【摘要】：腎臟不僅參與代謝廢物的排泄,還具有分泌激素,維持水電解質(zhì)以及酸堿平衡等重要功能。因此,腎臟功能發(fā)生異常必然導(dǎo)致其他重要器官的代謝和功能也隨之改變。有研究表明:當腎臟功能受損時,其鄰近和遠端器官如心、肺、肝、腸和腦等的功能也會嚴重受損。腎缺血再灌注損傷(Renal ischemia reperfusion injury,RIRI)是目前臨床上經(jīng)常遇到的一個棘手問題,多見于高血壓、腎外科手術(shù)期間等,它也是導(dǎo)致腎移植術(shù)后功能恢復(fù)延遲、病人愈后較差甚至腎功能衰竭的重要因素。有研究表明:氧化應(yīng)激是導(dǎo)致RIRI發(fā)生的主要病理機制之一。缺血再灌注時腎臟處于高度氧化應(yīng)激狀態(tài),會有大量ROS產(chǎn)生。ROS包括超氧陰離子(O2-)、羥自由基(OH-)和過氧化氫(H2O2)等;ROS化學(xué)性質(zhì)非�；顫�,可以與細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、DNA和脂類等生物大分子發(fā)生過氧化反應(yīng),從而影響細胞功能,甚至引起細胞和組織死亡。Peroxiredoxin(Prx)蛋白是近幾年發(fā)現(xiàn)的一類過氧化物酶系,廣泛存在于各種原核和真核生物細胞中。Prx6是其家族成員之一,它在多種組織表達,其中肺和腦表達最多。研究表明,Prx6具有谷胱甘肽過氧化物酶的生物活性,其功能主要是負責還原H2O2和磷脂過氧化物等。腦組織是機體內(nèi)對氧含量高度敏感的器官,當腎臟缺血再灌注損傷發(fā)生后,腦組織是否也會受到氧化應(yīng)激損傷?抗氧化酶Prx6的基因和蛋白表達水平如何改變?未見報道。本研究通過采用無損傷動脈夾鉗夾腎動脈法建立大鼠腎缺血再灌注損傷模型。24小時后觀察腦組織內(nèi)MDA含量,Prx6基因水平和蛋白水平的表達變化,探討腎臟缺血再灌注損傷時腦組織的過氧化損傷程度,Prx6在缺血再灌注損傷過程中的抗氧化作用,為防治RIRI引起的腦組織損傷提供一條新思路。目的:觀察大鼠腎臟缺血再灌注損傷模型腦內(nèi)的氧化應(yīng)激狀態(tài)和抗氧化酶Prx6基因和蛋白水平的表達變化,探討Prx6在RIRI誘發(fā)的腦過氧化損傷中的作用。方法:1腎臟缺血再灌注損傷模型的制備及取材雄性Wister大鼠12只,體重200±10 g,購于河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心,隨機分為對照組(Control)和腎臟缺血再灌注損傷組(RIRI),每組各6只。用6%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠(5ml/kg),參照余曉東等人的方法制備腎臟缺血再灌注損傷模型。RIRI組大鼠開腹后暴露其雙側(cè)腎臟,先切除右腎,然后鈍性分離左腎動脈,在靠近腎門處用無創(chuàng)動脈夾夾閉左腎動脈,觀察腎臟由鮮紅色逐漸變?yōu)榘导t色。45mins后松開動脈夾,恢復(fù)血液供應(yīng),肉眼可見腎動脈充盈,腎臟由暗紅色迅速變?yōu)轷r紅色,表明再灌注成功。對照組大鼠開腹后只切除右腎,分離左腎動脈,但不夾閉左腎動脈。24小時后收集血液,3000rpm離心10min,分離血清用于血清肌酐(Serum Creatinine,SCr)、血尿素氮(Blood Urea Nitrogen,BUN)濃度測定;處死大鼠取腎臟和腦,將腎臟于4%多聚甲醛中固定進行HE染色,觀察腎臟的形態(tài)學(xué)改變。將腦組織置于液氮中用于Prx6m RNA和蛋白水平測定以及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量測定。2測定指標及方法2.1血清SCr和BUN水平測定血清SCr濃度采用苦味酸法測定;血清BUN濃度采用酶偶聯(lián)速率法測定。2.2 HE染色觀察大鼠腎臟的形態(tài)結(jié)構(gòu)腎臟組織經(jīng)常規(guī)脫水、透明,石蠟包埋后,切片厚約5μm,蘇木精伊紅染色,日本產(chǎn)Olympus光學(xué)顯微鏡下觀察腎臟的形態(tài)變化并進行圖象分析。