本文關(guān)鍵詞：遷移侵襲抑制蛋白在腎癌中的表達(dá)及對(duì)腎癌細(xì)胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景:腎細(xì)胞癌(renal cell carcinoma,RCC)是腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞發(fā)生的惡性腫瘤病變,其病理類型多樣,除80%-90%的透明細(xì)胞癌外還有腺癌、嫌色細(xì)胞癌等類型。近年調(diào)查顯示,國(guó)內(nèi)腎癌發(fā)病率約占全身惡性腫瘤2%-3%,在泌尿系統(tǒng)中的比率僅次于位居榜首的膀胱癌。相當(dāng)數(shù)量以“血尿、疼痛、腫塊”三聯(lián)癥就診的患者已經(jīng)處于中晚期。腎癌因病理類型的特殊性使其對(duì)放化療敏感性差,目前臨床常規(guī)以外科手術(shù)作為主要治療方法,靶向藥物輔助治療,但對(duì)于術(shù)后腫瘤的復(fù)發(fā)、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移等進(jìn)展事件無(wú)有效預(yù)防辦法,對(duì)于部分喪失手術(shù)機(jī)會(huì)的T3期病變以及T4期病變尚無(wú)有效治療手段。近年發(fā)現(xiàn)的遷移侵襲抑制蛋白(migration and invasion inhibitory protein,MIIP,亦稱IIP45)具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的能力。當(dāng)其位于染色體1p36.22的編碼基因發(fā)生等位基因缺失或基因單倍劑量不足時(shí),可誘發(fā)全身多系統(tǒng)惡性腫瘤,如前列腺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、結(jié)腸癌、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌等。并且國(guó)外研究表明該基因是腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為相關(guān)信號(hào)通路的上游調(diào)控基因,增加MIIP表達(dá)可有效抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲轉(zhuǎn)移。但到目前為止尚無(wú)腎癌的相關(guān)報(bào)道。目的:1.明確腎細(xì)胞癌組織及癌旁正常腎組織中miip蛋白的表達(dá)水平,并分析其表達(dá)水平與腎細(xì)胞癌的發(fā)生及臨床分期之間的關(guān)系。2.利用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)制備過(guò)表達(dá)miip蛋白的腎癌786-0/miip細(xì)胞系,通過(guò)上調(diào)腎癌786-0細(xì)胞中miip表達(dá)量觀察其對(duì)細(xì)胞增殖、侵襲、遷移能力的影響。方法:1.不同病理組織中miip蛋白表達(dá)水平檢測(cè)采用免疫組織化學(xué)染色(sp)法對(duì)84對(duì)腎細(xì)胞癌患者手術(shù)標(biāo)本(配對(duì)腎癌組織組、癌旁正常腎組織組)進(jìn)行染色,在顯微鏡下觀察組織切片染色情況,運(yùn)用半定量法分析腎細(xì)胞癌組織及癌旁正常腎組織中miip蛋白的表達(dá)情況,并通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析miip表達(dá)水平與腎癌的發(fā)生及臨床分期的關(guān)系。同時(shí)提取患者腎癌組織及癌旁正常腎組織蛋白,通過(guò)western-blot檢測(cè)腎細(xì)胞癌組織與癌旁正常腎組織中miip蛋白表達(dá)水平,并進(jìn)行表達(dá)差異性分析。2.miip對(duì)腎癌細(xì)胞增殖、侵襲遷移能力的影響研究構(gòu)建攜帶miip基因的p-flag-cmv4質(zhì)粒,通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)轉(zhuǎn)染腎癌786-0細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)組786-0/miip細(xì)胞系,p-flag-cmv4空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染786-0細(xì)胞制備對(duì)照組786-0/cmv4細(xì)胞系,未做轉(zhuǎn)染處理的786-0細(xì)胞系作為空白組。western-blot、real-timepcr技術(shù)檢測(cè)三組細(xì)胞miip蛋白和信使rna(messengerrna,mrna)的表達(dá)情況。通過(guò)細(xì)胞周期測(cè)定(流式細(xì)胞術(shù))、mtt實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖能力,transwell實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞的侵襲遷移能力。結(jié)果:1.