本文關(guān)鍵詞：Parkin介導(dǎo)CD36單泛素化在高脂誘導(dǎo)腎小球足細(xì)胞凋亡中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景：隨著人們生活水平的提高,糖尿病發(fā)病率逐年增高,而作為糖尿病主要死亡原因之一的糖尿病腎病也逐漸威脅著人們的健康,成為一個(gè)全球性健康問題。糖尿病的并發(fā)癥主要分為大血管和微血管病變,而作為微血管病變之一的糖尿病腎病,是糖尿病人致死的主要原因,臨床特征性病變?yōu)榈鞍啄?逐漸發(fā)生腎臟功能的損害,最終導(dǎo)致腎功能衰竭。高血糖是糖尿病腎病主要發(fā)病機(jī)制之一,它可改變細(xì)胞內(nèi)外代謝：如糖基化終末產(chǎn)物、蛋白激酶C活性的增加和多元醇代謝異常,還可引起細(xì)胞內(nèi)的應(yīng)激缺氧、氧化應(yīng)激和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)應(yīng)激,最終出現(xiàn)糖尿病腎臟損害。此外,糖尿病腎病患者還常常伴有高脂血癥,而高脂血癥既可加重腎病患者已有的腎損害,又會(huì)導(dǎo)致健康的腎臟受損,脂代謝紊亂與高糖協(xié)同作用,最終導(dǎo)致糖尿病腎病的發(fā)生。足細(xì)胞(Podocyte)是腎小球固有的細(xì)胞之一,與內(nèi)皮細(xì)胞、基底膜(GBM)一起共同構(gòu)成腎小球?yàn)V過屏障,是阻止血漿蛋白丟失而形成蛋白尿的最后屏障。早期研究表明,多種損傷因素如針對(duì)細(xì)胞膜抗原的抗原抗體反應(yīng),血流動(dòng)力學(xué)改變,代謝因素,基因突變,中毒,感染,蛋白超負(fù)荷等都能直接或間接影響到足細(xì)胞。足細(xì)胞損傷形式多種多樣,包括：1)足突融合消失,2)足細(xì)胞裂孔膜成分表達(dá)和分布異常,3)足細(xì)胞活化分泌炎癥介質(zhì)、分泌細(xì)胞外基質(zhì),4)足突與腎小球基底膜粘附功能損傷,5)足細(xì)胞凋亡、脫落,6)足細(xì)胞數(shù)量密度減少。在2型糖尿病患者中,足細(xì)胞數(shù)量的減少,預(yù)示著腎臟功能的進(jìn)行性惡化及蛋白尿的進(jìn)行性加重。而足細(xì)胞的凋亡便是足細(xì)胞數(shù)量減少的一個(gè)主要機(jī)制。CD36是一種跨膜糖蛋白,屬于B族清道夫受體,在體內(nèi)多種細(xì)胞表達(dá),如巨噬細(xì)胞,脂肪細(xì)胞,微血管內(nèi)皮細(xì)胞,腎小管上皮細(xì)胞,足細(xì)胞等。CD36可與多種配體相結(jié)合,包括長鏈脂肪酸(long chain fatty acid, LCFA)和修飾的低密度脂蛋白(OxLDL),糖基化終末產(chǎn)物(AGEs),血小板反應(yīng)蛋白(TSP-1),以及膠原蛋白Ⅰ和Ⅳ,從而參與各種生理病理過程。有研究顯示,CD36可介導(dǎo)細(xì)胞攝取脂質(zhì)增加,進(jìn)而參與多種疾病的發(fā)生,比如：在巨噬細(xì)胞中,CD36介導(dǎo)ox-LDL或脂肪酸的吸收,從而導(dǎo)致粥樣硬化病變；在肝細(xì)胞中,CD36參與肝臟損害及肝纖維化的發(fā)生；在近端腎小管上皮細(xì)胞中,CD36介導(dǎo)近端腎小管上皮細(xì)胞的凋亡而導(dǎo)致糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展。但是,關(guān)于CD36在糖尿病腎病中高脂介導(dǎo)的足細(xì)胞凋亡中的作用卻少有報(bào)道。parkin基因是常染色體隱性遺傳性少年型帕金森綜合征(AR-JP)的致病基因,位于6號(hào)染色體上,由465個(gè)氨基酸組成,其氨基端有76個(gè)氨基酸與泛素同源,稱為泛素樣結(jié)構(gòu)域(UBL),羧基端稱為RING-box區(qū)域(RBR),包括212個(gè)氨基酸,由兩個(gè)環(huán)指結(jié)構(gòu)(RING1，RING2)以及它們之間的環(huán)指間區(qū)(IBR)組成,泛素樣結(jié)構(gòu)域和環(huán)指結(jié)構(gòu)域之間的區(qū)域稱為連接區(qū)(the linker region)。 Parkin蛋白可作為E3泛素蛋白連接酶,與E1泛素蛋白激活酶和E2泛素蛋白結(jié)合酶一起可促使一種或幾種未知底物蛋白的泛素化(包括多聚泛素化和單泛素化)。研究發(fā)現(xiàn),Parkin可介導(dǎo)B族清道夫受體CD36的單泛素化,而增加其蛋白的穩(wěn)定性,進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞對(duì)脂肪酸吸收增加。但是關(guān)于parkin介導(dǎo)的CD36單泛素化修飾過程在脂肪酸介導(dǎo)的腎小球足細(xì)胞凋亡中的作用,目前未見報(bào)道。本研究通過棕櫚酸刺激足細(xì)胞模擬體內(nèi)高脂環(huán)境,觀察Parkin與CD36的mRNA及蛋白水平的表達(dá),細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積,以及進(jìn)一步出現(xiàn)的脂毒性引起的足細(xì)胞凋亡。通過實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象研究并探討其可能的機(jī)制,為臨床上進(jìn)一步認(rèn)識(shí)高脂血癥腎損害機(jī)制及其干預(yù)治療提供一定的理論依據(jù)。