2.3大鼠腦組織MDA含量測定將從-70℃冰箱中取出的腦組織按照10mg/100μl加入預(yù)冷的勻漿緩沖液(50mmol/L磷酸鉀緩沖液,PH7.4,1mmol/L鹽酸苯甲脒,1mmol/L PMSF,0.1%Tween-20,0.5mol/L Na Cl,1mmol/L EDTANa3,5mmol/Lβ-巰基乙醇),冰浴中勻漿,勻漿液4000rpm 4℃離心20min,取上清即制成10%腦組織勻漿,腦組織勻漿內(nèi)MDA含量采用南京建成丙二醛(MDA)測定試劑盒測定。2.4大鼠腦組織Prx6 m RNA水平測定用TRIzol法提取腦內(nèi)總RNA。約3μg總RNA反轉(zhuǎn)錄成c DNA。以GAPDH為內(nèi)對照,進行RT-PCR。分別以Prx6的擴增產(chǎn)物與GAPDH灰度值之比表示目的基因的相對表達量2.5大鼠腦組織Prx6蛋白水平測定采用Western blot法測定大鼠腦組織Prx6蛋白水平。將大鼠腦組織制成勻漿,離心后取上清。用改良Lowry法進行蛋白總量測定.電泳的蛋白上樣量為60ug.經(jīng)過轉(zhuǎn)膜和封閉處理后,在PVDF膜上加入兔抗Prx6抗體,室溫靜置過夜。再加入熒光標記的抗兔Ig G抗體.在雙色紅外線成像系統(tǒng)掃描照相并進行圖像數(shù)值分析。結(jié)果:1大鼠腎組織的形態(tài)學(xué)改變光學(xué)顯微鏡下可見正常組大鼠腎血管球、腎小囊、近曲、遠曲小管及集合管形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰規(guī)整。而RIRI組大鼠可見腎血管球萎縮,體積變小;腎小囊腔擴張;腎小管管腔明顯擴張,個別近曲小管上皮細胞水腫,胞漿疏松化;腎間質(zhì)水腫,腎小管間隙擴大;集合管出現(xiàn)管腔擴張、上皮水腫等改變。2血清SCr水平Con組大鼠血清中SCr的濃度為103.444±8.465μmol/L,而RIRI組血清SCr的濃度為131.153±17.814μmol/L。RIRI組大鼠血清SCr濃度明顯高于Con組(P0.05)。3血清BUN水平Con組大鼠血清BUN的濃度為4.462±0.541 mmol/L,而RIRI組血清BUN的濃度為13.685±4.397 mmol/L。RIRI組大鼠血清BUN的濃度明顯高于Con組(P0.05)。4腦勻漿內(nèi)MDA的含量Con組大鼠腦勻漿內(nèi)的MDA含量為7.67±1.77mmol/g,而RIRI組腦勻漿內(nèi)的MDA含量為11.67±2.33 mmol/g。RIRI組大鼠腦勻漿內(nèi)的MDA含量明顯高于Con組(P0.01)。5腦組織Prx6 m RNA的相對表達量采用RT-PCR的方法測定大鼠腦組織內(nèi)Prx6 m RNA的相對表達量。Con組腦組織內(nèi)Prx6 m RNA的相對表達量為0.69±0.16,RIRI腦組織內(nèi)Prx6 m RNA的相對表達量為1.08±0.19,RIRI組大鼠腦組織內(nèi)Prx6m RNA水平明顯高于Con組(P0.01)。說明RIRI組大鼠腦組織內(nèi)Prx6的基因表達水平升高。6大鼠腦組織Prx6蛋白水平Con組大鼠腦組織內(nèi)Prx6的蛋白表達水平為0.73±0.13,RIRI組大鼠腦組織內(nèi)Prx6的蛋白表達水平為1.12±0.19。RIRI組Prx6蛋白水平明顯高于對照組(P0.01)。說明RIRI組大鼠腦組織內(nèi)Prx6的蛋白表達水平升高。結(jié)論:1切除右腎后在靠近腎門處用無創(chuàng)動脈夾夾閉左腎動脈可成功建立大鼠腎臟缺血再灌注損傷模型。2腎臟缺血再灌注損傷可使遠端器官腦組織遭受氧化應(yīng)激損傷,同時抗氧化酶Prx6的基因和蛋白表達水平明顯增強。提示Prx6可能參與了腎臟缺血再灌注所誘發(fā)的腦組織內(nèi)氧化應(yīng)激反應(yīng),對腦組織具有保護作用。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R692;R-332

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2 祝~=驤;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;

本文編號：2753051