目的通過沉默Wnt/β-catenin信號通路的核心蛋白β-catenin,探討其與腎纖維化的關(guān)系,為慢性腎臟病的治療提供理論依據(jù)。方法1、根據(jù)sh RNA設(shè)計(jì)原則,設(shè)計(jì)針對β-catenin基因的有效靶點(diǎn),構(gòu)建β-catenin基因特異性si RNA慢病毒載體,并用293T細(xì)胞轉(zhuǎn)染法測定慢病毒滴度。2、設(shè)計(jì)四組（N=3）不同劑量的陰性慢病毒濃縮液,劑量分別為1×105 ifu、1×106 ifu、1×107 ifu、1.5×107 ifu,分別注射于大鼠腎臟被膜下,3天后殺鼠取新鮮腎組織制作冰凍切片,觀察慢病毒的感染效率,為后續(xù)實(shí)驗(yàn)摸索注射的最佳劑量。3、128只雄性SD大鼠（8周齡、200-250g）隨機(jī)分為4組:①模型組（UUO組,N=32）;②假手術(shù)組（Sham組,N=32）;③β-catenin基因沉默組（沉默組,N=32）;④陰性沉默組（陰性組,N=32）。分別于術(shù)后第3、7、10、14天每組各處死8只大鼠,收集腎組織標(biāo)本,通過HE染色、Masson染色觀察腎組織形態(tài)及腎纖維化改變;通過免疫組織化學(xué)染色檢測α-SMA和β-catenin蛋白的表達(dá)部位;以及Western b... 

【文章來源】：福建醫(yī)科大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
縮略詞表
中文摘要
Abstract
前言
第一部分 β-catenin siRNA慢病毒載體制備
    前言
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2 結(jié)果
        2.1 表達(dá)Ctnnb1豐度較高的腎細(xì)胞
        2.2 酶切慢病毒載體鑒定
        2.3 雙酶切線性化的載體和DNA片段連接后的PCR鑒定
        2.4 測序鑒定結(jié)果
        2.5 不同靶點(diǎn)分別感染 293T細(xì)胞后滴度測定（熒光法）
        2.6 PCR內(nèi)源篩選有效靶點(diǎn)
        2.7 RNAi有效靶點(diǎn)慢病毒大量包裝及RT-PCR再次驗(yàn)證
第二部分 β-catenin siRNA對EMT的影響
    前言
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2 結(jié)果
        2.1 造模后腎臟外觀
        2.2 冰凍切片
        2.3 大鼠腎皮質(zhì)病理HE及Masson染色
        2.4 免疫組織化學(xué)檢測腎小管上皮細(xì)胞目的蛋白表達(dá)情況
        2.5 Western blot檢測梗阻側(cè)腎皮質(zhì)目的蛋白相對表達(dá)量
        2.6 RT-PCR檢測梗阻側(cè)腎皮質(zhì)目的基因mRNA表達(dá)
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]siRNA沉默β-Catenin對肝星狀細(xì)胞增殖和凋亡的影響[J]. 葛文松,吳建新,陳穎偉,范建高.  實(shí)用肝臟病雜志. 2011(02)
[2]Wnt信號通路的生物學(xué)效應(yīng)及其與肺部疾病的關(guān)系[J]. 于曉敏,王辰,王軍.  首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2009(02)
[3]wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與肝纖維化[J]. 孫利兵,王尉平,顧振綸,蔣小崗,周文軒,郭次儀.  中國藥理學(xué)通報(bào). 2008(07)
[4]Epithelial to mesenchymal transition in the progression of tubulointerstitial fibrosis[J]. LI Min-xia LIU Bi-cheng Institute of Nephrology,Zhong Da Hospital,Southeast University,Nanjing 210009,China.  Chinese Medical Journal. 2007(21)

碩士論文
[1]阻斷Wnt/β-catenin信號通路對腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的作用[D]. 周寶尚.第三軍醫(yī)大學(xué) 2012
[2]慢病毒介導(dǎo)RNA干擾沉默蛋白激酶Cgamma基因?qū)Υ笫髥岱饶褪艿挠绊慬D]. 劉峰.華中科技大學(xué) 2011



本文編號：3070667