【摘要】：近年來,受環(huán)境污染、生活壓力等因素影響,不孕不育的發(fā)病率與日俱增。弱精子癥、無精子癥、畸形精子癥等成為困擾男性生育健康的重要疾病。其中弱精子癥是男性不育最常見的病因,由多種因素導(dǎo)致,包括器質(zhì)性疾病,如泌尿系統(tǒng)感染、隱睪、精索靜脈曲張,也包括不良的生活習(xí)慣,如熬夜、吸煙、酗酒、刺激飲食等因素。弱精子癥是由多種遺傳因素和環(huán)境因素引起的一種復(fù)雜的疾病,其根本原因不明確。目前已經(jīng)確定了一些特定的基因突變與弱精子癥相關(guān),但其他導(dǎo)致男性精子活力缺陷的因素仍然需要探索與研究。弱精子癥(asthenozoospermia AZS)即精子活力異常,前向運動能力減弱。按照2010年世界衛(wèi)生組織(World Health Organization,WHO)提供的精液分析參數(shù)標(biāo)準(zhǔn),正�；盍Φ木杭淳訚舛取�15×10~6ml~(-1),精子前向運動比率(Progressive Motility,PR)≥32%;弱精子癥即精子濃度≥15×10~6ml~(-1),精子前向運動比率(PR)32%。臨床上將病因和發(fā)病機制尚不清楚的弱精子癥稱為特發(fā)性弱精子癥。精子活力的來源主要依賴于精子尾部鞭毛的擺動,其原理是鞭毛內(nèi)部軸絲中的雙聯(lián)微管在ATP的作用下,不斷地發(fā)生分離、結(jié)合,使雙聯(lián)微管之間產(chǎn)生滑動;同時雙聯(lián)微管周圍的各種附屬結(jié)構(gòu)形成滑動阻力,把支臂產(chǎn)生的縱向作用力轉(zhuǎn)化成橫向彎曲動力,使鞭毛形成浪狀波擺動,促使精子向前移動,從而穿透宮頸粘液到達(dá)受精部位,再穿過透明帶,進(jìn)入卵細(xì)胞,完成整個受精過程。由于精子的高度復(fù)雜性,任何外部因素或內(nèi)部因素的改變都可能導(dǎo)致鞭毛結(jié)構(gòu)和能量代謝的異常,使精子運動受到影響,導(dǎo)致男性生育缺陷。目前,關(guān)于男性特發(fā)性弱精子癥相關(guān)基因和蛋白的研究較為廣泛,為了進(jìn)一步了解男性特發(fā)性弱精子癥的發(fā)病機制和途徑,本實驗利用RT-PCR和Western Blot這兩種實驗方法對特發(fā)性弱精子癥患者和正常成年男性精子中SLC22A14和SPAG6mRNA和蛋白的表達(dá)進(jìn)行檢測,探尋精子中SLC22A14和SPAG6的表達(dá)情況,從而為男性生殖健康的診療提供幫助。材料與方法1研究對象收集2016年9月-11月期間鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院生殖男科門診特發(fā)性弱精子癥患者(年齡22~37歲)精液標(biāo)本50例為特發(fā)性弱精子癥組,以及同期河南省人類精子庫的健康供精志愿者(年齡20~39歲)的合格精液樣本50例為正常對照組。標(biāo)本提供者需滿足無各種傳染病,身體狀態(tài)良好,排除生殖道感染、生殖激素異常、精索靜脈曲張、免疫因素等。受試者禁欲時間2~7 d,采用手淫法收集精液至干燥廣口無菌杯中,放置37℃水浴箱孵育,30-60 min內(nèi)完全液化。正常對照組精子濃度≥50×10~6/ml,精子前向運動百分率≥32%,特發(fā)性弱精子癥組精子濃度≥50×10~6/ml,精子前向運動百分率32%。2實驗方法2.1 RT-PCRRT-PCR分別檢測SLC22A14mRNA、SPAG6mRNA在正常對照組和特發(fā)性弱精子癥組精子中的表達(dá)。2.2 Western BlotWestern Blot分別檢測SLC22A14蛋白、SPAG6蛋白在正常對照組和特發(fā)性弱精子癥組精子中的表達(dá)。3統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS 21.0版本進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,以?x±s表示實驗結(jié)果中計量的資料數(shù)據(jù),采用兩獨立樣本t檢驗比較兩組標(biāo)本之間SLC22A14、SPAG6mRNA和蛋白表達(dá)差異,以Pearson相關(guān)系數(shù)(r)來表示SLC22A14、SPAG6與精子前向運動能力之間的相關(guān)性,以α=0.05為檢驗水準(zhǔn)。結(jié)果1正常對照組和特發(fā)性弱精子癥組中SLC22A14mRNA的表達(dá)情況SLC22A14mRNA在正常對照組和特發(fā)性弱精子癥組精子中的相對表達(dá)量分別是0.77±0.08和0.53±0.10,結(jié)果顯示特發(fā)性弱精子癥組SLC22A14mRNA表達(dá)量低于正常對照組(t=12.834,P0.01)。2正常對照組和特發(fā)性弱精子癥組中SLC22A14蛋白的表達(dá)情況SLC22A14蛋白在正常對照組和特發(fā)性弱精子癥組精子中的相對表達(dá)量分別為0.80±0.09和0.55±0.10,結(jié)果顯示特發(fā)性弱精子癥組精子中SLC22A14蛋白表達(dá)量低于正常對照組(t=12.884,P0.01)。3正常對照組和特發(fā)性弱精子癥組中SPAG6mRNA的表達(dá)情況SPAG6mRNA在正常對照組和特發(fā)性弱精子癥組精子中的相對表達(dá)量分別為0.77±0.06和0.52±0.10,結(jié)果顯示特發(fā)性弱精子癥組精子中SPAG6mRNA的相對表達(dá)量低于正常對照組(t=13.755,P0.01)。4正常對照組和特發(fā)性弱精子癥組中SPAG6蛋白的表達(dá)情況SPAG6蛋白在正常對照組和特發(fā)性弱精子癥組精子中的相對表達(dá)量分別為0.78±0.09和0.56±0.09,結(jié)果顯示特發(fā)性弱精子癥組精子中SPAG6蛋白的相對表達(dá)量低于正常對照組(t=12.257,P0.01)5 SLC22A14、SPAG6在精子中表達(dá)水平與精子前向運動的相關(guān)性分析SLC22A14 mRNA和蛋白表達(dá)水平與精子前向運動能力具有正相關(guān)性(r=0.761,P0.05;r=0.748,P0.05),SPAG6 mRNA和蛋白表達(dá)水平與精子前向運動能力也具有正相關(guān)性(r=0.806,P0.05;r=0.766,P0.05)。結(jié)論SLC22A14、SPAG6與男性精子的運動能力相關(guān),可能參與了男性特發(fā)性弱精子癥的發(fā)生。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R698.2
【圖文】：

男性精子中SLC22A14mRNA的檢測

男性精子中SLC22A14蛋白的WesternBlot檢測

男性精子中SPAG6mRNA的檢測

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

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本文編號：2796831