目的：通過細(xì)胞及分子生物學(xué)試驗方法,檢測TRAIL聯(lián)合Ad-UPII-E1A后對膀胱癌細(xì)胞體外生長的抑制以細(xì)胞凋亡的情況,揭示溶瘤腺病毒對TRAIL細(xì)胞殺傷能力的影響,對細(xì)胞凋亡的影響,初步探討相關(guān)分子機制,為未來TRAIL與溶瘤腺病毒聯(lián)合治療膀胱癌的臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。方法：用Ad-UPⅡ-ElA聯(lián)合TRAIL作用于EJ膀胱癌細(xì)胞。細(xì)胞生存率測定：通過預(yù)試驗確定實驗所需TRAIL的濃度,生長至對數(shù)期的EJ膀胱癌細(xì)胞中加入Ad-UPⅡ-E1A及TRAIL繼續(xù)培養(yǎng),于加藥后24,48,72,96小時后分別用噻唑藍(lán)法（MTT）檢測,并計算細(xì)胞生存率及抑制率,金氏公式法計算分析協(xié)同效應(yīng)。細(xì)胞凋亡分析：按照Apoptosis Assay Kit#2說明書對膀胱癌細(xì)胞進(jìn)行處理后,流式細(xì)胞儀觀察Annexin V-FITC和PI的熒光信號,激發(fā)波長Ex=488nm;發(fā)射波長Em=530nm,分析正常細(xì)胞,凋亡及死亡細(xì)胞分布。提取各處理組總RNA,設(shè)計并合成相關(guān)引物,根據(jù)說明書配置并反轉(zhuǎn)錄為目的基因,在PCR擴(kuò)增儀中反應(yīng)并得到擴(kuò)增曲線,推測凋亡相關(guān)基因Bax的表達(dá)。用caspase3活性檢測試劑盒... 

【文章來源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：40 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
目錄
第一章 TRAIL聯(lián)合膀胱癌特異性重組溶瘤腺病毒對膀胱癌細(xì)胞體外作用的研究
    縮略詞表
    1 前言
        1.1 腺病毒基因治療
        1.2 TRAIL的免疫治療
        1.3 溶瘤腺病毒與TRAIL協(xié)同作用的研究
    2 材料與方法
        2.1 主要材料和試劑
        2.2 主要試劑的配置
        2.3 主要儀器
        2.4 細(xì)胞培養(yǎng)與處理
        2.5 顯微照相觀察細(xì)胞形態(tài)
        2.6 細(xì)胞生存率測定
        2.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡
        2.8 RT-PCR檢測凋亡相關(guān)基因Ba×的表達(dá)情況及Caspase 3活性檢測情況
        2.9 統(tǒng)計學(xué)方法
    3 結(jié)果
        3.1 顯微鏡下觀察干預(yù)后細(xì)胞形態(tài)的變化
        3.2 MTT細(xì)胞抗增殖試驗
        3.3 流式細(xì)胞儀檢測凋亡
        3.4 Real-time PCR檢測凋亡相關(guān)因子Bax基因的表達(dá)情況
        3.5 Caspase 3活性測定
    4 討論
    參考文獻(xiàn)
第二章 綜述：BCG和細(xì)胞因子治療非肌層浸潤性膀胱癌的研究進(jìn)展
    1 摘要
    2 前言
    3 BCG灌注療法
    4 cytokine治療腫瘤
    5 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
在學(xué)期間的研究成果
致謝



本文編號：3029470