【摘要】：目的:近年來,越來越多的男性遭受不育癥的困擾,男性不育成為社會關(guān)注的熱點。精索靜脈曲張是引起男性不育最常見的原因之一,大約40%成年男性的原發(fā)性不育及80%的繼發(fā)性不育患有精索靜脈曲張。精索靜脈曲張引起血流淤滯,可影響睪丸的溫度調(diào)控,改變精子生成的微環(huán)境,進而影響精子生成;另一方面曲張的靜脈造成生精細胞的慢性缺氧和活性氧物質(zhì)過多產(chǎn)生,使精子過度凋亡,精子數(shù)量減少。盡管精索靜脈曲張會影響患者的生育能力,但有精索靜脈的患者并不都是不育的,造成不育的機制仍不明確。蛋白質(zhì)組學(xué)作為一種先進的研究技術(shù),可以在分子水平研究細胞或組織內(nèi)的蛋白功能和代謝過程。同位素標記相對和絕對定量技術(shù)(iTRAQ)在科研中廣泛受青睞,特別是在疾病的相關(guān)蛋白領(lǐng)域中具有較高靈敏度和特異性。精漿是男性附屬性腺的分泌物,富含蛋白質(zhì)和各種化學(xué)成分,是潛在的男性不育和生殖系統(tǒng)疾病的生化標志物。本實驗是以先前的研究為基礎(chǔ),利用蛋白組學(xué)技術(shù)進一步對不育合并精索靜脈曲張患者和正常生育者精漿中的蛋白進行分析,檢測出明顯表達差異的蛋白,通過研究差異蛋白的進行分子功能,以期深入了解精索靜脈曲張導(dǎo)致男性不育的分子機理。同時,利用蛋白免疫印跡技術(shù)(Western blot)對篩選出的差異表達蛋白進行驗證,獲取精索靜脈曲張致不育的蛋白標志物,為臨床治療男性不育提供幫助。方法:收集不育合并精索靜脈曲張患者的精液標本30份、正常生育男性精液標本40份及單純左側(cè)精索靜脈曲張患者的精液標本25份,提取出精漿作為實驗的標本。運用iTRAQ試劑盒標記實驗標本,117標記不育合并精索靜脈曲張患者組的精漿標本,114標記正常生育組的精漿標本,進行蛋白組學(xué)分析。使用Proteome Discoverer1.3軟件對得到的質(zhì)譜數(shù)據(jù)進一步分析,選擇上調(diào)大于1.5倍,下調(diào)小于0.7標準進行篩選。再對差異表達蛋白進行分子功能學(xué)的分析,并從中挑選出可作為不育標志物的蛋白,分別在3組的精漿中進行Western blot實驗,圖像的灰度值使用image pro plus 7.0軟件進行分析記錄。結(jié)果:差異表達的蛋白共篩選出39種,其中上調(diào)蛋白22種,下調(diào)蛋白17種。蛋白的分子功能共有14種,其中主要體現(xiàn)在蛋白結(jié)合、催化活性及結(jié)構(gòu)分子活性等方面。選取上調(diào)表達的HSP70,Bax,S100A12三種蛋白作為驗證對象。Western blot實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)HSP70、Bax及S100A12三種蛋白在不育合并精索靜脈曲張組表達最高,單純左側(cè)精索靜脈曲張組表達次之,正常生育組表達最低。結(jié)論:精索靜脈曲張可影響精漿蛋白的表達,可能主要通過影響蛋白的結(jié)合、催化活性及結(jié)構(gòu)分子活性等功能誘發(fā)不育。HSP70、Bax及S100A12三種蛋白的在精漿中的異常表達與精索靜脈曲張影響男性生育具有顯著的相關(guān)性,可以初步作為精索靜脈曲張患者的不育標記物。對于臨床型精索靜脈曲張的患者特別是有生育要求者,積極治療以保護生育能力。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R697.24

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 李慕然;劉艷迪;;鈣結(jié)合蛋白S100A12的臨床研究進展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2012年24期

2 張賓;王家富;黃慶玉;;精索靜脈曲張致男性不育機制的研究進展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2006年04期

3 張永亮,吳家櫦,吳梅筠;熱休克蛋白的分類、基因調(diào)控及其功能[J];法醫(yī)學(xué)雜志;1999年04期

本文編號：2759655