【摘要】：目前終末期腎臟病(end-stage renal disease,ESRD)的一體化治療中,血液透析和腹膜透析是兩種重要的治療方式。相對(duì)于血液透析而言,腹膜透析具有保護(hù)殘余腎功能、提供持續(xù)超濾、利于患者血壓控制與液體平衡、中分子物質(zhì)清除效果好、患者得以回歸社會(huì)等優(yōu)點(diǎn)。在腹膜透析過程中,各種急慢性原因所導(dǎo)致的腹膜病變可引起腹膜纖維化,并最終導(dǎo)致腹膜超濾失敗,這是患者退出腹膜透析的重要原因之一。其中,腹膜間皮細(xì)胞的上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)在腹膜透析(peritoneal dialysis,PD)相關(guān)性腹膜纖維化中起關(guān)鍵作用,其主要表現(xiàn)為上皮細(xì)胞標(biāo)志物如E-cadherin、ZO-1等表達(dá)降低,而間充質(zhì)標(biāo)志物如Vimentin、α-SMA等表達(dá)升高。研究顯示,miRNAs參與了多種細(xì)胞的EMT過程,進(jìn)而調(diào)節(jié)器官或組織的纖維化,但其在腹膜間皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化中的扮演的角色及其可能的機(jī)制尚未完全明確,仍有待進(jìn)一步研究。因此,是否能通過調(diào)節(jié)miRNAs的表達(dá),進(jìn)而抑制腹膜間皮細(xì)胞EMT的發(fā)生是腹膜纖維化預(yù)防和治療的新方向。目的:探討microRNA-15b對(duì)人腹膜間皮細(xì)胞向上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化(EMT)的調(diào)節(jié)作用及可能的分子機(jī)制。方法:1.進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),用不同濃度的高糖溶液刺激人腹膜間皮細(xì)胞株(HMrSV5),篩選最佳的高糖刺激濃度及時(shí)間點(diǎn)。2.使用138mmol/L高糖溶液刺激HMrSV5細(xì)胞24h,觀察高糖溶液對(duì)HMrSV5細(xì)胞microRNA-15b表達(dá)的影響。3.轉(zhuǎn)染 microRNA-15b 模擬物(microRNA-15b mimic)使 HMrSV5 中microRNA-15b 過表達(dá)或轉(zhuǎn)染 microRNA-15b 抑制劑(microRNA-15b inhibitor)抑制HMrSV5中microRNA-15b的表達(dá),再給予138mmol/L高糖溶液刺激24小時(shí),采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR、western印跡等方法,觀察過表達(dá)microRNA-15b或抑制表達(dá)microRNA-15b對(duì)高糖誘導(dǎo)的HMrSV5細(xì)胞EMT相關(guān)蛋白和基因表達(dá)的影響。4.觀察調(diào)節(jié)microRNA-15b后,Smad通路蛋白的mRNA和蛋白表達(dá)的改變。結(jié)果:1.根據(jù)細(xì)胞生物活性及蛋白表達(dá)情況選擇最佳刺激為138mmol/L高.糖溶液,最佳時(shí)間為24 h。2.138mmol/L高糖溶液的刺激,可使HMrSV5中microRNA-15b表達(dá)明顯升高(P0.05)。3.轉(zhuǎn)染microRNA-15b模擬物后高糖誘導(dǎo)下的上皮標(biāo)志物E-cadherin蛋白的表達(dá)明顯降低,并且高糖引起的間充質(zhì)標(biāo)志物Vimentin及纖維化標(biāo)記Fibronectin(FN)inRNA和蛋白表達(dá)增加(P0.05);而轉(zhuǎn)染microRNA-15b抑制劑則結(jié)果相反。4.轉(zhuǎn)染microRNA-15b mimic可明顯抑制高糖誘導(dǎo)下腹膜間皮細(xì)胞的Smad7mRNA及蛋白水平的表達(dá)(P0.05),而轉(zhuǎn)染microRNA-15b inhibitor可明顯增強(qiáng)高糖誘導(dǎo)下腹膜間皮細(xì)胞的Smad7 mRNA及蛋白水平的上調(diào)(P0.05)。結(jié)論:microRNA-15b在高糖刺激腹膜間皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化過程中上調(diào),其可能通過抑制Smad7的表達(dá)從而促進(jìn)腹膜間皮細(xì)胞上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化進(jìn)程。microRNA-15b可能成為防治腹透相關(guān)性腹膜纖維化的新靶點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R692.5
【圖文】：

