目的:研究ESPL1在前列腺癌中的表達(dá)情況,并分析其表達(dá)情況與臨床病理特征的關(guān)系,探討其作為前列腺癌的一種輔助腫瘤標(biāo)記物的可能性。方法:通過下載Taylor數(shù)據(jù)庫基因芯片數(shù)據(jù)篩選出與腫瘤預(yù)后密切相關(guān)的基因ESPL1。采用RT-PCR、Western-Blot分別檢測ESPL1的mRNA水平和蛋白水平在5種前列腺細(xì)胞株(RWPE1、BPH、Lncap、PC3、DU145)中的表達(dá),并在人前列腺組織芯片(50例前列腺組織,30例良性前列腺組織)進行免疫組織化學(xué)染色并對ESPL1基因蛋白的表達(dá)強度定量進行免疫組化評分。通過統(tǒng)計分析Taylor數(shù)據(jù)庫和TCGA數(shù)據(jù)庫中前列腺癌患者的臨床特征及其預(yù)后與ESPL1表達(dá)水平的關(guān)系,采用Cox回歸模型統(tǒng)計Taylor數(shù)據(jù)庫中前列腺癌患者ESPL1mRNA表達(dá)與無生化復(fù)發(fā)生存時間的關(guān)系,采用單因素及多因素方差分析兩者間的關(guān)系。利用慢病毒載體技術(shù)構(gòu)建了ESPL1敲減的DU145細(xì)胞株(DU145-sh-ESPL1)及陰性對照細(xì)胞株(DU145-NC-ESPL1),并采用Western Blot等檢測其轉(zhuǎn)染效率,最后我們通過構(gòu)建的細(xì)胞株進行細(xì)胞周期與增殖實驗,檢測ESPL1對前列腺癌細(xì)胞株細(xì)胞周期和增殖的影響。結(jié)果:在Taylor數(shù)據(jù)庫基因芯片數(shù)據(jù)中統(tǒng)計分析ESPL1的核酸水平在前列腺癌組織(n=150)與非癌組織(n=29)的表達(dá),結(jié)果顯示ESPL1在前列腺癌組織中的表達(dá)增高(PCa=6.78±1.86 vs Benign=6.69±1.89,p0.001),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。在前列腺癌細(xì)胞株中,我們同樣發(fā)現(xiàn)ESPL1 mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)高于良性前列腺細(xì)胞株中的表達(dá)。前列腺組織芯片免疫組化結(jié)果顯示:ESPL1在前列腺癌組織中呈高表達(dá),而在良性前列腺組織中呈低等或中等表達(dá)(PCa=4.00±1.26 vs Benign=2.47±1.28,p0.001),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。在Taylor數(shù)據(jù)庫和TCGA數(shù)據(jù)庫中,我們發(fā)現(xiàn)ESPL1在前列腺癌的表達(dá)水平明顯高于良性前列腺組織,且ESPL1的表達(dá)水平與前列腺癌的無生化復(fù)發(fā)生存率(p0.001),高Gleason評分(p0.001)、晚期病理分期(p0.001)及腫瘤無轉(zhuǎn)移的(p0.001)顯著相關(guān)。細(xì)胞周期實驗結(jié)果顯示:與對照組相比,敲減ESPL1后DU145細(xì)胞S+G2期明顯降低。細(xì)胞增殖實驗結(jié)果顯示:與對照組相比,ESPL1敲減表達(dá)的細(xì)胞株中細(xì)胞的增殖能力顯著減弱。結(jié)論:ESPL1在前列腺癌中的表達(dá)水平升高且與前列腺癌患者的臨床特征及其預(yù)后顯著相關(guān),可能通過細(xì)胞周期參與細(xì)胞增殖促進前列腺癌的進展,具有作為促癌基因成為前列腺癌輔助標(biāo)志物的潛力。
【學(xué)位單位】：遵義醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R737.25
【部分圖文】：

. Taylor 數(shù)據(jù)庫中 ESPL1 在癌與非癌組織中核酸水平的表達(dá)情況sion of nucleic acid levels in ESPL1 between cancer and non-cancein Taylor databasen x±s 150 6.78±1.86 <0 29 6.69±1.891 在前列腺癌細(xì)胞株中核酸水平和蛋白水平表達(dá)胞株中 ESPL1 的 RT-PCR 檢測結(jié)果 RT-PCR 實驗檢測 ESPL1 在前列腺癌細(xì)胞株（Lncap、PC細(xì)胞株（RWPE-1、BPH）中核酸水平的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)株（PC3、DU145）中的表達(dá)高于良性前列腺細(xì)胞株（具有統(tǒng)計學(xué)意義（見圖 1）。

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 蘇嘉明2.2.2 前列腺細(xì)胞株中 ESPL1 的 Western Blot 檢測結(jié)果進一步我們通過 Western Blot 實驗檢測 ESPL1 在前列腺癌細(xì)胞株（Lncap、PC3、DU145）和良性前列腺細(xì)胞株（RWPE-1、BPH）中蛋白水平的表達(dá)，結(jié)果顯示 ESPL1 在前列腺癌細(xì)胞株（PC3、DU145）中的表達(dá)高于良性前列腺細(xì)胞株（RWPE-1、BPH）（見圖 2）。

圖 3 ESPL1蛋白在癌組織與非癌組織中的表達(dá)情況。 A為組織芯片（TMA）全景縮略圖；B為ESPL1在癌與非癌組織中免疫組化評分統(tǒng)計圖；C為 ESPL1在Gleason score分組（GS＜8 VS GS≥8）中免疫組化評分統(tǒng)計圖；D為ESPL1在良性前列腺組織中的染色情況；E和F均為ESPL1在前列腺癌組織中的染色情況（E圖為GS＜8，F(xiàn)圖為GS≥8）。Fig.3 Expression of ESPL1 protein in cancer tissues and non-cancerous tissues. A is apanoramic thumbnail of tissue microarray (TMA); B is a statistical chart of ESPL1immunohistochemistry scores in cancerous and non-cancerous tissues; C is ESPL1immunohistochemistry in the Gleason score group (GS<8 VS GS≥8) Score chart; D is thestaining of ESPL1 in benign prostate tissue; Both E and F are the staining of ESPL1 inprostate cancer tissue（E is GS＜8，F(xiàn) is GS≥8）.2.4 ESPL1 的 mRNA 表達(dá)量與 PCA 臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系2.4.1 ESPL1 的核酸水平在前列腺癌組織的表達(dá)情況與臨床病理特征的關(guān)系

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相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 蘇嘉明;ESPL1在前列腺癌中的表達(dá)及其預(yù)后價值[D];遵義醫(yī)科大學(xué);2019年

本文編號：2819553