ARNO/Arf6信號通路在AGEs致腎小球內皮高通透性的作用及機制研究
發(fā)布時間：2021-02-17 22:53
背景和目的:糖尿病早期內皮/腎小球高通透性（Endothelial/glomerular hyperpermeability）是早期糖尿病腎�。―iabetic nephropathies,DN）重要的病理生理改變,可是我們對其發(fā)生機制仍然一籌莫展。已經知道高糖、晚期糖基化終末產物（Advanced glycation end products,AGEs）、內皮源性一氧化氮（NO）產生減少、炎癥及氧化應激等多種因素可促進腎小球內皮細胞的通透性,但這些因素最終是通過改變內皮細胞的屏障功能實現(xiàn)的,因此有必要研究內皮屏障穩(wěn)定調控的關鍵機制,才能找到DN的治療靶點。ADP核糖基化因子（ADP-ribosylation factors,ARFs）是真核細胞中廣泛表達且高度保守的GTP結合蛋白,是Ras超家族成員之一。Arf6作為ARFs一種特殊亞型,定位于質膜和內涵體膜上。與其它小分子GTP結合蛋白一樣,Arf6在有活性的GTP和無活性的GDP兩種結合構象之間轉換,其中Arf6-GDP到Arf6-GTP的轉換需要鳥苷交換因子（guanine nucleotide exchange factors...
【文章來源】：中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學重慶市
【文章頁數】：65 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
濃度依賴實驗中AGEs對HRGECs細胞活力、ARNOmRNA轉錄及protein表達、Arf6活性和內皮細胞通透性的影響：*P<0.05，**P<0.01
陸軍軍醫(yī)大學碩士學位論文221.2.2時間依賴實驗中AGEs對HRGECs中ARNO/Arf6信號通路及通透性的影響CCK8檢測結果顯示，各組吸光度差異無統(tǒng)計學意義(圖1-2A)，但AGEs48h組HRGECs吸光度均值相對偏低，光鏡下觀察細胞生長速度偏慢，漂浮細胞量偏多，提示AGEs刺激時間≥48h時可能對HRGECs生長狀態(tài)產生影響。Real-timePCR及Westernblotting結果顯示，與AGEs對照組相比，AGEs顯著增加HRGECsARNOmRNA轉錄和protein表達(P<0.05，圖1-2B、C、D)，該作用呈時間依賴性。與AGEs對照組相比，ARNO表達最高的AGEs48h組，蛋白表達量約為3.4倍。pulldownassay及FITC-Dextran(40kDa)檢測結果顯示，AGEs也時間依賴性增加HRGECsArf6活性和內皮細胞通透性(P<0.05，圖1-2C、E、F)，該作用趨勢與ARNO表達趨勢一致。圖1-2時間依賴實驗中AGEs對HRGECs細胞活力、ARNOmRNA及protein表達、Arf6活性和內皮細胞通透性的影響：*P<0.05，**P<0.01。Control：AGEs對照組。根據以上時間和濃度依賴實驗結果，80μg/mlAGEs刺激24h時，HRGECsARNO/Arf6信號活化和內皮通透性改變顯著，細胞活力也影響較小，故我們選擇80μg/mlAGEs刺激24h作為后續(xù)的AGEs刺激條件。1.2.360min以內高糖對HRGECs中ARNO表達及通透性的影響60min以內高糖時間依賴實驗中，Westernblotting檢測結果顯示，與高糖對照組相比，高糖顯著增加HRGECsARNO表達(P<0.05，圖1-3A、B)，30min達到最高，45min后出現(xiàn)回落。與高糖對照組相比，ARNO表達最高的高糖30min組，蛋白表達
陸軍軍醫(yī)大學碩士學位論文23量在4倍以上。FITC-Dextran(40kDa)檢測結果顯示，內皮細胞通透性與ARNO表達時間趨勢一致(圖1-3C)。甘露醇組與高糖對照組ARNO表達及內皮細胞通透性差異無統(tǒng)計學意義。選用30min為60min以內高糖濃度依賴實驗時相點。Westernblotting檢測結果顯示，與正常糖組相比，高糖顯著增加HRGECsARNO表達(P<0.05，圖1-3D、E)，該作用呈濃度依賴性。與正常糖組相比，ARNO表達最高的高糖40mmol/L組，蛋白表達量近7倍。FITC-Dextran(40kDa)檢測結果顯示，高糖也濃度依賴性增加HRGECs通透性(圖1-3F)。甘露醇組與正常糖組ARNO表達及內皮細胞通透性差異無統(tǒng)計學意義。圖1-360min內時間/濃度依賴實驗中高糖對HRGECsARNO表達及通透性的影響：*P<0.05，**P<0.01。A、B、CControl：高糖對照組。D、E、FControl：正常糖組。1.2.46h以上高糖對HRGECs中ARNO表達及通透性的影響6h以上高糖濃度依賴實驗中，Westernblotting及FITC-Dextran(40kDa)檢測結果顯示，與正常糖組相比，高糖30mmol/L、40mmol/L組HRGECsARNO表達和內皮細胞通透性升高(P<0.05，圖1-4A、B、C)，而10mmol/L、20mmol/L組差異均無統(tǒng)計學意義。與正常糖組相比，ARNO表達最高的高糖40mmol/L組，蛋白表達量約為1.5倍。甘露醇組與正常糖組ARNO表達及內皮細胞通透性差異無統(tǒng)計學意義。選擇30mmol/L為6h以上高糖時間依賴實驗刺激條件。Westernblotting及
