【摘要】：目的探討hnRNPM(核內(nèi)不均一核糖核蛋白M)異常表達(dá)在前列腺癌進(jìn)展過程中對(duì)EMT(上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化)的影響,并初步探討其調(diào)節(jié)的分子機(jī)制。方法在Oncomine數(shù)據(jù)庫中預(yù)測hnRNPM在正常前列腺組織和前列腺癌組織中的表達(dá)差異,利用RT-qPCR和Western blot檢測hnRNPM在臨床樣本(前列腺癌與前列腺增生;前列腺癌與癌旁)以及LNCaP、C4-2、PC-3、DU145和H660細(xì)胞系間的表達(dá)差異,利用免疫組化檢測hnRNPM在前列腺增生、前列腺腺癌及神經(jīng)內(nèi)分泌型前列腺癌中的表達(dá)差異;分別利用siRNA或shRNA及過表達(dá)質(zhì)粒或過表達(dá)慢病毒在前列腺癌細(xì)胞系中敲低或過表達(dá)hnRNPM觀察細(xì)胞形態(tài)的改變并利用劃痕實(shí)驗(yàn)和transwell實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞侵襲性的變化并檢測EMT相關(guān)標(biāo)志物和上游轉(zhuǎn)錄因子的變化;利用PROMO和GeneCards數(shù)據(jù)庫預(yù)測hnRNPM上游轉(zhuǎn)錄因子,并利用GeneCards、PROMO、LASAGNA和JASPAR數(shù)據(jù)庫預(yù)測轉(zhuǎn)錄因子在hnRNPM啟動(dòng)子區(qū)域的結(jié)合位點(diǎn);利用Oncomine數(shù)據(jù)庫中預(yù)測YY1(Yin Yang 1)在正常前列腺組織和前列腺癌組織中的表達(dá)差異,利用TCGA數(shù)據(jù)庫預(yù)測YY1與hnRNPM之間的相關(guān)性,利用免疫組化檢測YY1在前列腺增生、前列腺腺癌及神經(jīng)內(nèi)分泌型前列腺癌中的表達(dá)差異;分別利用siRNA和過表達(dá)質(zhì)粒在C4-2或PC-3細(xì)胞系中敲低或過表YY1,同時(shí)利用Western blot檢測hnRNPM的表達(dá)變化;在C4-2細(xì)胞系中單獨(dú)過表達(dá)YY1,過表達(dá)YY1的同時(shí)過表達(dá)hnRNPM,利用transwell實(shí)驗(yàn)分別觀察細(xì)胞侵襲能力的變化,同時(shí)檢測N-cadherin、Vimentin、Twist1的蛋白水平變化;針對(duì)數(shù)據(jù)庫預(yù)測的YY1在hnRNPM啟動(dòng)子區(qū)域的兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn),利用ChIP實(shí)驗(yàn)和雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)探索YY1通過結(jié)合hnRNPM啟動(dòng)子區(qū)域上的哪個(gè)位點(diǎn)發(fā)揮作用;分別在PC-3和DU145細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染hnRNPM過表達(dá)慢病毒,利用嘌呤霉素篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系后,在此基礎(chǔ)上轉(zhuǎn)染含luciferase質(zhì)粒的空載慢病毒,分別將篩選后的細(xì)胞接種至裸鼠腋下,待成瘤后將腫瘤取下,切成1mm~3左右瘤塊原位種植于裸鼠前列腺部位,4-6周后利用小動(dòng)物活體成像系統(tǒng)觀察前列腺癌的轉(zhuǎn)移情況。結(jié)果Oncomine數(shù)據(jù)庫顯示,hnRNPM在前列腺癌組織中的表達(dá)水平較正常組織低,與我們在臨床標(biāo)本中的檢測結(jié)果一致。HnRNPM在前列腺癌組織中的表達(dá)水平較配對(duì)的癌旁組織低。HnRNPM在LNCaP、C4-2、PC-3、DU145和H660細(xì)胞系中的表達(dá)水平逐漸降低。免疫組化結(jié)果表明hnRNPM在前列腺增生、前列腺腺癌及神經(jīng)內(nèi)分泌型前列腺癌中的表達(dá)水平逐漸降低。在C4-2中敲低hnRNPM發(fā)現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)(篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株后)變瘦長,細(xì)胞的遷移和侵襲能力增強(qiáng),與EMT增強(qiáng)相關(guān)的標(biāo)志物表達(dá)增加,EMT上游轉(zhuǎn)錄因子Twist1表達(dá)增加。在PC-3中過表達(dá)hnRNPM發(fā)現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)(篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株后)變寬大,細(xì)胞的遷移和侵襲能力減弱,與EMT增強(qiáng)相關(guān)的標(biāo)志物表達(dá)減少,EMT上游轉(zhuǎn)錄因子Twist1表達(dá)減少。通過數(shù)據(jù)庫預(yù)測YY1可能為hnRNPM的上游轉(zhuǎn)錄因子,并且Oncomine數(shù)據(jù)庫顯示YY1在前列腺癌組織中的表達(dá)比正常前列腺組織中高。TCGA數(shù)據(jù)庫顯示,YY1與hnRNPM的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。免疫組化結(jié)果表明YY1在前列腺增生、前列腺腺癌和神經(jīng)內(nèi)分泌型前列腺癌中的表達(dá)水平逐漸升高。在C4-2中敲低YY1,hnRNPM表達(dá)升高。在PC-3中過表達(dá)YY1,hnRNPM表達(dá)降低。在C4-2中過表達(dá)YY1,細(xì)胞侵襲能力增強(qiáng),N-cadherin、Vimentin、Twist1表達(dá)升高,過表達(dá)YY1的同時(shí)過表達(dá)hnRNPM,細(xì)胞侵襲能力部分減弱,N-cadherin、Vimentin、Twist1的表達(dá)也部分降低。針對(duì)數(shù)據(jù)庫預(yù)測的YY1在hnRNPM啟動(dòng)子上的兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)的雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,YY1可主要通過結(jié)合位點(diǎn)2發(fā)揮對(duì)hnRNPM的轉(zhuǎn)錄抑制效應(yīng)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明,過表達(dá)hnRNPM可使前列腺癌的轉(zhuǎn)移減少。結(jié)論HnRNPM在侵襲性較強(qiáng)的前列腺癌細(xì)胞系和轉(zhuǎn)移性更強(qiáng)的神經(jīng)內(nèi)分泌型前列腺癌組織中表達(dá)較低,YY1可轉(zhuǎn)錄抑制hnRNPM從而導(dǎo)致Twist1表達(dá)升高,進(jìn)而促進(jìn)前列腺癌的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化。我們認(rèn)為hnRNPM可作為一種標(biāo)志物輔助判斷前列腺癌的轉(zhuǎn)移和侵襲能力。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R737.25
【圖文】：

