目的利用分枝狀聚乙烯亞胺（BPEI）、樹(shù)枝狀聚合物聚酰胺-胺（PAMAM）和線型的聚乙烯亞胺（LPEI）包載具有抑制前列腺癌細(xì)胞LNCa P增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的miRNA-15a和miRNA-16-1構(gòu)建3種聚陽(yáng)離子納米復(fù)合物,對(duì)其抑制LNCa P細(xì)胞作用進(jìn)行考察。方法利用粒徑分析儀測(cè)定3種納米復(fù)合物的粒徑Zeta電位,利用凝膠電泳實(shí)驗(yàn)測(cè)定載體材料包裹miRNA的穩(wěn)定性;利用熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀考察3種復(fù)合物對(duì)LNCa P細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率;CCK8法測(cè)定抑制LNCa P細(xì)胞增殖效果;Western blot法測(cè)定BCL-2、Cyclin D1和Wnt3a蛋白表達(dá)效果。結(jié)果分枝狀聚乙烯亞胺,樹(shù)枝狀聚合物聚酰胺-胺和線型的聚乙烯亞胺3種材料包裹miRNA可形成穩(wěn)定的納米復(fù)合物,在N/P=5時(shí),分枝狀聚乙烯亞胺/miRNA-CY3對(duì)LNCa P的轉(zhuǎn)染效率高于樹(shù)枝狀聚合物聚酰胺-胺/miRNA-CY3和線型的聚乙烯亞胺/miRNA-CY3,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。分枝狀聚乙烯亞胺、樹(shù)枝狀聚合物聚酰胺-胺和線型的聚乙烯亞胺都可以攜帶miRNA-15a和miRNA-16-1進(jìn)入LNCa... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)藥學(xué)雜志. 2015年09期 北大核心

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【部分圖文】：

不同N/P比3種復(fù)合物粒徑．n=3，x珋±sBPEI/miＲNA與PAMAM/miＲNA相比，1)

Bcl-2、CyclinD1和Wnt3a抗體的稀釋度為1∶200;β-actin的稀釋度為1∶5000)4℃過(guò)夜;加入相對(duì)應(yīng)的HＲP標(biāo)記的二抗(均為1∶2000稀釋)室溫下孵育2h;0.1%TritonX-100/PBS于室溫?fù)u床洗膜3次，每次15min。PVDF膜經(jīng)ECL液處理后壓片、曝光、顯影、定影。1.9統(tǒng)計(jì)學(xué)處理統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)用Mean±SD表示，組間比較采用ANOVA方差分析，P＜0.05則認(rèn)為存在顯著性差異。涉及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，均采用SPSS18.0軟件完成。2結(jié)果2.1不同N/P比下復(fù)合物粒徑和Zeta電位3種復(fù)合物粒徑隨著N/P比的增大而降低(圖1)，Zeta電位隨著N/P比的增大而增加(圖2)，說(shuō)明隨著N/P比的增大，載體所帶電荷增加，使得復(fù)合物包裹更加緊密。當(dāng)N/P比為5時(shí)，PAMAM/miＲ粒徑分別與BPEI/miＲ和LEI/miＲ有顯著性差異(P＜0.01)�？赡苁怯捎赑AMAM所帶電荷少于BPEI和LPEI，造成包裹miＲNA能力較弱，故形成的復(fù)合物粒徑也較大。2.2不同復(fù)合物凝膠阻滯電泳復(fù)合物凝膠電泳阻滯分析可以看出(圖3)，3種復(fù)合物的N/P值在1時(shí)，miＲNA不能被3種材料包裹，可隨著電場(chǎng)進(jìn)行遷移，與核酸探針結(jié)合后，在紫外線照射下，可以看到清晰的條帶。當(dāng)3種復(fù)合物的N/P值在5時(shí)，miＲNA可以完全被包裹，阻止其在電場(chǎng)中的遷移;同時(shí)，由于miＲNA可以被完全包裹，不能被與核酸探針結(jié)合，故在紫外線照射的情況下，未見(jiàn)條帶顯出。圖1不同N/P比3種復(fù)合物粒徑．n=3，x珋±sBPEI/miＲNA與PAMAM/miＲNA相比，1)P＜0.01;LPEI/miＲNA與PAMAM/miＲNA相比，2)P＜0.01Fig.1SizesofB/miＲ，P/miＲandL/miＲcomplexesatvari-ousN/Pratios．n=3，x珋±s1)P＜0.01，BPEI/miＲNAvsPAMAM/miＲNA;2)P＜0.01，LPEI/miＲNAvsPAMAM/miＲNA圖2不同N/P比3種復(fù)合物Zeta電位．n=3，x珋±sFig.2ZetapotentialsofB/miＲ，P

