本文關(guān)鍵詞：腎損傷時MPP5與鉀離子波動及炎癥因子的相關(guān)變化分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：觀察慶大霉素(GM)、腺嘌呤(Adenine)致大鼠腎損傷時血鉀的波動情況,探討棕櫚�；さ鞍�5(MPP5)蛋白在腎損傷后對K+的調(diào)節(jié)作用；研究GM、環(huán)孢素A (CsA).順鉑(DDP)誘導人腎小管上皮細胞(HK-2)損傷后,MPP5與炎癥因子的變化及其相關(guān)性。方法：1.64只大鼠隨機分為正常對照組,GM 7、10、15、20d組,每組8只。GM組腹腔注射GM 100mg·kg-1,正常對照組給予同等體積的溶媒溶液,分別在腹腔注射8d、11d、16d、21d每組取8只大鼠,腹主動脈取血,分離血清,檢測血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、鈉(Na+)、鉀(K+)、氯(C1-)、腫瘤壞死因子(TNF-a)、白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)；收集24h尿液,檢測尿液中肌酐(Cr)、鈉(Na+)、鉀(Cl-)、氯(C1-)、腎損傷分子-1(KIM-1)；腎臟組織進行組織病理學檢測。Western blot.免疫組化(IHC)檢測腎組織中MPP5蛋白表達情況,Western blot檢測腎組織中NF-κB蛋白表達情況。2.32只大鼠隨機分為正常對照組,Adenine 15.30d組,每組8只。Adenine組給予Adenine 250mg·kg-1灌胃,正常對照組給予同等體積的溶媒溶液,分別在灌胃16d、31d每組取8只大鼠取血,腹主動脈取血,分離血清,檢測血清中BUN、Cr、Na+、K+、 Cl-、TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8;收集24h尿液,檢測尿液中Cr、Na+、K+、Cl-、KIM-1;腎臟組織進行組織病理學檢測。Western blot、IHC檢測腎組織中MPP5蛋白表達的變化,Western blot檢測腎組織中NF-κB蛋白表達情況。3. GM (0.0625、0.125、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00mg·ml-1)、CsA (1.25、2.50、 5.00、10.00、20.00、40.00、80.00、160.00μM)、DDP (1.25、2.50、5.00、10.00、20.00、 40.00、80.00、160.00μM),分別作用于HK-2細胞24h,用MTT法檢測GM、CsA、DDP作用下HK-2細胞增殖情況；觀察GM、CsA、DDP對細胞的形態(tài)變化的影響；檢測GM (0.5、1.0、2.0 mg·ml-1)、CsA (2.5、5.0、10.0μM). DDP (2.5、5.0、10.0μM)作用于HK-2細胞24h后,細胞釋放乳酸脫氫酶(LDH)的變化情況；Western blot、免疫熒光(IF)檢測HK-2細胞中MPP5、轉(zhuǎn)錄因子NF-κB、酪氨酸蛋白IKBa、環(huán)氧酶-2(COX-2)蛋白的表達情況。結(jié)果：1.大鼠連續(xù)腹腔注射GM后體重增長幅度放緩,尿量先增加后減少,血清中Cr、BUN顯著升高(P0.01,P0.001)。GM7d組血清中C1-較對照組升高(P0.05),K+有升高趨勢(P0.05),Na+變化不大,尿液中K+、Na+、Cl-明顯減少(P0.05,P0.001)；TNF-α、IL-6、IL-8升高(P0.05,P0.01),IL-1沒有明顯變化(P0.05);MPP5表達有降低趨勢(P0.05)；病理結(jié)果顯示,大鼠腎小管上皮細胞出現(xiàn)水腫,部分細胞萎縮、壞死且有空泡形成。10d組血清中K+較對照組有升高趨勢(P0.05),Na+、Cl-降低(P0.05,P0.001)；尿液中Na+、Cl-含量降低(P0.05),與7d組比較有升高趨勢；TNF-α、IL-6、IL-8升高明顯(P0.05),IL-1變化不大,NF-κB表達升高；MPP5表達降低(P0.05)；病理結(jié)果顯示,大鼠腎小管上皮細胞出現(xiàn)萎縮且伴有空泡。15d組血清中K+、Na+變化不大,Cl"降低(P0.001)；尿液中K+、Na+趨于正常水平,Cl-有升高趨勢(P0.05)；TNF-α、IL-6、IL-8升高(P0.05,P0.01),IL-1沒有明顯變化；MPP5表達較10d有升高趨勢；病理結(jié)果顯示,腎小管嚴重萎縮且伴有空泡形成。20d組血清中K+、Cl-降低(P0.05, P0.01), Na+水平穩(wěn)定；尿液中K+濃度有升高趨勢(P0.05), Na+、Cl-較對照組沒有變化；TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8升高(P0.05,P0.01); MPP5表達減少(P0.01)；病理結(jié)果顯示,腎小管出現(xiàn)嚴重萎縮且伴有空泡形成。2.大鼠用Adenine連續(xù)灌胃30d,體重增長幅度由相對減慢逐漸變?yōu)檠杆贉p輕,尿量明顯增加(P0.001),尿液中KIM-1含量以及血清中Cr、BUN濃度明顯升高(P0.05,P0.001)。Adeninel5d組血清中K+、Na+、CI-較對照組明顯增多(P0.05,P0.01),尿液中K+、Na+、Cl-顯著降低(P0.01,P0.001)；炎癥因子TNF-α、IL-1、IL-8升高(P0.01),IL-6變化不明顯,NF-κB表達升高；MPP5表達有升高趨勢；病理結(jié)果顯示,大鼠腎小管上皮出現(xiàn)嚴重壞死,有大量炎細胞浸潤,管腔內(nèi)有結(jié)晶沉積。30d組血清中K+、Na+濃度偏高,同15d比較含量略有增加(P0.01),CI-水平恢復至正常；尿液中K+、Na+、Cl-含量較低(P0.01, P0.001); TNF-α IL-1、IL-8升高明顯(P0.05,P0.001),IL-6沒有變化；與15d組比較,MPP5表達量明顯下降(P0.05)；病理結(jié)果顯示,大鼠腎小管上皮細胞出現(xiàn)嚴重皺縮壞死,伴隨炎細胞浸潤,細胞核增大,腎小管擴張且有結(jié)晶沉積。3.MTT結(jié)果顯示,GM、CsA、DDP能夠抑制HK-2細胞增殖,并且呈現(xiàn)劑量依賴性；在倒置顯微鏡下觀察GM0.5、1.0、2.0 mg·kg-1、CsA 2.5、5.0、10.0μM,DDP 2.5、5.0、10.0μM劑量分別作用于HK-2細胞24h后,各組細胞形態(tài)均發(fā)生改變,表現(xiàn)明顯皺縮；細胞上清中LDH含量隨著給藥劑量的升高而增加(P0.05,P0.01,P0.001),且表現(xiàn)出劑量依賴性；用Western blot及IF的方法檢測上述細胞勻漿發(fā)現(xiàn)：細胞中MPP5蛋白表達情況隨著藥物劑量的提高而降低；IKBa蛋白表達下調(diào)；NF-κB、COX-2蛋白表達上調(diào)。結(jié)論：1.腎損傷時,血清K+濃度和尿量發(fā)生波動性改變,游離態(tài)MPP5可能通過影響鉀離子分泌發(fā)揮調(diào)控機體K+含量的重要作用。隨著腎損傷程度加重,游離態(tài)MPP5表達總體趨勢逐漸降低,炎癥反應(yīng)加強,可能是合成MPP5復合蛋白增加促進炎癥反應(yīng)發(fā)生。2.GM、CsA、DDP能夠引起HK-2細胞損傷并釋放炎癥因子,細胞損傷時游離的MPP5蛋白含量下降。隨著細胞損傷程度加重,游離態(tài)MPP5與NF-κB變化趨勢相反,結(jié)合整體實驗結(jié)果可以推測MPP5與NF-κB之間可能存在相互作用關(guān)系。
【關(guān)鍵詞】：腎損傷 K~+ MPP5 NF-κB
【學位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R692
【目錄】：

