目的本課題通過(guò)對(duì)體外培養(yǎng)的不同特性的前列腺癌細(xì)胞株（LNCAP、PC3、DU145）及人正常前列腺腺上皮細(xì)胞（RWPE-1）中EN2（Engrailed-2）表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)對(duì)前列腺癌患者腫瘤組織及前列腺增生患者組織中EN2表達(dá)情況分析，并分析EN2蛋白表達(dá)水平與前列腺癌病理分級(jí)之間的關(guān)系。探求EN2與前列腺癌的相關(guān)性，旨在尋求和發(fā)現(xiàn)一種對(duì)前列腺癌患者具有臨床應(yīng)用價(jià)值的早期診斷、預(yù)防、治療的標(biāo)志物。方法通過(guò)細(xì)胞免疫熒光和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶反應(yīng)（RT-PCR）方法對(duì)不同前列腺癌細(xì)胞系（LNCAP、PC3、DU145）和人正常前列腺腺上皮細(xì)胞（RWPE-1）中EN2mRNA及蛋白進(jìn)行檢測(cè)。通過(guò)對(duì)暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院2007.4-2012.3年間51例經(jīng)病理確診為前列腺癌的患者調(diào)取臨床資料和病理標(biāo)本，并選取57例良性前列腺增生患者組織，進(jìn)行EN2的免疫組化染色、Western blot檢測(cè)。并分析EN2表達(dá)水平與前列腺癌病理分級(jí)間之間的關(guān)系。結(jié)果1.前列腺癌細(xì)胞株中EN2在蛋白水平和分子水平都較人正常前列腺上皮細(xì)胞高表達(dá)；2. EN2在激素依賴性前列腺癌細(xì)胞表達(dá)水平又較激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞增... 

【文章來(lái)源】：暨南大學(xué)廣東省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：45 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

-1含有同源框結(jié)構(gòu)的蛋白具有調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的作用注：HOX11、HSIX1、MSX1和GAX為含有同源框結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)，其中HSIX1、MSX1

一． 圖1. EN2蛋白功能域示意圖注：引自Richard Morgan[22]作為細(xì)胞間傳遞信息的轉(zhuǎn)錄因子，EN2 可通過(guò)非經(jīng)典蛋白分泌途徑和內(nèi)攝活動(dòng)而被細(xì)胞分泌和內(nèi)攝[23]。絕大部分 EN-2 作為轉(zhuǎn)錄因子定位于核內(nèi)并通過(guò)其DNA 結(jié)合結(jié)構(gòu)域與特異的 DNA 結(jié)合從而激活其下游基因的轉(zhuǎn)錄來(lái)執(zhí)行轉(zhuǎn)錄因子的相關(guān)功能[24, 25]，但是亦有少部分 EN2（< 5%）位于胞漿內(nèi)[26]。Engrailed 基因最初被認(rèn)為只是果蠅的一個(gè)節(jié)段極性基因，隨后研究發(fā)現(xiàn) EN-2 蛋白參與了機(jī)體的多種病理生理活動(dòng)，如胚胎發(fā)育[27]、突觸選擇[28]、視神經(jīng)軸突導(dǎo)向[19]、帕金森綜合癥、自閉癥等。二、EN2 與腫瘤關(guān)系最近研究發(fā)現(xiàn)，EN2 還與某些腫瘤的發(fā)生有關(guān)。Martin 等[29]使 EN2 在人正常乳腺上皮細(xì)胞系中異位表達(dá)后，人正常乳腺上皮細(xì)胞則表現(xiàn)出惡性病變的特性，如細(xì)胞周期縮短、細(xì)胞與細(xì)胞間的接觸性喪失，應(yīng)用 RNA 干擾技術(shù)使人乳

）中的 RT-PCR 的檢測(cè)A 鑒定分光光度計(jì)測(cè)定 OD260 和 OD280 值，計(jì)算所用樣品中 RNA 的含/A280 值在 LNCAP、DU145、PC3 前列腺癌細(xì)胞系及人正常前列腺PE-1 分別為：2.10、2.02、2.03、1.80，均在 1.8~2.0 附近，說(shuō)明 Rtion 的檢測(cè)及 EN2 基因 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果n 作為內(nèi)參在 LNCAP、DU145 和 PC3 前列腺癌細(xì)胞系，人正常前 RWPE-1 中的表達(dá)，擴(kuò)增片段大小與預(yù)期相符，擴(kuò)增條帶亮度也相樣品中提取總RNA量一致，β-action可以作為RT-PCR分析的內(nèi)參因在人正常前列腺上皮細(xì)胞 RWPE-1 中呈現(xiàn)弱表達(dá)，在前列腺癌細(xì)、DU145 和 PC3 中明顯表達(dá)，其中在 PC3 和 DU145 細(xì)胞中表達(dá)水AP 中的表達(dá)水平要高于 PC3 和 DU145 中的表達(dá)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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