目的:膀胱癌是危害人類生命和健康的常見惡性腫瘤,目前膀胱癌的治療主要是依據病理分期,以手術為主,輔以化學治療,存在著高費用、高復發(fā)的缺點。為此,有關膀胱癌的研究越來越集中于靶向藥物的研發(fā),其中抗腫瘤血管生成是靶向藥物研發(fā)的重要領域。通過文獻調研以及生信分析,我們發(fā)現YB-1與膀胱癌患者的預后相關;YB-1可以抑制miR-29b-3p的成熟;miR-29b-3p的靶基因包括VEGFA。提出如下假說“YB-1通過抑制miR-29b-3p的成熟促進VEGFA的表達從而介導膀胱癌的血管生成”。本實驗擬通過闡釋YB-1與膀胱癌血管生成的內在機制,為膀胱癌的治療提供新的靶點和研究方向。方法:Western Blot檢測EJ、UMUC3、RT4、SW780 4種膀胱癌細胞系中YB-1的表達,在高表達YB-1的EJ、UMUC3細胞系中用RNA干擾技術敲減YB-1,并用EJ細胞建立對照穩(wěn)轉株和YB-1敲減穩(wěn)轉株。通過qRT-PCR、Western blot檢測其下游基因VEGFA、miR-29b-3p的表達;用RNA干擾技術在YB-1敲減穩(wěn)轉株中敲減miR-29b-3p,qRT-PCR、Western ... 

【文章來源】：蘭州大學甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：57 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 膀胱癌概述
    1.2 血管生成與膀胱癌的關系
    1.3 以YB-1為靶點是研究膀胱癌血管生成的新途徑
        1.3.1 YB-1的功能與作用機制
        1.3.2 YB-1與膀胱癌的關系
        1.3.3 YB-1與VEGFA的關系
    1.4 本課題的研究目的及內容
第二章 實驗材料和方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞株及實驗動物
        2.1.2 主要實驗試劑
        2.1.3 實驗中主要設備
        2.1.4 主要溶液配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細胞復蘇
        2.2.2 細胞培養(yǎng)及細胞傳代
        2.2.3 細胞凍存
        2.2.4 siRNA干擾
        2.2.5 shNRA干擾
        2.2.6 穩(wěn)轉株的建立
        2.2.7 CCK-8法檢測YB-1對EJ細胞增值的影響
        2.2.8 單克隆形成實驗
        2.2.9 血管生成實驗
        2.2.10 裸鼠成瘤在動物水平研究YB-1對膀胱癌血管生成的影響
        2.2.11 人膀胱癌標本收集及檢測分析
        2.2.12 細胞總RNA的提取
        2.2.13 反轉錄cDNA的合成
        2.2.14 qRT-PCR檢測YB-1、VEGFA、miR-29b-3p的表達
        2.2.15 統(tǒng)計學分析
        2.2.16 Western blot相關檢測
第三章 實驗結果
    3.1 人膀胱癌細胞系中YB-1的表達情況
    3.2 在EJ、UMUC3細胞系中敲減YB-1的表達
        3.2.1 以shRNA轉染EJ細胞并篩選EJ細胞的YB-1敲減穩(wěn)轉株（YB-1KD-EJ）和對照穩(wěn)轉株（CTRL-EJ）
        3.2.2 以siRNA轉染UMUC3細胞
    3.3 在EJ、UMUC3細胞系中敲減YB-1后VEGFA表達降低,miR-29b-3p升高
        3.3.1 在EJ細胞系中敲減YB-1后VEGFA表達降低,miR-29b-3p升高
        3.3.2 在UMUC3細胞系中敲減YB-1后,VEGFA顯著降低,而miR-29b-3p顯著升高
    3.4 在YB-1KD細胞系中敲減miR-29b-3p的表達可以逆轉VEGFA的表達
        3.4.1 qRT-PCR檢測示在YB-1KD細胞株中敲減miR-29b-3p的表達可以逆轉VEGFA的表達
        3.4.2 WB檢測示在YB-1KD-EJ細胞株中敲減miR-29b-3p的表達可以逆轉VEGFA的表達
    3.5 在EJ細胞系中敲減YB-1后細胞表型的變化
        3.5.1 EJ細胞系敲減YB-1后增值能力未見明顯變化
        3.5.2 EJ細胞系敲減YB-1后克隆形成能力未見明顯變化
        3.5.3 EJ細胞系敲減YB-1后誘導血管形成的能力減弱
    3.6 裸鼠皮下成瘤實驗
        3.6.1 EJ細胞系敲減YB-1后裸鼠腫瘤模型的生長速度減慢
        3.6.2 EJ細胞系敲減YB-1后裸鼠腫瘤中的血管生成明顯減少
    3.7 人膀胱癌標本中YB-1與VEGFA關系
第四章 討論
    4.1 YB-1在膀胱癌細胞系中的表達情況
    4.2 YB-1對miR-29b-3p表達的調控
    4.3 miR-29b-3p與惡性腫瘤的關系
    4.4 YB-1調控VEGFA表達的機制
    4.5 YB-1對膀胱癌細胞增值的影響
    4.6 YB-1對膀胱癌中血管生成的影響
    4.7 YB-1作為膀胱癌治療靶點的前景
第五章 結論
參考文獻
附錄
    7.1 細胞的蛋白提取
    7.2 BCA法測定目的蛋白濃度
    7.3 WB法檢測蛋白的表達
在學期間的研究成果
致謝



本文編號：3038604