相關(guān)性利用 Spearman 相關(guān)性分析(SPSS 19.0, Inc.，USA被認(rèn)為有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。按照 p<0.05 具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差分為： *0.01≤p<0.05，**0.001≤p<0.01，***0.0001001，實(shí)驗(yàn)至少重復(fù) 3 次。NPM 在前列腺癌臨床樣本中的表達(dá)comine 數(shù)據(jù)庫顯示 hnRNPM 在前列腺癌樣本中的表達(dá)較正顯著降低確 hnRNPM 是否在前列腺癌的發(fā)生或進(jìn)展過程中發(fā)揮著 先 利 用 Oncomine 數(shù) 據(jù) 庫 （ Yu prostat.ncbi.nlm.nih.gov/geo/query/acc.cgi?acc=GSE6919.）對(duì) hnR達(dá)進(jìn)行了預(yù)測，如圖 1.1 所示 hnRNPM 在前列腺癌樣本樣本明顯降低（p < 0.001）。

1.2 hnRNPM 在前列腺癌組織和前列腺增生組織中的表還在接受前列腺癌根治術(shù)的 30 例患者術(shù)后標(biāo)本中分別取esternblot 檢測了 hnRNPM 在癌和癌旁中的表達(dá)，結(jié)果顯RNPM 在前列腺癌組織中的表達(dá)比癌旁組織低（圖 1.3）RNPM 在前列腺癌組織標(biāo)本和前列腺癌癌旁組織標(biāo)本中泌型前列腺癌（NEPC）是去勢抵抗性前列腺癌（CRPC）

天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文圖 1.2 hnRNPM 在前列腺癌組織和前列腺增生組織中的表達(dá)后我們還在接受前列腺癌根治術(shù)的 30 例患者術(shù)后標(biāo)本中分別取癌利用 Westernblot 檢測了 hnRNPM 在癌和癌旁中的表達(dá)，結(jié)果顯示中，hnRNPM 在前列腺癌組織中的表達(dá)比癌旁組織低（圖 1.3）。

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 楊同;YY1-hnRNPM通路在前列腺癌進(jìn)展中的作用機(jī)制研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2019年

本文編號(hào)：2781180