發(fā)布時(shí)間：2020-06-25 13:37

【摘要】：微小RNA(micro RNAs)異常表達(dá)與腫瘤發(fā)生過程相關(guān),Micro RNA-301a-3p(mi R-301a-3p)已被報(bào)道在多種人類癌癥中表達(dá)失調(diào)并參與癌癥發(fā)生發(fā)展,但是其在前列腺癌中的作用鮮有報(bào)道,本研究旨在闡明mi R-301a-3p在前列腺癌中的作用和分子機(jī)制,為前列腺癌治療提供潛在治療靶點(diǎn)。本研究分成以下3個(gè)部分進(jìn)行:第一部分mi R-301a-3p和RUNX3在前列腺癌細(xì)胞和組織中的表達(dá)研究。目的:mi R-301a-3p和RUNX3分別在前列腺癌細(xì)胞和組織中的表達(dá)情況。方法:收集標(biāo)本,包括15例前列腺癌癌組織及其鄰近的正常前列腺組織。購(gòu)入前列腺癌細(xì)胞LNCa P、PC-3、DU-145及正常前列腺上皮細(xì)胞RWPE-1。采用熒光定量PCR檢測(cè)前列腺癌組織、細(xì)胞中及正常前列腺組織、細(xì)胞中mi R-301a-3p和RUNX3 m RNA的表達(dá)水平,并對(duì)其進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:前列腺癌組織及前列腺癌細(xì)胞中mi R-301a-3p表達(dá)升高,RUNX3表達(dá)降低。第二部分mi R-301a-3p對(duì)前列腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。目的:mi R-301a-3p對(duì)前列腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。方法:將合成的mi R-301a-3p mimics和anti-mi R-301a-3p轉(zhuǎn)染至前列腺癌細(xì)胞,MTT實(shí)驗(yàn)比較兩組增殖情況并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。平板克隆實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞中比較mi R-301a-3p mimics及anti-mi R-301a-3p對(duì)前列腺癌細(xì)胞克隆形成數(shù)目的影響并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。使用Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)將mi R-301a-3p mimics及anti-mi R-301a-3p轉(zhuǎn)染細(xì)胞,與對(duì)照組比較結(jié)晶紫染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:mi R-301a-3p過表達(dá)促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移,沉默mi R-301a-3p表達(dá)抑制前列腺癌細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。第三部分mi R-301a-3p靶基因及其促癌機(jī)制的初步研究。研究目的:mi R-301a-3p的靶基因以及mi R-301a-3p通過靶基因的促癌機(jī)制。研究方法:構(gòu)建RUNX3高表達(dá)質(zhì)粒,明確RUNX3蛋白在mi R-301a-3p引起的前列腺癌細(xì)胞生物學(xué)功能中的作用。突變RUNX3 3’UTR,利用熒光素酶表達(dá)質(zhì)粒探討3’UTR區(qū)對(duì)mi R-301a-3p調(diào)控RUNX3表達(dá)的影響。Western方法檢測(cè)RUNX3蛋白表達(dá)水平。進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。研究結(jié)果:mi R-301a-3p可直接靶向調(diào)控RUNX3基因,mi R-301a-3p過表達(dá)顯著降低前列腺癌細(xì)胞RUNX3蛋白表達(dá)。mi R-301a-3p過表達(dá)增加前列腺癌細(xì)胞侵襲的作用可以被RUNX3過表達(dá)所降低。mi R-301a-3p過表達(dá)增加Wnt通路活性,以及增加Wnt下游基因c-myc和cyclin D1的表達(dá)水平,相反,抑制mi R-301a-3p表達(dá)降低Wnt通路活性,以及降低Wnt下游基因c-myc和cyclin D1的表達(dá)水平。結(jié)論:mi R-301a-3p在前列腺癌組織和癌細(xì)胞系明顯表達(dá)升高,并通過降低RUNX3的表達(dá)作用到Wnt信號(hào)通路,增加前列腺癌細(xì)胞的增殖、侵襲能力。mi R-301a-3p在前列腺癌中的關(guān)鍵作用以及mi R-301a-3p和RUNX3的直接關(guān)系。mi R-301a-3p通過靶向調(diào)控RUNX3促進(jìn)前列腺癌增殖和侵襲,提示其可能作為前列腺癌的潛在治療靶點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R737.25
【圖文】：

qRT-PCR 檢測(cè)前列腺癌組織和癌旁組織標(biāo)本 miR-301a-3p mRNA 表達(dá)水織中 miR-301a-3p mRNA 表達(dá)水平高于癌旁組織，二者比較差異具有統(tǒng)計(jì)＜0.01。

qRT-PCR 檢測(cè)前列腺癌組織和癌旁組織標(biāo)本 RUNX3 mRNA 表達(dá)水平。 RUNX3 mRNA 表達(dá)水平低于癌旁組織，二者比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義列腺癌細(xì)胞中 miR-301a-3p 和 RUNX3 表達(dá)水平的檢測(cè)，進(jìn)一步利用 LNCaP、PC-3 和 DU-145 前列腺癌細(xì)胞檢測(cè)前a-3p 的表達(dá)水平變化，結(jié)果如圖 1.3 顯示，與 RWPE-1 前列腺

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1 馬建宏;曹開源;徐霖;鐘慧玲;張素粉;羅虹嬌;庹玖玲;張?zhí)?劉建中;;前列腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的篩選[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2015年11期

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本文編號(hào)：2729216