目的：研究parkin調(diào)節(jié)CD36降解在脂肪酸介導(dǎo)的腎小球足細(xì)胞凋亡中的作用。方法：收集石蠟包埋的DN腎活檢組織切片標(biāo)本,同時(shí)以因外傷手術(shù)切除的腎組織(無基礎(chǔ)腎臟疾病及不伴高脂血癥患者腎臟組織)作為對(duì)照組,采用免疫組化及免疫熒光染色來檢測腎臟組織中Parkin及CD36的表達(dá)情況。體外培養(yǎng)小鼠永生性腎小球足細(xì)胞株(MPC5),用棕櫚酸鈉(一種飽和脂肪酸)刺激足細(xì)胞,采用Q-PCR, western blot及細(xì)胞免疫熒光來檢測Parkin及CD36在足細(xì)胞中的表達(dá)；油紅染色及BODIPY熒光探針檢測細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)集聚水平的變化；流式細(xì)胞儀、TUNEL染色及western blot檢測足細(xì)胞凋亡；DCFH-DA染色檢測細(xì)胞內(nèi)ROS水平。數(shù)據(jù)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,數(shù)據(jù)用SPSS 21.0軟件處理,兩組資料比較采用t檢驗(yàn),多組資料比較采用單因素方差分析,P值0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：(1)免疫組化及組織免疫熒光顯示,Parkin及CD36在伴高脂的糖尿病腎病患者腎臟組織腎小球及腎小管中的表達(dá)較對(duì)照組明顯增高,且二者在腎臟組織中存在共定位。(2)采用Q-PCR, western blot及細(xì)胞免疫熒光顯示棕櫚酸鈉刺激后,足細(xì)胞Parkin及CD36 mRNA及蛋白表達(dá)水平明顯上調(diào),各組兩兩比較,差異有顯著性(P0.05)。免疫熒光顯示足細(xì)胞中Parkin及CD36存在共定位。(3)我們通過油紅O及BODIPY染色來檢測足細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)攝取,結(jié)果顯示,棕櫚酸鈉刺激下,足細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)攝取明顯增加,而用CD36特異性抑制劑SSO預(yù)處理后,發(fā)現(xiàn)SSO抑制了棕櫚酸鈉所致的脂質(zhì)攝取的增加。(4)流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示在一定濃度范圍內(nèi),棕櫚酸鈉呈劑量依賴性的誘導(dǎo)足細(xì)胞凋亡；TUNEL及PI染色也進(jìn)一步證實(shí),棕櫚酸鈉誘導(dǎo)組較對(duì)照組的調(diào)亡細(xì)胞大量增加；采用western blot檢測發(fā)現(xiàn),棕櫚酸鈉刺激下足細(xì)胞cleaved-caspase3呈劑量依賴性地表達(dá)增加。(5)實(shí)驗(yàn)中,我們用CD36特異性抑制劑SSO預(yù)處理足細(xì)胞,結(jié)果發(fā)現(xiàn)SSO可抑制棕櫚酸鈉誘導(dǎo)足細(xì)胞的凋亡,與對(duì)照組、棕櫚酸組各組兩兩比較,差異有顯著性(P0.05)。 (6)DCFH-DA(2',7'-dichlorof luorescein diacetate)染色發(fā)現(xiàn),在棕櫚酸鈉刺激下,足細(xì)胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生明顯增加,而用CD36的特異性抑制劑SSO預(yù)處理后,ROS的產(chǎn)生明顯減少。同時(shí),氧自由基清除劑tempo1也能減少棕櫚酸鈉刺激引起的氧自由基增加及凋亡增加。(6)我們采用免疫熒光及免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)技術(shù),研究發(fā)現(xiàn)足細(xì)胞內(nèi)Parkin與CD36蛋白相互結(jié)合,足細(xì)胞過表達(dá)Parkin后,CD36降解減少,提示足細(xì)胞中Parkin可能單泛素化CD36,抑制其降解。結(jié)論：Parkin與CD36參與高脂介導(dǎo)的足細(xì)胞凋亡,這可能是脂代謝紊亂腎損害的重要機(jī)制之一。
【關(guān)鍵詞】：Parkin CD36 足細(xì)胞 凋亡 棕櫚酸鈉
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R692.9;R587.2
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對(duì)照5-6
• 中文摘要6-11
• 英文摘要11-17
• 前言17-19
• 1. 材料、試劑和儀器19-24
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法24-30
• 3. 結(jié)果30-40
• 4. 討論40-44
• 全文總結(jié)44-45
• 參考文獻(xiàn)45-48
• 文獻(xiàn)綜述48-58
• 參考文獻(xiàn)55-58
• 致謝58-59
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文59