治觶琍＜0.05則認(rèn)為存在顯著性差異。涉及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，均采用SPSS18.0軟件完成。2結(jié)果2.1不同N/P比下復(fù)合物粒徑和Zeta電位3種復(fù)合物粒徑隨著N/P比的增大而降低(圖1)，Zeta電位隨著N/P比的增大而增加(圖2)，說(shuō)明隨著N/P比的增大，載體所帶電荷增加，使得復(fù)合物包裹更加緊密。當(dāng)N/P比為5時(shí)，PAMAM/miＲ粒徑分別與BPEI/miＲ和LEI/miＲ有顯著性差異(P＜0.01)。可能是由于PAMAM所帶電荷少于BPEI和LPEI，造成包裹miＲNA能力較弱，故形成的復(fù)合物粒徑也較大。2.2不同復(fù)合物凝膠阻滯電泳復(fù)合物凝膠電泳阻滯分析可以看出(圖3)，3種復(fù)合物的N/P值在1時(shí)，miＲNA不能被3種材料包裹，可隨著電場(chǎng)進(jìn)行遷移，與核酸探針結(jié)合后，在紫外線照射下，可以看到清晰的條帶。當(dāng)3種復(fù)合物的N/P值在5時(shí)，miＲNA可以完全被包裹，阻止其在電場(chǎng)中的遷移;同時(shí)，由于miＲNA可以被完全包裹，不能被與核酸探針結(jié)合，故在紫外線照射的情況下，未見(jiàn)條帶顯出。圖1不同N/P比3種復(fù)合物粒徑．n=3，x珋±sBPEI/miＲNA與PAMAM/miＲNA相比，1)P＜0.01;LPEI/miＲNA與PAMAM/miＲNA相比，2)P＜0.01Fig.1SizesofB/miＲ，P/miＲandL/miＲcomplexesatvari-ousN/Pratios．n=3，x珋±s1)P＜0.01，BPEI/miＲNAvsPAMAM/miＲNA;2)P＜0.01，LPEI/miＲNAvsPAMAM/miＲNA圖2不同N/P比3種復(fù)合物Zeta電位．n=3，x珋±sFig.2ZetapotentialsofB/miＲ，P/miＲandL/miＲcomplexesatvariousN/Pratios．n=3，x珋±s圖3不同N/P比3種復(fù)合物凝膠阻滯電泳分析結(jié)果1，4，7－BPEI/miＲNA;2，5，8－PAMAM/miＲNA;3，6，9－LPEI/miＲNA.1，2，3－N/P=1;4，5，6－N/P=5;7，8，9－N/P=10Fig.3ＲesultsofagarosegelelectrophoresisofcomplexesatvariousN/Pratios1，4，7－BPEI/mi?

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]YPSMA-1單克隆抗體修飾的樹(shù)突狀高分子前列腺癌靶向基因遞送載體[J]. 武鑫,蔡溱,朱全剛,王翔,王曉宇,葉麗華,劉繼勇,丁雪鷹,高靜,高申.  中國(guó)藥學(xué)雜志. 2012(06)



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