目的 :沉默人膀胱癌EJ細胞中p21/Waf1基因的表達,并探討p21/Waf1表達下調(diào)對膀胱癌特異性溶瘤腺病毒復制及對EJ細胞增殖的影響。方法 :設計并合成特異性針對p 21/Waf 1基因的sh RNA,插入含綠色熒光蛋白（green fluorescent protein,GFP）編碼基因的p Magic 7.1載體,構(gòu)建p21/Waf1-sh RNA重組慢病毒質(zhì)粒p LVT1051,并進行PCR和測序鑒定。將p LVT1051、p CMV-VSV-G和p CMV-d R8.91三種質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細胞,包裝產(chǎn)生慢病毒。將攜帶有p21/Waf1-sh RNA的慢病毒感染EJ細胞,采用嘌呤霉素篩選p21/Waf1-sh RNA穩(wěn)定轉(zhuǎn)入的EJ細胞,采用實時熒光定量PCR和蛋白質(zhì)印跡法分別檢測p21/Waf1-sh RNA穩(wěn)定感染后EJ細胞中p21/waf1 m RNA和蛋白的表達水平。將膀胱癌特異性溶瘤腺病毒Ad/PSCAE/UPⅡ/E1A感染p 21/waf 1基因沉默的EJ細胞,采用蛋白質(zhì)印跡法檢測病毒復制相關指標E1A和Hexon蛋白的表達水平,MTT法檢測腺病毒Ad/PSC... 

【文章來源】：腫瘤. 2015年10期 北大核心

【文章頁數(shù)】：9 頁

【文章目錄】：
1材料與方法
    1.1細胞和試劑
    1.2方法
        1.2.1構(gòu)建p21/Waf1-sh RNA慢病毒載體
        1.2.2慢病毒的包裝及效價的測定
        1.2.3慢病毒感染EJ細胞
        1.2.4嘌呤霉素濃度的篩選
        1.2.5穩(wěn)定感染p21/Waf1-sh RNA膀胱癌EJ細胞的篩選
        1.2.6實時熒光定量PCR檢測穩(wěn)定感染p21/ Waf1-sh RNA的EJ細胞中p21/Waf1 m RNA的表達水平
        1.2.7蛋白質(zhì)印跡法檢測p 21/Waf 1基因沉默后對EJ細胞中p21/Waf1蛋白表達的影響以及腺病毒Ad/PSCAE/UP Ⅱ /E1A感染后對p21/Waf1基因沉默的EJ細胞中E1A和Hexon蛋白表達的影響
        1.2.8 MTT法檢測腺病毒Ad/PSCAE/UP Ⅱ E1A對p 21/Waf 1基因沉默的EJ細胞增殖的影響
        1.2.9統(tǒng)計學方法
2結(jié)果
    2.1攜帶p21/Waf1-sh RNA重組慢病毒載體的測序結(jié)果
    2.2重組慢病毒感染EJ細胞
    2.3重組慢病毒對EJ細胞中p21/Waf1 m RNA及蛋白表達的影響
    2.4膀胱癌特異性溶瘤腺病毒對p21/Waf1表達沉默的EJ細胞中E1A和Hexon蛋白表達的影響
    2.5膀胱癌特異性溶瘤腺病毒Ad/PSCAE/UP Ⅱ /E1A對p21/Waf1沉默的EJ細胞增殖的影響
3討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]小RNA干擾沉默CD147基因?qū)Π螂装㏕-24細胞生物學行為的影響[J]. 薛義軍,孫志熙,鄒曉峰,肖日海,張國璽,袁源湖,龍大治,吳玉婷,徐剛.  腫瘤. 2012(05)
[2]小鼠尿路斑塊2啟動子對人細胞特異性及表達調(diào)控研究[J]. 朱宏建,張智清,曾祥福,魏守順,徐春曉,黃國錦,郭應祿.  中華實驗外科雜志. 2003(11)



本文編號：2943228