSA和GSK2126458及快速冷凍對精母細胞減數(shù)分裂遺傳重組的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：減數(shù)分裂是男性精原細胞向精子分化的重要過程,它的正常發(fā)生和完成很大程度上依賴于減數(shù)分裂前期I的同源染色體聯(lián)會、交換和分離,與遺傳重組密切相關。研究已經(jīng)證實精母細胞減數(shù)分裂前期I發(fā)生異常,會使減數(shù)分裂發(fā)生紊亂、停滯,甚至導致無精。因此,對減數(shù)分裂遺傳重組頻率和聯(lián)會的分析將有助于理解精子發(fā)生障礙的機制,從而揭示男性不育的病因。隨著腫瘤治療技術的快速發(fā)展,男性腫瘤患者存活率不斷提高的同時,其對生育力保存的需求也不斷增加。因此,如何安全保存男性腫瘤患者的生育力,使之將來獲得健康子代備受關注,也是目前生殖醫(yī)學和腫瘤學面臨的共同難題。為了達到延長患者生命與生育力保存相平衡的最終目標,臨床醫(yī)生在制定抗腫瘤治療方案時,首先要考慮抗腫瘤藥物對男性生殖細胞的藥物毒性及安全性。在眾多抗腫瘤藥物中具有代表性的兩種藥物有:傳統(tǒng)抗腫瘤藥物曲古霉素A(Trichostation A,TSA)及新型抗腫瘤藥物GSK2126458。目前這兩種藥物已開始用于抗腫瘤治療的臨床研究,但是其對男性生精細胞是否有影響?國內(nèi)外尚未見報道。睪丸組織冷凍已經(jīng)成為男性生育力保存的另一重要手段。但是睪丸組織冷凍技術本身也仍然存在許多問題,如:睪丸組織冷凍方法(有程序化慢速冷凍和快速冷凍等)尚沒有統(tǒng)一標準;冷凍保護劑的選擇也尚存爭議。目前關于不同冷凍方法對人睪丸組織精母細胞減數(shù)分裂的影響,僅有少數(shù)關于程序化慢速冷凍的報道,而對于應用最多的快速冷凍法是否有影響?國內(nèi)外尚未見文獻報道。因此,深入研究抗腫瘤藥物和快速冷凍法對精母細胞遺傳重組的影響,不僅能評估其安全性,也為男性腫瘤患者進行生育力保存選擇最佳時機和冷凍方法提供依據(jù)。目的:本研究采用免疫熒光法,對比不同濃度抗腫瘤藥物TSA和GSK2126458對雄性小鼠生精功能、精母細胞減數(shù)分裂遺傳重組位點及聯(lián)會保真度的影響;對比快速冷凍前后人睪丸組織精母細胞減數(shù)分裂遺傳重組及不同來源人睪丸組織中MLH1基因的表達差異。旨在評估兩種抗腫瘤藥物及快速冷凍法的安全性,為臨床應用提供依據(jù)。方法:1.抗腫瘤藥物TSA和GSK2126458對雄性小鼠生精功能的影響。將18只小鼠隨機分為:TSA(0.1)組(3只);TSA(0.2)組(3只);GSK(0.1)組(3只);GSK(0.2)組(3只);對照組(6只)。各組一部分睪丸組織采用鋪展法制片和免疫熒光法進行同源染色體遺傳重組和聯(lián)會的保真度分析;另一部分組織切片制備及HE染色。各組獲取附睪液中的精子進行密度及活率等觀察。2.快速冷凍對人精母細胞減數(shù)分裂遺傳重組的影響。將4例前列腺癌患者的睪丸組織隨機分為兩部分:一部分新鮮鋪片,另一部分快速冷凍。采用快速冷凍與未冷凍的睪丸組織采用鋪展法制片和免疫熒光法進行同源染色體遺傳重組和聯(lián)會的保真度分析。3.不同來源睪丸組織中MLH1基因的表達。分為梗阻性無精癥組(n=8),非梗阻性無精癥組(n=14)和正常生精組(n=12)。采用定量RT-PCR分析各組MLH1基因的表達。結果:1.TSA(0.1)組的每個細胞上MLH1的數(shù)目明顯高于對照組(P0.05),與TSA(0.2)組比較無統(tǒng)計學差異(P0.05)。兩TSA組MLH1數(shù)目為0的SC平均數(shù)目均低于對照組(P0.05,P0.05)、MLH1數(shù)目為1的SC平均數(shù)目均高于對照組(P0.05,P0.05)。TSA(0.1)組小鼠左側睪丸重量明顯低于對照組(P0.05)。2.兩GSK組中MLH1的數(shù)目、MLH1數(shù)目為0-3的SC平均數(shù)目、XY染色體上含有MLH1位點的細胞比例、含gaps、splits的細胞比例及小鼠體重、睪丸重量、精子密度、精子活力及精子活率比較,均無統(tǒng)計學差異(P0.05)。3.兩TSA組每個細胞上MLH1的數(shù)目明顯高于兩GSK組(P0.01,P0.05)。TSA(0.1)組MLH1數(shù)目為0的SC平均數(shù)目均明顯低于其它三組(均P0.05),MLH1數(shù)目為1的SC平均數(shù)目均明顯高于其它三組(均P0.05)。4.同一病例新鮮與凍融后人睪丸組織減數(shù)分裂的重組頻率和聯(lián)會保真度都沒有差異(P0.05)。5.兩無精癥組中MLH1的表達顯著高于均正常生精組(P0.05);而且非梗阻性無精癥組中MLH1的表達顯著高于梗阻性無精癥組(P0.05)。結論:1.兩濃度TSA均增加雄性小鼠精母細胞減數(shù)分裂遺傳重組頻率。2.兩濃度GSK2126458對雄性小鼠精母細胞減數(shù)分裂遺傳重組頻率、聯(lián)會及生精功能均無明顯影響。3.TSA對雄性小鼠精母細胞減數(shù)分裂遺傳重組頻率的影響大于GSK2126458,建議臨床上男性抗腫瘤藥物治療優(yōu)先選擇GSK2126458。4.快速冷凍不影響人睪丸組織精母細胞減數(shù)分裂遺傳重組頻率及聯(lián)會保真度,是男性生育力保存的有效方法。5.無精癥患者MLH1基因高表達,可能與MLH1基因介導調(diào)控人類睪丸精子發(fā)生有關。
【關鍵詞】：GSK2126458 曲古霉素A 快速冷凍 聯(lián)會復合體 減數(shù)分裂 遺傳重組 MLH1
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R697
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-13
• 英文縮寫詞表13-14
• 前言14-18
• 1 資料和方法18-26
• 2 結果26-36
• 3 討論36-44
• 4 結論44-45
• 5 參考文獻45-48
• 附圖48-53
• 綜述部分 抗腫瘤藥物和凍融對精母細胞減數(shù)分裂遺傳重組影響的研究進展53-65
• 參考文獻62-65
• 個人簡歷65-66
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表文章情況66

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 歐蕾;郭藝紅;孫瑩璞;蘇迎春;;凍融復蘇微量精子行卵細胞胞質(zhì)內(nèi)單精子注射術的療效及臨床妊娠結局分析[J];中華男科學雜志;2010年04期

  本文關鍵詞：抗腫瘤藥物TSA和GSK2126458及快速冷凍對精母細胞減數(shù)分裂遺傳重組的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：315406