【參考文獻】：
碩士論文
[1]ROBO4/ARF6信號通路在高糖誘導的人腎小球內皮細胞高通透性的作用研究[D]. 唐璐瑤.第三軍醫(yī)大學 2017
本文編號：3038665
【文章來源】：中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學重慶市
【文章頁數】：65 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
濃度依賴實驗中AGEs對HRGECs細胞活力、ARNOmRNA轉錄及protein表達、Arf6活性和內皮細胞通透性的影響：*P<0.05，**P<0.01
陸軍軍醫(yī)大學碩士學位論文221.2.2時間依賴實驗中AGEs對HRGECs中ARNO/Arf6信號通路及通透性的影響CCK8檢測結果顯示，各組吸光度差異無統(tǒng)計學意義(圖1-2A)，但AGEs48h組HRGECs吸光度均值相對偏低，光鏡下觀察細胞生長速度偏慢，漂浮細胞量偏多，提示AGEs刺激時間≥48h時可能對HRGECs生長狀態(tài)產生影響。Real-timePCR及Westernblotting結果顯示，與AGEs對照組相比，AGEs顯著增加HRGECsARNOmRNA轉錄和protein表達(P<0.05，圖1-2B、C、D)，該作用呈時間依賴性。與AGEs對照組相比，ARNO表達最高的AGEs48h組，蛋白表達量約為3.4倍。pulldownassay及FITC-Dextran(40kDa)檢測結果顯示，AGEs也時間依賴性增加HRGECsArf6活性和內皮細胞通透性(P<0.05，圖1-2C、E、F)，該作用趨勢與ARNO表達趨勢一致。圖1-2時間依賴實驗中AGEs對HRGECs細胞活力、ARNOmRNA及protein表達、Arf6活性和內皮細胞通透性的影響：*P<0.05，**P<0.01。Control：AGEs對照組。根據以上時間和濃度依賴實驗結果，80μg/mlAGEs刺激24h時，HRGECsARNO/Arf6信號活化和內皮通透性改變顯著，細胞活力也影響較小，故我們選擇80μg/mlAGEs刺激24h作為后續(xù)的AGEs刺激條件。1.2.360min以內高糖對HRGECs中ARNO表達及通透性的影響60min以內高糖時間依賴實驗中，Westernblotting檢測結果顯示，與高糖對照組相比，高糖顯著增加HRGECsARNO表達(P<0.05，圖1-3A、B)，30min達到最高，45min后出現(xiàn)回落。與高糖對照組相比，ARNO表達最高的高糖30min組，蛋白表達
陸軍軍醫(yī)大學碩士學位論文23量在4倍以上。FITC-Dextran(40kDa)檢測結果顯示，內皮細胞通透性與ARNO表達時間趨勢一致(圖1-3C)。甘露醇組與高糖對照組ARNO表達及內皮細胞通透性差異無統(tǒng)計學意義。選用30min為60min以內高糖濃度依賴實驗時相點。Westernblotting檢測結果顯示，與正常糖組相比，高糖顯著增加HRGECsARNO表達(P<0.05，圖1-3D、E)，該作用呈濃度依賴性。與正常糖組相比，ARNO表達最高的高糖40mmol/L組，蛋白表達量近7倍。FITC-Dextran(40kDa)檢測結果顯示，高糖也濃度依賴性增加HRGECs通透性(圖1-3F)。甘露醇組與正常糖組ARNO表達及內皮細胞通透性差異無統(tǒng)計學意義。圖1-360min內時間/濃度依賴實驗中高糖對HRGECsARNO表達及通透性的影響：*P<0.05，**P<0.01。A、B、CControl：高糖對照組。D、E、FControl：正常糖組。1.2.46h以上高糖對HRGECs中ARNO表達及通透性的影響6h以上高糖濃度依賴實驗中，Westernblotting及FITC-Dextran(40kDa)檢測結果顯示，與正常糖組相比，高糖30mmol/L、40mmol/L組HRGECsARNO表達和內皮細胞通透性升高(P<0.05，圖1-4A、B、C)，而10mmol/L、20mmol/L組差異均無統(tǒng)計學意義。與正常糖組相比，ARNO表達最高的高糖40mmol/L組，蛋白表達量約為1.5倍。甘露醇組與正常糖組ARNO表達及內皮細胞通透性差異無統(tǒng)計學意義。選擇30mmol/L為6h以上高糖時間依賴實驗刺激條件。Westernblotting及
【參考文獻】：
碩士論文
[1]ROBO4/ARF6信號通路在高糖誘導的人腎小球內皮細胞高通透性的作用研究[D]. 唐璐瑤.第三軍醫(yī)大學 2017
本文編號：3038665
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