【摘要】：目的:近年來(lái),越來(lái)越多的男性遭受不育癥的困擾,男性不育成為社會(huì)關(guān)注的熱點(diǎn)。精索靜脈曲張是引起男性不育最常見(jiàn)的原因之一,大約40%成年男性的原發(fā)性不育及80%的繼發(fā)性不育患有精索靜脈曲張。精索靜脈曲張引起血流淤滯,可影響睪丸的溫度調(diào)控,改變精子生成的微環(huán)境,進(jìn)而影響精子生成;另一方面曲張的靜脈造成生精細(xì)胞的慢性缺氧和活性氧物質(zhì)過(guò)多產(chǎn)生,使精子過(guò)度凋亡,精子數(shù)量減少。盡管精索靜脈曲張會(huì)影響患者的生育能力,但有精索靜脈的患者并不都是不育的,造成不育的機(jī)制仍不明確。蛋白質(zhì)組學(xué)作為一種先進(jìn)的研究技術(shù),可以在分子水平研究細(xì)胞或組織內(nèi)的蛋白功能和代謝過(guò)程。同位素標(biāo)記相對(duì)和絕對(duì)定量技術(shù)(iTRAQ)在科研中廣泛受青睞,特別是在疾病的相關(guān)蛋白領(lǐng)域中具有較高靈敏度和特異性。精漿是男性附屬性腺的分泌物,富含蛋白質(zhì)和各種化學(xué)成分,是潛在的男性不育和生殖系統(tǒng)疾病的生化標(biāo)志物。本實(shí)驗(yàn)是以先前的研究為基礎(chǔ),利用蛋白組學(xué)技術(shù)進(jìn)一步對(duì)不育合并精索靜脈曲張患者和正常生育者精漿中的蛋白進(jìn)行分析,檢測(cè)出明顯表達(dá)差異的蛋白,通過(guò)研究差異蛋白的進(jìn)行分子功能,以期深入了解精索靜脈曲張導(dǎo)致男性不育的分子機(jī)理。同時(shí),利用蛋白免疫印跡技術(shù)(Western blot)對(duì)篩選出的差異表達(dá)蛋白進(jìn)行驗(yàn)證,獲取精索靜脈曲張致不育的蛋白標(biāo)志物,為臨床治療男性不育提供幫助。方法:收集不育合并精索靜脈曲張患者的精液標(biāo)本30份、正常生育男性精液標(biāo)本40份及單純左側(cè)精索靜脈曲張患者的精液標(biāo)本25份,提取出精漿作為實(shí)驗(yàn)的標(biāo)本。運(yùn)用iTRAQ試劑盒標(biāo)記實(shí)驗(yàn)標(biāo)本,117標(biāo)記不育合并精索靜脈曲張患者組的精漿標(biāo)本,114標(biāo)記正常生育組的精漿標(biāo)本,進(jìn)行蛋白組學(xué)分析。使用Proteome Discoverer1.3軟件對(duì)得到的質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)一步分析,選擇上調(diào)大于1.5倍,下調(diào)小于0.7標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行篩選。再對(duì)差異表達(dá)蛋白進(jìn)行分子功能學(xué)的分析,并從中挑選出可作為不育標(biāo)志物的蛋白,分別在3組的精漿中進(jìn)行Western blot實(shí)驗(yàn),圖像的灰度值使用image pro plus 7.0軟件進(jìn)行分析記錄。結(jié)果:差異表達(dá)的蛋白共篩選出39種,其中上調(diào)蛋白22種,下調(diào)蛋白17種。蛋白的分子功能共有14種,其中主要體現(xiàn)在蛋白結(jié)合、催化活性及結(jié)構(gòu)分子活性等方面。選取上調(diào)表達(dá)的HSP70,Bax,S100A12三種蛋白作為驗(yàn)證對(duì)象。Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)HSP70、Bax及S100A12三種蛋白在不育合并精索靜脈曲張組表達(dá)最高,單純左側(cè)精索靜脈曲張組表達(dá)次之,正常生育組表達(dá)最低。結(jié)論:精索靜脈曲張可影響精漿蛋白的表達(dá),可能主要通過(guò)影響蛋白的結(jié)合、催化活性及結(jié)構(gòu)分子活性等功能誘發(fā)不育。HSP70、Bax及S100A12三種蛋白的在精漿中的異常表達(dá)與精索靜脈曲張影響男性生育具有顯著的相關(guān)性,可以初步作為精索靜脈曲張患者的不育標(biāo)記物。對(duì)于臨床型精索靜脈曲張的患者特別是有生育要求者,積極治療以保護(hù)生育能力。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R697.24

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 李慕然;劉艷迪;;鈣結(jié)合蛋白S100A12的臨床研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2012年24期

2 張賓;王家富;黃慶玉;;精索靜脈曲張致男性不育機(jī)制的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2006年04期

3 張永亮,吳家櫦,吳梅筠;熱休克蛋白的分類、基因調(diào)控及其功能[J];法醫(yī)學(xué)雜志;1999年04期

本文編號(hào)：2759655