目的糖尿�。╠iabetes mellitus,DM）是一種臨床常見的慢性代謝性疾病,持續(xù)高血糖狀態(tài)會(huì)導(dǎo)致代謝紊亂,靶器官和大血管損傷,引起糖尿病足、視網(wǎng)膜病變、腎功能損傷等多種并發(fā)癥。糖尿病腎�。╠iabetes nephrophathy,DN）是繼發(fā)于糖尿病常見的微血管并發(fā)癥之一,可引起終末期腎�。‥nd stage renal disease,ESRD）,是糖尿病患者死亡的重要因素。有研究報(bào)道,核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體蛋白3（NLRP3）炎癥小體參與了糖尿病腎病的發(fā)病過(guò)程,但其在DN發(fā)病分子機(jī)制中的作用尚不明確。既往研究發(fā)現(xiàn)脾酪氨酸激酶（spleen tyrosine kinase,Syk）參與瘧原蟲色素誘導(dǎo)的THP-1細(xì)胞中NLRP3炎癥小體的活性調(diào)節(jié),c-Jun氨基末端激酶（JNK）參與了巨噬細(xì)胞溶酶體裂解介導(dǎo)的NLRP3炎癥小體的活化,但在糖尿病腎病的炎癥損傷機(jī)制中Syk是否發(fā)揮作用及其與JNK、NLRP3炎癥小體的關(guān)系尚未見報(bào)道。因此,本研究通過(guò)檢測(cè)Syk、JNK及NLRP3炎癥小體在1型糖尿病大鼠動(dòng)物模型及高糖誘導(dǎo)的腎臟細(xì)胞中的表達(dá),以探究Syk/JNK/NLRP3... 

【文章來(lái)源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Con組和DN組大鼠腎臟組織HE染色(左：Con組；右：DN組，×400倍)

圖 2：Con 組和 DN 組大鼠腎臟組織 PAS 染色(左：Con 組；右：DN 組，×400 倍)4 大鼠腎臟組織中 NLRP3 炎癥小體及 IL-1β的表達(dá)檢測(cè)大鼠腎臟組織中 NLRP3 炎癥小體以及 mIL-1β的在 mRNA 和蛋白水平的表達(dá)情況。RT-PCR 檢測(cè)結(jié)果顯示，與 Con 組相比，DN 組大鼠腎臟組織中 NLRP3 炎癥小體及 IL-1β mRNA 水平明顯增高（P < 0.05，圖 3）；WesternBlot 結(jié)果及定量分析表明，NLRP3 炎癥小體在不同周次的 DN 大鼠體內(nèi)的蛋白表達(dá)均增高，而 Con 組大鼠腎臟組織中 NLRP3 炎癥小體并無(wú)變化（圖 4），并且 NLRP3 炎癥小體在第 12、16 周的變化最明顯，因此我們選用第 16 周大鼠進(jìn)行進(jìn)一步試驗(yàn)，Western Blot 結(jié)果顯示，與 Con 組相比，DN 組大鼠腎臟組織中不僅 NLRP3 炎癥小體表達(dá)水平明顯增高（P < 0.05，圖 5），IL-1β蛋白表達(dá)水平也顯著上調(diào)（P < 0.01，圖 5）；免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，與Con 組相比，DN 組大鼠腎臟組織中 NLRP3、caspase-1、mature IL-1β的表達(dá)水平明顯升高（圖 6）。

3：兩組大鼠腎臟組織中 NLRP3、caspase-1 以及 IL-1β的 mRNA 表達(dá)水：A. RT-PCR 方法檢測(cè)不同周次大鼠腎臟組織中 NLRP3、Caspase-1 以及 IL mRNA 的表達(dá)水平；B. 選取第 16 周大鼠為研究對(duì)象進(jìn)一步檢測(cè)該周次不鼠腎臟組織中 NLRP3、Caspase-1 以及 IL-1β的 mRNA 水平；C. ImageJ 對(duì)中進(jìn)行 NLRP3、caspase-1 以及 IL-1β定量分析，n=6。非配對(duì) t 檢驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù) mean ± SEM 表示，*P < 0.05，**P < 0.01，***P < 0.001 vs 。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]血清和糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)蛋白激酶對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變的作用及研究進(jìn)展[J]. 楊貞,閆爽.  內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2017(02)
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