本文關(guān)鍵詞：氧化苦參堿對高糖誘導(dǎo)大鼠腎臟系膜細(xì)胞纖維化的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：糖尿病腎病是糖尿病微血管病變之一,嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量,甚至危及患者的生命。探究糖尿病腎病的發(fā)生機(jī)制及如何延緩糖尿病腎病勢在必行。糖尿病腎病的病變特點(diǎn)包括腎小球肥大,細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix ECM)增多及異常沉積,不斷進(jìn)展的腎小管間質(zhì)纖維化以及終末期腎小球硬化。其中,腎間質(zhì)纖維化是疾病進(jìn)展的關(guān)鍵環(huán)節(jié),以大量的細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)聚集為特征。研究表明,轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factor beta-1 TGF-β1)是作用最強(qiáng)的致腎纖維化細(xì)胞因子,TGF-β1/Smads信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路介導(dǎo)TGF-β1的致纖維化作用[1]。結(jié)締組織生長因子(connective tissue growth factor CTGF)是TGF-β1的下游因子,可調(diào)節(jié)成纖維細(xì)胞的生長和ECM的分泌,在腎臟纖維化中發(fā)揮重要作用[2]。骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7(Bone morphogenetic protein-7 BMP-7)是TGF-β超家族的亞群之一,具有顯著的腎臟保護(hù)作用[3]。研究發(fā)現(xiàn)BMP-7通過多種途徑發(fā)揮腎臟保護(hù)作用,并且能夠抑制TGF-β1/Samds信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,具有強(qiáng)大的抗纖維化作用,且這一作用是獨(dú)立于腎臟保護(hù)作用的[4]。氧化苦參堿(Oxymatrine OMT),分子式為C15H24N2O,是從中藥苦參、苦豆子及廣豆根中提取的一種中藥單體,藥理作用廣泛,如抗病毒、抗炎、調(diào)節(jié)免疫及抗纖維化等作用。我們的前期研究證實(shí):糖尿病腎病模型大鼠腎小球Smad1的表達(dá)增加,腎小球系膜內(nèi)基質(zhì)集聚,CTGF的含量增加。既往研究發(fā)現(xiàn)氧化苦參堿具有改善腎臟纖維化的作用,但氧化苦參堿通過何種機(jī)制發(fā)揮抗纖維化作用仍不明確,由此我們提出假設(shè),氧化苦參堿是否通過影響細(xì)胞外基質(zhì)積聚來逆轉(zhuǎn)腎臟纖維化呢?本研究擬通過高糖誘導(dǎo)建立大鼠系膜細(xì)胞纖維化模型,應(yīng)用氧化苦參堿干預(yù)大鼠系膜細(xì)胞纖維化模型,測定模型中IV型膠原蛋白含量及BMP-7、TGF-β1、CTGF、Smad2、Smad3、Smad7表達(dá)水平,在細(xì)胞水平探討B(tài)MP-7及TGF-β1/Smads信號通路與腎臟纖維化的關(guān)系,揭示氧化苦參堿改善糖尿病腎臟間質(zhì)纖維化的分子機(jī)制,為臨床用藥提供理論依據(jù)。目的:研究氧化苦參堿對高糖誘導(dǎo)大鼠腎臟纖維化的影響,探討氧化苦參堿改善腎臟纖維化的機(jī)制。方法:15%胎牛血清的低糖培養(yǎng)基(5.5m M+雙抗)培養(yǎng)大鼠腎臟系膜細(xì)胞,培養(yǎng)細(xì)胞至貼壁生長60%時隨機(jī)分為兩組:正常對照組(NC)和高糖培養(yǎng)基組(HG),正常對照組采用無血清低糖培養(yǎng)基(5.5m M)培養(yǎng),高糖培養(yǎng)基組則采用無血清高糖培養(yǎng)基(30m M)培養(yǎng)。建立高糖誘導(dǎo)的大鼠系膜細(xì)胞纖維化模型,將高糖培養(yǎng)基組隨機(jī)分為高糖組、氧化苦參堿低(O-L 0.04 mg/ml)、中(O-M 0.08 mg/ml)、高(O-H 0.16 mg/ml)劑量組及坎地沙坦(Con 0.005mg/ml)組,正常對照組仍給予無血清低糖培養(yǎng)基培養(yǎng),分別干預(yù)24小時、48小時、72小時后,觀察各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化;MTT比色法檢測各組細(xì)胞存活率;用ELISA方法測定培養(yǎng)基上清液中IV型膠原蛋白的含量,確定造模成功。于氧化苦參堿及坎地沙坦干預(yù)48小時后,電鏡觀察藥物干預(yù)后系膜細(xì)胞形態(tài)變化;采用Real-Time PCR檢測大鼠腎臟系膜細(xì)胞BMP-7、CTGF、TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的m RNA表達(dá)水平;Western-blot檢測系膜細(xì)胞BMP-7、CTGF、TGF-β1、p-Smad3及Smad3的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:1高糖刺激大鼠系膜細(xì)胞后,細(xì)胞形態(tài)及相關(guān)指標(biāo)的變化(1)細(xì)胞形態(tài):大鼠系膜細(xì)胞經(jīng)高糖分別干預(yù)24小時、48小時、72小時后,與Con組相比,HG組細(xì)胞形態(tài)改變,三組間形態(tài)無明顯差異。