以及細(xì)胞間滯留液體層構(gòu)成了腹膜溶質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)的主要屏障。而ＰＤ患者的腹膜結(jié)構(gòu)逡逑發(fā)生改變，包括間皮細(xì)胞層的損失，成纖維細(xì)胞數(shù)量增加，內(nèi)皮細(xì)胞纖維化和逡逑血管數(shù)量的增加（如圖１）邋［５］。逡逑人腹膜間皮細(xì)胞（ｈｕｍａｎ邋ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ邋ｍｅｓｏｔｈｅｌｉａｌ邋ｃｅｌｌｓ，ＨＰＭＣ）是構(gòu)成腹膜表層逡逑主要的細(xì)胞群體，其主要生理功能是參與血管與腹腔之間的溶質(zhì)交換，分泌相關(guān)逡逑細(xì)胞因子，調(diào)節(jié)腹膜微循環(huán)等？。現(xiàn)有的研宄表明，腹膜間皮細(xì)胞上皮－間充質(zhì)轉(zhuǎn)逡逑化（ＥＭＴ）是腹膜纖維化的重要始動(dòng)環(huán)節(jié)逡逑ＥＭＴ是指極性的上皮細(xì)胞通過特定程序轉(zhuǎn)化為具有強(qiáng)移動(dòng)能力并可在細(xì)胞逡逑基質(zhì)之間自由移動(dòng)及間質(zhì)相關(guān)表型的細(xì)胞的生物學(xué)過程，其在生物機(jī)體的形成逡逑１逡逑

蛋白組成的基底膜）。（４）細(xì)胞遷移和侵襲能力的增加。因間皮細(xì)胞形態(tài)的變逡逑化、細(xì)胞與基質(zhì)之間粘附關(guān)系的喪失、基底膜降解及ａ－ＳＭＡ的表達(dá)增加，最終逡逑導(dǎo)致轉(zhuǎn)分化細(xì)胞越基底膜游走于間質(zhì)及聚集的能力大大增強(qiáng)。（如圖２）逡逑ＨＧＦ，邋ＢＭＰ－７邐Ｄｅ邋ｎｏｖｏ邋ａＳＭＡ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ逡逑Ｌｏｔｓ邋ｏｆ邋ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ邋ａｄｈｅｓｉｏｎ邐ａｎｄ邋ａｃｔｉｎ邋ｒｅｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ逡逑你屮邋今＂ｃｉｊ。。ａ邋丨邋0邋？。。反＇Ａ。邐ＩＰＡ逡逑■ｎｎ．邋ｔ邐ｉｎ邐Ｉ逡逑Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ邋ｃｅｌｌｓ邐Ｅ－ｃａｄｍ邐／邐ｉ逡逑ｖ邐ｙ邐＇邐１邋Ｉ邐邋ＭＭＰ＊９邋ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ逡逑＂＂＂＇ｂ￣￣ｄ￣￣Ｈ￣＾￣邐Ａｎｇｌｌ邋ｂｌｏｃｋａｄｅ逡逑Ｄ邐０邐ＴＢＭ邋ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ逡逑滙樐邐ｎｎ廠逡逑Ｅｎｈａｎｃｅｄ邋ｃｅｌｌ邋ｍｉｇｒａｔｉｏｎ邐＾逡逑ａｎｄ邋ｉｎｖａｓｉｏｎ邐？邋？逡逑ｉ邋￣￣邐｜ｙｒ邐ＭＭＰ－２逡逑？逡逑／逡逑Ｍｙｏｆｔｂｆｏｂｉｗｔ’邐ＲＯＣＫ邋ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ逡逑圖２：上皮－間充質(zhì)轉(zhuǎn)化中的四個(gè)關(guān)鍵步驟逡逑Ｙａｎｅｚ－Ｍｏ邋Ｍ等人在２００３年首先提出腹膜透析中出現(xiàn)腹膜間皮細(xì)胞ＥＭＴ的逡逑現(xiàn)象［９］。他們對(duì)腹透患者的隨訪研宄中發(fā)現(xiàn)，在腹膜透析的早期，患者的腹膜組逡逑織就會(huì)出現(xiàn)ＥＭＴ，從流出的腹透液中收集培養(yǎng)的腹膜間皮細(xì)胞里有部分表現(xiàn)出逡逑纖維細(xì)胞樣的形態(tài)學(xué)改變，并且表現(xiàn)出不同程度轉(zhuǎn)分化細(xì)胞的特征。ＤｅｌｆＭ等人逡逑的研宄進(jìn)一步證實(shí)了這一觀點(diǎn)

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

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本文編號(hào)：2733894