目的:研究ESPL1在前列腺癌中的表達情況,并分析其表達情況與臨床病理特征的關系,探討其作為前列腺癌的一種輔助腫瘤標記物的可能性。方法:通過下載Taylor數(shù)據(jù)庫基因芯片數(shù)據(jù)篩選出與腫瘤預后密切相關的基因ESPL1。采用RT-PCR、Western-Blot分別檢測ESPL1的mRNA水平和蛋白水平在5種前列腺細胞株(RWPE1、BPH、Lncap、PC3、DU145)中的表達,并在人前列腺組織芯片(50例前列腺組織,30例良性前列腺組織)進行免疫組織化學染色并對ESPL1基因蛋白的表達強度定量進行免疫組化評分。通過統(tǒng)計分析Taylor數(shù)據(jù)庫和TCGA數(shù)據(jù)庫中前列腺癌患者的臨床特征及其預后與ESPL1表達水平的關系,采用Cox回歸模型統(tǒng)計Taylor數(shù)據(jù)庫中前列腺癌患者ESPL1mRNA表達與無生化復發(fā)生存時間的關系,采用單因素及多因素方差分析兩者間的關系。利用慢病毒載體技術構建了ESPL1敲減的DU145細胞株(DU145-sh-ESPL1)及陰性對照細胞株(DU145-NC-ESPL1),并采用Western Blot等檢測其轉染效率,最后我們通過構建的細胞株進行細胞周期與增殖實驗,檢測ESPL1對前列腺癌細胞株細胞周期和增殖的影響。結果:在Taylor數(shù)據(jù)庫基因芯片數(shù)據(jù)中統(tǒng)計分析ESPL1的核酸水平在前列腺癌組織(n=150)與非癌組織(n=29)的表達,結果顯示ESPL1在前列腺癌組織中的表達增高(PCa=6.78±1.86 vs Benign=6.69±1.89,p0.001),差異具有統(tǒng)計學意義。在前列腺癌細胞株中,我們同樣發(fā)現(xiàn)ESPL1 mRNA水平和蛋白水平的表達高于良性前列腺細胞株中的表達。前列腺組織芯片免疫組化結果顯示:ESPL1在前列腺癌組織中呈高表達,而在良性前列腺組織中呈低等或中等表達(PCa=4.00±1.26 vs Benign=2.47±1.28,p0.001),差異具有統(tǒng)計學意義。在Taylor數(shù)據(jù)庫和TCGA數(shù)據(jù)庫中,我們發(fā)現(xiàn)ESPL1在前列腺癌的表達水平明顯高于良性前列腺組織,且ESPL1的表達水平與前列腺癌的無生化復發(fā)生存率(p0.001),高Gleason評分(p0.001)、晚期病理分期(p0.001)及腫瘤無轉移的(p0.001)顯著相關。細胞周期實驗結果顯示:與對照組相比,敲減ESPL1后DU145細胞S+G2期明顯降低。細胞增殖實驗結果顯示:與對照組相比,ESPL1敲減表達的細胞株中細胞的增殖能力顯著減弱。結論:ESPL1在前列腺癌中的表達水平升高且與前列腺癌患者的臨床特征及其預后顯著相關,可能通過細胞周期參與細胞增殖促進前列腺癌的進展,具有作為促癌基因成為前列腺癌輔助標志物的潛力。
【學位單位】：遵義醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R737.25
【部分圖文】：

. Taylor 數(shù)據(jù)庫中 ESPL1 在癌與非癌組織中核酸水平的表達情況sion of nucleic acid levels in ESPL1 between cancer and non-cancein Taylor databasen x±s 150 6.78±1.86 <0 29 6.69±1.891 在前列腺癌細胞株中核酸水平和蛋白水平表達胞株中 ESPL1 的 RT-PCR 檢測結果 RT-PCR 實驗檢測 ESPL1 在前列腺癌細胞株（Lncap、PC細胞株（RWPE-1、BPH）中核酸水平的表達，結果發(fā)現(xiàn)株（PC3、DU145）中的表達高于良性前列腺細胞株（具有統(tǒng)計學意義（見圖 1）。

遵義醫(yī)科大學碩士學位論文 蘇嘉明2.2.2 前列腺細胞株中 ESPL1 的 Western Blot 檢測結果進一步我們通過 Western Blot 實驗檢測 ESPL1 在前列腺癌細胞株（Lncap、PC3、DU145）和良性前列腺細胞株（RWPE-1、BPH）中蛋白水平的表達，結果顯示 ESPL1 在前列腺癌細胞株（PC3、DU145）中的表達高于良性前列腺細胞株（RWPE-1、BPH）（見圖 2）。

圖 3 ESPL1蛋白在癌組織與非癌組織中的表達情況。 A為組織芯片（TMA）全景縮略圖；B為ESPL1在癌與非癌組織中免疫組化評分統(tǒng)計圖；C為 ESPL1在Gleason score分組（GS＜8 VS GS≥8）中免疫組化評分統(tǒng)計圖；D為ESPL1在良性前列腺組織中的染色情況；E和F均為ESPL1在前列腺癌組織中的染色情況（E圖為GS＜8，F(xiàn)圖為GS≥8）。Fig.3 Expression of ESPL1 protein in cancer tissues and non-cancerous tissues. A is apanoramic thumbnail of tissue microarray (TMA); B is a statistical chart of ESPL1immunohistochemistry scores in cancerous and non-cancerous tissues; C is ESPL1immunohistochemistry in the Gleason score group (GS<8 VS GS≥8) Score chart; D is thestaining of ESPL1 in benign prostate tissue; Both E and F are the staining of ESPL1 inprostate cancer tissue（E is GS＜8，F(xiàn) is GS≥8）.2.4 ESPL1 的 mRNA 表達量與 PCA 臨床病理特征及預后的關系2.4.1 ESPL1 的核酸水平在前列腺癌組織的表達情況與臨床病理特征的關系

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相關碩士學位論文 前1條

1 蘇嘉明;ESPL1在前列腺癌中的表達及其預后價值[D];遵義醫(yī)科大學;2019年

本文編號：2819553