(2)IV型膠原蛋白含量:HG組培養(yǎng)基上清液中IV型膠原蛋白的含量明顯高于正常對照組(P0.05),提示高糖誘導(dǎo)系膜細(xì)胞纖維化造模成功;分別用高糖培養(yǎng)24小時、48小時、72小時后大鼠系膜細(xì)胞培養(yǎng)基上清液中IV膠原蛋白的含量有上升趨勢,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),提示高糖誘導(dǎo)系膜細(xì)胞纖維化可隨時間延長有上升趨勢,但程度有限。(3)BMP-7、TGF-β1/Smads信號通路高糖干預(yù)48小時后,BMP-7、Smad2、Smad7的m RNA及蛋白表達(dá)水平與正常組相比明顯降低(P0.05);TGF-β1、Smad3、CTGF的m RNA及蛋白表達(dá)水平明顯高于正常組(P0.05),表明高糖可以促進(jìn)系膜細(xì)胞纖維化的發(fā)生。與正常組相比,高糖組Smad2/Smad3比值減小,p-Smad3/Smad3比值顯著升高,均具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。2藥物干預(yù)48小時后,細(xì)胞形態(tài)、IV型膠原蛋白、BMP-7及TGF-β1/Smads信號通路各項(xiàng)指標(biāo)的變化(1)細(xì)胞形態(tài):藥物干預(yù)后細(xì)胞形態(tài)有所恢復(fù),但仍區(qū)別于正常對照組。(2)IV型膠原蛋白含量:氧化苦參堿及坎地沙坦各干預(yù)組IV型膠原蛋白的含量均明顯低于高糖組(P0.05),但仍高于正常對照組(P0.05);IV型膠原蛋白的含量隨氧化苦參堿劑量增加而逐漸減少,提示氧化苦參堿具有改善腎臟纖維化的作用,其改善作用具有明顯的濃度依賴性�？驳厣程菇档虸V型膠原蛋白含量的作用優(yōu)于氧化苦參堿(P0.05)。(3)BMP-7、TGF-β1/Smads信號通路基因轉(zhuǎn)錄水平與高糖組相比,氧化苦參堿及坎地沙坦各干預(yù)組BMP-7、Smad2、Smad7 m RNA水平明顯增加(P0.05),但仍低于正常對照組(P0.05);TGF-β1、Smad3、CTGF m RNA的水平明顯降低(P0.05),高于正常對照組(P0.05);氧化苦參堿各劑量組及坎地沙坦組Smad2/Smad3比值明顯高于高糖組(P0.05)。(4)BMP-7、TGF-β1、CTGF、p-Smad3/Smad3蛋白表達(dá)水平與高糖組相比,氧化苦參堿及坎地沙坦各干預(yù)組BMP-7蛋白表達(dá)水平升高(P0.05),其中,氧化苦參堿高劑量組BMP-7蛋白表達(dá)水平與正常對照組相比不具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),氧化苦參堿中、高劑量組仍低于正常對照組(P0.05)。藥物干預(yù)組CTGF、TGF-β1的蛋白表達(dá)水平低于高糖組(P0.05),但仍高于正常對照組(P0.05);相比于高糖組,氧化苦參堿及坎地沙坦各干預(yù)組p-Smad3/Smad3蛋白表達(dá)明顯下降(P0.05),但高于正常對照組(P0.05)。氧化苦參堿干預(yù)后系膜細(xì)胞纖維化程度改善。結(jié)論:1氧化苦參堿可以改善高糖刺激的大鼠腎臟系膜細(xì)胞形態(tài)的改變。2氧化苦參堿可以減少IV型膠原蛋白的產(chǎn)生,改善大鼠腎臟纖維化。3氧化苦參堿通過上調(diào)BMP-7、Smad2、Smad7的表達(dá),抑制TGF-β1/Smads信號通路,從而逆轉(zhuǎn)大鼠腎臟纖維化,延緩糖尿病腎病的發(fā)生。
【關(guān)鍵詞】：腎臟纖維化 高糖 系膜細(xì)胞 氧化苦參堿 坎地沙坦
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R692
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 英文縮寫13-14
• 前言14-15
• 材料與方法15-27
• 結(jié)果27-31
• 附圖31-37
• 附表37-40
• 討論40-45
• 結(jié)論45
• 參考文獻(xiàn)45-50
• 綜述TGF-β/BMP-7/Smad信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路對腎臟纖維化的影響50-58
• 參考文獻(xiàn)55-58
• 致謝58-59
• 個人簡歷59-60

【二級參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 林文生,張農(nóng),張頌文,劉琛,顧建新,郭慕依;大鼠腎臟系膜細(xì)胞轉(zhuǎn)染人TGF-β1基因可增強(qiáng)MMP-2表達(dá)[J];上海醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2000年01期

2 張明，，郭慕依，陳琦，金惠銘;大鼠腎小球系膜細(xì)胞培養(yǎng)[J];上海醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;1995年03期

  本文關(guān)鍵詞：氧化苦參堿對高糖誘導(dǎo)大鼠腎臟系膜細(xì)胞纖維化的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：302385