目的觀察轉化生長因子β1（TGF-β1）對CCAAT增強子結合蛋白α（C/EBPα）、過氧化物酶增殖物激活受體γ（PPARγ）核轉錄因子表達的影響,探討C/EBPα在TGF-β1致腎間質纖維化過程中的表達及其機制。方法體外培養(yǎng)人腎小管上皮細胞（HK-2）,利用TGF-β1分別在不同質量濃度（5和10 ng/m L）和不同時間點（0、4、12、24 h）刺激HK-2細胞,收集細胞總RNA和蛋白（核蛋白和總蛋白）以及細胞上清液。應用realtime PCR法和Western blotting檢測C/EBPα和核轉錄因子PPARγ以及上皮細胞-間充質轉化（EMT）相關蛋白α-SMA、E-cadherin的表達變化;ELISA方法檢測細胞上清液中單核細胞趨化蛋白1（MCP-1）的表達水平。結果 TGF-β1（5 ng/m L）刺激HK-2細胞24 h后C/EBPα蛋白與PPARγ變化一致,差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）;E-cadherin表達減少。TGF-β1（10 ng/m L）分別刺激0、4、12、24 h后,核蛋白中C/EBPα在12 h時表達明顯降低,PPARγ在4 h表達... 

【文章來源】：上海交通大學學報(醫(yī)學版). 2015年09期 北大核心

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TGF-β1(5ng/mL)刺激對HK-2總蛋白中E-cadherin、C/EBPα、α-SMA表達的影響

TGF-β1(10ng/mL)刺激對C/EBPα、PPAＲγ及E-cadherin

JOUＲNALOFSHANGHAIJIAOTONGUNIVEＲSITYMEDICALSCIENCE|Vol．35No．9Sep．2015杜云蕾，等．轉化生長因子β1對腎小管上皮細胞C/EBPα及相關核轉錄因子表達的影響24h后，ELISA法檢測上清中MCP-1蛋白表達水平。結果顯示:MCP-1在12、24h時分別升高6倍和10.67倍;4h與0h的表達量比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)(圖4)。注:①P＜0.05與0h比較。圖3TGF-β1(10ng/mL)對核蛋白C/EBPα、PPAＲγ表達的影響Fig3EffectofstimulationbyTGF-β1(10ng/mL)onexpressionsofnucleoproteinsC/EBPαandPPAＲγ注:①P＜0.05，②P＜0.01與0h比較。圖4TGF-β1(10ng/mL)誘導后HK-2細胞培養(yǎng)上清液中的MCP-1蛋白表達Fig4ProteinexpressionofMCP-1insupernatantafterHK-2cellsbeinginducedbyTGF-β1(10ng/mL)3討論慢性腎臟病(chronickidneydisease，CKD)進展為終末期腎臟病，主要是由于腎臟皮質結構的破壞即纖維化導致。間質的病變即纖維化又在腎臟纖維化過程中起著重要的作用［3］，其病變程度是預示CKD病情的重要指標［4］。間質纖維化的發(fā)生是一系列細胞和細胞因子共同參與的反應。其過程包括腎小管上皮細胞壞死、凋亡、功能的喪失、上皮細胞－間充質轉化(epithelial-mesenchymaltransition，EMT)，以及間質大量炎癥細胞的浸潤及炎癥反應的參與［3］。C/EBPs是一類鋅指結構蛋白，都含有堿性亮氨酸拉鏈區(qū)［5］。首次以轉錄因子被發(fā)現(xiàn)，C/EBPα轉錄翻譯為p42和p30兩種蛋白質，根據(jù)在組織中的需要兩種蛋白分別發(fā)揮作用［6］。在肝臟、肺臟尤其是脂肪組織中高表達［6］，在肝臟和肺臟腫瘤中可以通過抑制增殖促進分化，抑制腫瘤的進展［7］。C/EBPα在EMT中的作用機制，即對轉分化的作用，研究較少。其在脂肪組織中


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