• 摘要7-10
• Abstract10-13
• 前言13-16
• 第一章 急性腎損傷進程中鉀離子變化及NF-κB相關(guān)炎癥反應(yīng)的研究16-35
• 1. 實驗材料17-19
• 2. 實驗方法19-23
• 3. 實驗結(jié)果23-32
• 4. 討論32-34
• 5. 本章小結(jié)34-35
• 第二章 慢性腎損傷進程中鉀離子變化及NF-κB相關(guān)炎癥反應(yīng)的研究35-50
• 1. 實驗材料35-37
• 2. 實驗方法37-39
• 3. 實驗結(jié)果39-48
• 4. 討論48-49
• 5. 本章小結(jié)49-50
• 第三章 藥物誘導HK-2細胞損傷MPP5與NF-κB變化相關(guān)性的研究50-67
• 1. 實驗材料50-52
• 2. 實驗方法52-55
• 3. 實驗結(jié)果55-65
• 4. 討論65-66
• 5. 本章小結(jié)66-67
• 全文小結(jié)67-68
• 綜述 與腎損傷相關(guān)的信號通路研究進展68-72
• 參考文獻72-77
• 前言72-74
• 第一章74
• 第二章74
• 第三章74-75
• 綜述75-77
• 附錄 英文縮略詞對照表77-78
• 攻讀碩士學位期間取得的學術(shù)成果78-79
• 致謝79

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 易鐵男,周云峰,伍鋼;Caspase家族與細胞凋亡的研究進展[J];國外醫(yī)學(腫瘤學分冊);2001年01期

2 戴昕;李占全;冀林華;;凋亡相關(guān)蛋白Caspase研究進展[J];中國現(xiàn)代醫(yī)藥雜志;2010年04期

  本文關(guān)鍵詞：腎損傷時MPP5與鉀離子波動及炎癥因子的相關(guān)變化分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：292367