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 Letavernier E;Bruneval P;Vandermeersch S;季曙明;;西羅莫司對(duì)維持腎小球足細(xì)胞完整性調(diào)節(jié)途徑的影響[J];中華移植雜志(電子版);2009年03期

2 黃松明;張愛華;丁桂霞;費(fèi)莉;郭梅;潘曉勤;陳榮華;;過氧化物酶體增殖物活化受體γ激動(dòng)劑減輕血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的腎小球足細(xì)胞損傷作用[J];實(shí)用兒科臨床雜志;2007年22期

3 司曉蕓,賈汝漢,黃從新,丁國華,劉紅燕;腎小球足細(xì)胞損傷在脂質(zhì)腎損害發(fā)病中的作用[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2002年02期

4 康郁林;朱光華;何威遜;;腎小球足細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)的適應(yīng)性應(yīng)變[J];實(shí)用兒科臨床雜志;2009年05期

5 范青鋒,丁潔;腎小球足細(xì)胞系的研究進(jìn)展[J];實(shí)用兒科臨床雜志;2005年01期

6 畢逢辰;張彬;鄭亞莉;;Cdk5在腎小球足細(xì)胞中的表達(dá)及作用[J];寧夏醫(yī)學(xué)雜志;2014年03期

7 曹璐;毛建華;;腎小球足細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)降解機(jī)制[J];實(shí)用兒科臨床雜志;2011年17期

8 馬媛媛;于力;;瞬時(shí)受體電位陽離子通道蛋白6在腎小球足細(xì)胞損傷中的作用[J];實(shí)用兒科臨床雜志;2012年05期

9 楊麗嶸;李博;鄭亞莉;;沉默p35表達(dá)引起腎小球足細(xì)胞凋亡的研究[J];寧夏醫(yī)學(xué)雜志;2014年03期

10 侯海晶;王立新;楊霓芝;;三芪口服液對(duì)糖尿病腎病大鼠腎小球足細(xì)胞及其蛋白表達(dá)的影響[J];湖北中醫(yī)雜志;2012年06期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張瑜;周建華;;乙肝病毒相關(guān)性腎炎腎小球足細(xì)胞病變機(jī)制的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十五次全國兒科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（上冊(cè)）[C];2010年

2 李月紅;黃海長;王素霞;鄒萬忠;章友康;;實(shí)驗(yàn)性局灶節(jié)段性腎小球硬化癥大鼠腎小球足細(xì)胞脫落及其意義[A];“中華醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)分會(huì)2004年年會(huì)”暨“第二屆全國中青年腎臟病學(xué)術(shù)會(huì)議”論文匯編[C];2004年

