發(fā)布時間：2021-02-17 02:20

　　【目的】腎臟的再生能力幾乎為零。有學(xué)者嘗試用去細(xì)胞腎臟生物支架來誘導(dǎo)缺損腎臟的再生,已取得一定進(jìn)展。但單純?nèi)ゼ?xì)胞生物支架有易塌陷、變形、降解快等不足之處。腎支架植入到部分腎切除大鼠體內(nèi)后,支架組織降解過快,不能為組織或細(xì)胞的遷移再生提供良好的生長環(huán)境。要解決這一問題,通常需要通過交聯(lián)劑來改善支架的性能,本研究擬通過京尼平交聯(lián)法提高去細(xì)胞腎臟生物支架的性能,以利于組織和細(xì)胞的再生,能夠為缺損腎臟的再生和修復(fù)提供更好的條件。【方法】SD大鼠90只,體重230g左右,完全隨機分為正常組、未交聯(lián)支架組和京尼平交聯(lián)支架組。從大鼠體內(nèi)結(jié)扎血管,分離腎臟,PBS經(jīng)腹主動脈灌注去血后作為正常組;將離體腎臟依次灌注肝素溶液、1%TritonX-100、1%十二烷基硫酸鈉（SDS）、去離子水,得到去細(xì)胞以后的腎臟生物支架,作為未交聯(lián)支架組;而將制備好的去細(xì)胞生物支架浸泡在0.5%的京尼平溶液中37℃恒溫箱中行化學(xué)交聯(lián)12h得到京尼平交聯(lián)支架組。分別用HE、Masson、免疫熒光染色觀察三組腎臟的組織形態(tài)學(xué)特征;血管鑄型觀察三組腎臟內(nèi)部脈管結(jié)構(gòu),分析支架組腎臟脈管結(jié)構(gòu)的保留情況;Ⅰ型膠原酶促降解實驗檢測三組... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

各組SD大鼠腎臟大體觀

南華大學(xué)碩士學(xué)位論文16圖2各組SD大鼠腎臟HE與Masson染色（10×20)，黑色箭頭所指為腎小球輪廓Fig2HEandMassonstainingofSDratkidney（10×20),theblackarrowpointingtheglomerularoutline腎臟細(xì)胞外基質(zhì)主要成分包括Ⅰ型膠原、Ⅳ型膠原、層粘連蛋白和纖維連接蛋白等，多種膠原纖維交織成網(wǎng)組成細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)[35]。為了觀察去細(xì)胞后腎支架中的細(xì)胞外基質(zhì)保留情況，組織免疫熒光染色結(jié)果顯示（圖3），紅色熒光標(biāo)記為腎臟組織中Ⅰ型膠原的特異性染色，綠色熒光標(biāo)記為Ⅳ型膠原的特異性抗體，藍(lán)色為藍(lán)染的細(xì)胞核。結(jié)果顯示與正常組相比，各支架組均可見明顯的Ⅰ型和Ⅳ型膠原纖維熒光染色，且經(jīng)京尼平交聯(lián)后的腎臟生物支架熒光染色更強，腎小球處尤為明顯。除正常腎臟組以外，各支架組均未見藍(lán)染的細(xì)胞核（圖3），這一結(jié)果與上述HE及Masson染色結(jié)果一致，即正常腎臟經(jīng)去細(xì)胞后能將腎臟組織中細(xì)胞核成分去除，細(xì)胞外基質(zhì)成分沒有受到明顯的破壞，且經(jīng)京尼平交聯(lián)不會損壞支架中的結(jié)構(gòu)。

第3章實驗結(jié)果17圖3各組SD大鼠腎臟膠原熒光染色（10×10），白色箭頭所指為腎小球輪廓Fig3FluorescencestainingofkidneycollagenofSDratsineachgroup(10×10),thewhitearrowpointingtheglomerularoutline此外，為了檢測去細(xì)胞過程對腎臟內(nèi)部血管結(jié)構(gòu)的損傷情況，我們對三組大鼠腎臟進(jìn)行血管鑄型。鑄型結(jié)果（圖4）顯示，與正常腎臟相比，去細(xì)胞腎臟生物支架和京尼平交聯(lián)支架中的血管脈絡(luò)得到了很好的保留。即盡管大鼠腎臟中細(xì)胞核成分被去除，但仍保留完整的細(xì)胞外基質(zhì)成分及脈管結(jié)構(gòu)，這一結(jié)構(gòu)的保留將有助于促進(jìn)支架植入缺損腎臟后的再生。圖4各組SD大鼠腎臟血管鑄型Fig4RenalvascularcorrosioncastingofSDratsineachgroup

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]京尼平交聯(lián)大鼠腎去細(xì)胞生物支架提高支架生物學(xué)性能的實驗研究[J]. 劉丹,杜奧玲,王新旺,張德明,唐匯李,王宇航,陳勝華.  中國臨床解剖學(xué)雜志. 2019(01)
[2]Immobilization of heparin on decellularized kidney scaffold to construct microenvironment for antithrombosis and inducing reendothelialization[J]. Miao Wang,Lili Bao,Xinyu Qiu,Xiaoshan Yang,Siying Liu,Yuting Su,Lulu Wang,Bo Liu,Qing He,Shiyu Liu,Yan Jin.  Science China（Life Sciences）. 2018(10)
[3]京尼平對ob/ob小鼠肝部分切除術(shù)后肝再生的影響[J]. 畢楊輝,崔曉萌,於海天,周子琪,尚宏偉,王穩(wěn),路欣,丁嬌嬌,江瑛.  中國比較醫(yī)學(xué)雜志. 2018(08)
[4]腎臟細(xì)胞外基質(zhì)代謝的調(diào)控[J]. 程虹,諶貽璞.  國外醫(yī)學(xué)(內(nèi)科學(xué)分冊). 2003(11)

碩士論文
[1]京尼平苷的酶解工藝及其產(chǎn)物的降糖活性研究[D]. 鄭禮勝.中南大學(xué) 2010



本文編號：3037272