目的:明確細胞-晶體反應中外泌體miRNAs的表達譜,篩選出可能參與草酸鈣腎結石形成的miRNA,并初步探討外泌體及其miRNA調控巨噬細胞極化的機制。方法:以0、0.25、0.5、1、2、4、5、8、10 mmol/L的草酸與HK-2細胞作用48h,分別通過CCK-8法檢測各組HK-2細胞的生存率;光鏡下觀察各組HK-2細胞的形態(tài)學變化;LDH法檢測各組HK-2細胞的損傷情況。在此基礎上選擇0、2 mmol/L的草酸作用HK-2細胞48h,超高速離心法分別提取兩個細胞系中的外泌體,并使用透射電鏡、Western Blot和Nanosight納米顆粒跟蹤分析儀對外泌體進行鑒定。采用高通量miRNA生物芯片技術,檢測2 mmol/L組與0 mmol/L組中外泌體中miRNA的表達譜,通過mirPath v.3數據庫對miRNA進行靶基因預測;進行GO（Gene Ontology）分析和KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）pathways分析尋找表達譜中差異性表達的miRNA所對應的靶基因及其富集的功能和信號通路,進一步構建miRNA-... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數】：147 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

0～4mM草酸組的HK-2細胞生存率：從0mM組到0.5mM組，差別無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；從1mM組到10mM組，差別有統(tǒng)計學意義（*P＜0.05；**P＜0.01）

圖 1-2 光鏡下 HK-2 細胞經 0～4 mM 草酸干預后的形態(tài)學特征（×100，200）正常；B 組細胞形態(tài)大致正常，密度稍有減少；C 組細胞形態(tài)開始變異，密度減顯減少，出現明顯纖維化及變性壞死。Figure1-2 Morphological characteristics of HK-2 cells under different concent00,200). The cell morphology and density were normal in group A; The cell morphal and the density was slightly decreased in group B; The cell morphology begansity decreased in group C; The cell density was significantly reduced,showing obeneration and necrosis in group D.3. LDH 法檢測細胞活力各組 LDH 的含量：0 mmol/L 組為（100±14.80）%；1 mmol/L 11.10）%；2 mmol/L 組為（254.67±26.11）%；4 mmol/L 組

胞-晶體反應中外泌體的 miRNAs 表達譜分析及其調控巨噬細胞極化的初步研究 2018 屆博士學位論±13.32）%，組間比較差別有統(tǒng)計學意義（*P＜0.05，**P＜0.01）（圖 1-3圖 1-3 0～4 mM 草酸組的 LDH 表達情況，1～4 mM 組差別有統(tǒng)計學意義（*P＜0.05；**P＜0.01Figure 1-3 From 1mM group to 4mM group, the significant difference were obvious(*P＜0.05;**P.01).4. 外泌體的鑒定4.1 透射電鏡下外泌體的形態(tài)結構各組均可產生這種大小均勻、形態(tài)一致的圓形或橢圓形的囊泡，部囊泡有融合現象。外泌體直徑均介于 30～100nm 之間，平均約 80nm。外泌體外周邊包被雙層脂質膜，可見中央色淡、周邊濃染，邊緣清晰，具有外泌體的特征性表現。

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