不同病理組織中miip蛋白表達(dá)水平檢測(cè)運(yùn)用sp法檢測(cè)發(fā)現(xiàn):腎細(xì)胞癌組織miip蛋白染色陽(yáng)性比率為30.95%,癌旁正常腎組織miip蛋白染色陽(yáng)性比率為85.71%(p0.05),其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。腎細(xì)胞癌不同臨床分期中MIIP蛋白染色陽(yáng)性比率分別為Ⅰ期54.55%,Ⅱ期40.54%和Ⅲ期13.89%;根據(jù)統(tǒng)計(jì)分析:Ⅰ期和Ⅱ期比較P0.25,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;Ⅰ期與Ⅲ期比較,P0.00625,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;Ⅱ期與Ⅲ期比較,P0.0125,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Western-blot檢測(cè)結(jié)果分析:腎細(xì)胞癌組織中MIIP條帶灰度值較癌旁正常腎組織的灰度值低,經(jīng)t檢驗(yàn),P0.01。這與免疫組織SP法結(jié)果相符合。2.MIIP對(duì)腎癌細(xì)胞增殖、侵襲遷移能力的影響研究通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)轉(zhuǎn)染MIIP基因入786-0細(xì)胞后,利用Western-blot檢測(cè)結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組786-0/MIIP細(xì)胞的MIIP蛋白表達(dá)量比對(duì)照組786-0/CMV4及空白組786-0增高。Real-time PCR檢測(cè)結(jié)果顯示:實(shí)驗(yàn)組MIIP mRNA相對(duì)表達(dá)量比對(duì)照組及空白組增高。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期顯示:實(shí)驗(yàn)組786-0/MIIP細(xì)胞系增殖指數(shù)PI:53.69,小于空白組786-0細(xì)胞系(PI:56.33)(P0.05),說(shuō)明上調(diào)MIIP表達(dá)后細(xì)胞周期受到阻滯。MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:上調(diào)MIIP表達(dá)后細(xì)胞增殖能力減弱(P0.01)。Transwell實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)組786-0/MIIP細(xì)胞穿透小室數(shù)為(15.23±3.21),少于對(duì)照組(39.03±7.49)及空白組(40.17±4.24)(P0.01),說(shuō)明上調(diào)MIIP表達(dá)后786-0細(xì)胞侵襲能力減弱。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示上調(diào)MIIP表達(dá)后786-0細(xì)胞遷移能力弱于對(duì)照組及空白組(P0.01)。結(jié)論:MIIP蛋白在腎細(xì)胞癌組織及癌旁正常腎組織中均表達(dá),前者比后者表達(dá)量降低。在腎細(xì)胞癌組織中MIIP的表達(dá)水平與腫瘤臨床分期密切相關(guān),Ⅲ期較Ⅰ期、Ⅱ期明顯減少。通過(guò)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)能夠制備過(guò)表達(dá)MIIP的腎癌細(xì)胞系。轉(zhuǎn)染成功的腎癌786-0/MIIP細(xì)胞系MIIP表達(dá)量增加,有效抑制了腎癌細(xì)胞的增殖、侵襲與遷移。
【關(guān)鍵詞】：MIIP 腎細(xì)胞癌 免疫組織化學(xué) 增殖 侵襲 遷移
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.11
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表4-7
• 中文摘要7-10
• ABSTRACT10-14
• 前言14-16
• 文獻(xiàn)回顧16-28
• 實(shí)驗(yàn)一 MIIP在腎細(xì)胞癌及癌旁正常腎組織中的表達(dá)28-38
• 1 材料與試劑28-30
• 2 實(shí)驗(yàn)方法30-31
• 3 結(jié)果31-35
• 4 討論35-38
• 實(shí)驗(yàn)二 MIIP對(duì)腎癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的研究38-50
• 1 材料與試劑38-39
• 2 實(shí)驗(yàn)方法39-42
• 3 結(jié)果42-47
• 4 討論47-50
• 小結(jié)50-51
• 參考文獻(xiàn)51-62
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果62-63
• 致謝63

  本文關(guān)鍵詞：遷移侵襲抑制蛋白在腎癌中的表達(dá)及對(duì)腎癌細(xì)胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：286524