3 朱春華;黃松明;袁楊剛;鮑華英;張愛華;;過氧化物酶體增殖物活化受體γ減輕腎小球足細(xì)胞損傷的機(jī)制[A];2012年江浙滬兒科學(xué)術(shù)年會(huì)暨浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)、兒內(nèi)科疾病診治新進(jìn)展國家級(jí)學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2012年

4 朱春華;張愛華;黃松明;袁楊剛;陳榮華;;羅格列酮對(duì)醛固酮誘導(dǎo)的腎小球足細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十五次全國兒科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（上冊(cè)）[C];2010年

5 朱春華;黃松明;張愛華;丁桂霞;袁楊剛;鮑華英;;過氧化物酶體增殖物活化受體γ減輕腎小球足細(xì)胞損傷的機(jī)制[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十七次全國兒科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（上冊(cè)）[C];2012年

6 李曉艷;于力;張瑤;;他克莫司對(duì)腎小球足細(xì)胞TRPC6表達(dá)和分布的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十七次全國兒科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（上冊(cè)）[C];2012年

7 王文靜;毛建華;;MY01E過表達(dá)后對(duì)腎小球足細(xì)胞的形態(tài)及功能的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十七次全國兒科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（下冊(cè)）[C];2012年

8 王文靜;毛建華;;MYO1E過表達(dá)后對(duì)腎小球足細(xì)胞的形態(tài)及功能的影響[A];2012年江浙滬兒科學(xué)術(shù)年會(huì)暨浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)、兒內(nèi)科疾病診治新進(jìn)展國家級(jí)學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2012年

9 郝志宏;于力;吳汪麗;;地塞米松通過穩(wěn)定PI3K/Akt信號(hào)通路抗腎小球足細(xì)胞的凋亡[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十七次全國兒科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（上冊(cè)）[C];2012年

10 孫亮亮;石勇銓;;通絡(luò)方劑對(duì)糖尿病大鼠腎小球足細(xì)胞的保護(hù)作用及其機(jī)制[A];5TH全國中西醫(yī)結(jié)合內(nèi)分泌代謝病學(xué)術(shù)大會(huì)暨糖尿病論壇論文集[C];2012年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 雷鳳英;全反式維甲酸對(duì)體外培養(yǎng)阿霉素致腎小球足細(xì)胞損傷的作用及其分子機(jī)制[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2014年

2 張瑜;乙肝病毒相關(guān)性腎炎腎小球足細(xì)胞病變機(jī)制的研究[D];華中科技大學(xué);2010年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 潘明嬌;自噬在衰老自發(fā)性高血壓大鼠足細(xì)胞損傷中的作用研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

2 華微;Parkin介導(dǎo)CD36單泛素化在高脂誘導(dǎo)腎小球足細(xì)胞凋亡中的作用[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

3 陳蘭;腎小球腎炎腎小球足細(xì)胞脫落與腎組織鈉氫交換調(diào)節(jié)因子2表達(dá)的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2006年

4 張炯;糖皮質(zhì)激素保護(hù)腎小球足細(xì)胞損傷及促進(jìn)其損傷后修復(fù)機(jī)制[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

5 哈那提·哈別什;通絡(luò)保腎復(fù)方對(duì)高糖環(huán)境下腎小球足細(xì)胞表達(dá)TGF-β1影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2011年

6 沈趙楠;轉(zhuǎn)染p53siRNA對(duì)高糖損傷的腎小球足細(xì)胞泛素化通路及細(xì)胞凋亡影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

7 張瑤;地塞米松對(duì)腎小球足細(xì)胞CD2AP/TRPC6表達(dá)和分布的影響[D];廣州醫(yī)學(xué)院;2010年

8 牛霞;氧化應(yīng)激反應(yīng)對(duì)腎小球足細(xì)胞裂隙膜蛋白podocin的影響[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2007年

9 葉宜靜;祛風(fēng)濕中藥對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)腎小球足細(xì)胞表型的影響[D];浙江中醫(yī)藥大學(xué);2013年

10 宋林;中藥復(fù)方對(duì)阿霉素腎病大鼠腎小球足細(xì)胞裂隙膜上Nephrin和Podocin分子表達(dá)的影響[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2004年

  本文關(guān)鍵詞：Parkin介導(dǎo)CD36單泛素化在高脂誘導(dǎo)腎小球足細(xì)胞凋亡中的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：293645