【摘要】：微小RNA(micro RNAs)異常表達與腫瘤發(fā)生過程相關,Micro RNA-301a-3p(mi R-301a-3p)已被報道在多種人類癌癥中表達失調并參與癌癥發(fā)生發(fā)展,但是其在前列腺癌中的作用鮮有報道,本研究旨在闡明mi R-301a-3p在前列腺癌中的作用和分子機制,為前列腺癌治療提供潛在治療靶點。本研究分成以下3個部分進行:第一部分mi R-301a-3p和RUNX3在前列腺癌細胞和組織中的表達研究。目的:mi R-301a-3p和RUNX3分別在前列腺癌細胞和組織中的表達情況。方法:收集標本,包括15例前列腺癌癌組織及其鄰近的正常前列腺組織。購入前列腺癌細胞LNCa P、PC-3、DU-145及正常前列腺上皮細胞RWPE-1。采用熒光定量PCR檢測前列腺癌組織、細胞中及正常前列腺組織、細胞中mi R-301a-3p和RUNX3 m RNA的表達水平,并對其進行統(tǒng)計學分析。結果:前列腺癌組織及前列腺癌細胞中mi R-301a-3p表達升高,RUNX3表達降低。第二部分mi R-301a-3p對前列腺癌細胞生物學行為的影響。目的:mi R-301a-3p對前列腺癌細胞生物學行為的影響。方法:將合成的mi R-301a-3p mimics和anti-mi R-301a-3p轉染至前列腺癌細胞,MTT實驗比較兩組增殖情況并進行統(tǒng)計學分析。平板克隆實驗觀察細胞中比較mi R-301a-3p mimics及anti-mi R-301a-3p對前列腺癌細胞克隆形成數目的影響并進行統(tǒng)計學分析。使用Transwell侵襲實驗將mi R-301a-3p mimics及anti-mi R-301a-3p轉染細胞,與對照組比較結晶紫染色陽性細胞數目并進行統(tǒng)計學分析。結果:mi R-301a-3p過表達促進前列腺癌細胞增殖、侵襲和轉移,沉默mi R-301a-3p表達抑制前列腺癌細胞增殖、侵襲和轉移。第三部分mi R-301a-3p靶基因及其促癌機制的初步研究。研究目的:mi R-301a-3p的靶基因以及mi R-301a-3p通過靶基因的促癌機制。研究方法:構建RUNX3高表達質粒,明確RUNX3蛋白在mi R-301a-3p引起的前列腺癌細胞生物學功能中的作用。突變RUNX3 3’UTR,利用熒光素酶表達質粒探討3’UTR區(qū)對mi R-301a-3p調控RUNX3表達的影響。Western方法檢測RUNX3蛋白表達水平。進行統(tǒng)計學分析。研究結果:mi R-301a-3p可直接靶向調控RUNX3基因,mi R-301a-3p過表達顯著降低前列腺癌細胞RUNX3蛋白表達。mi R-301a-3p過表達增加前列腺癌細胞侵襲的作用可以被RUNX3過表達所降低。mi R-301a-3p過表達增加Wnt通路活性,以及增加Wnt下游基因c-myc和cyclin D1的表達水平,相反,抑制mi R-301a-3p表達降低Wnt通路活性,以及降低Wnt下游基因c-myc和cyclin D1的表達水平。結論:mi R-301a-3p在前列腺癌組織和癌細胞系明顯表達升高,并通過降低RUNX3的表達作用到Wnt信號通路,增加前列腺癌細胞的增殖、侵襲能力。mi R-301a-3p在前列腺癌中的關鍵作用以及mi R-301a-3p和RUNX3的直接關系。mi R-301a-3p通過靶向調控RUNX3促進前列腺癌增殖和侵襲,提示其可能作為前列腺癌的潛在治療靶點。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R737.25
【圖文】：

qRT-PCR 檢測前列腺癌組織和癌旁組織標本 miR-301a-3p mRNA 表達水織中 miR-301a-3p mRNA 表達水平高于癌旁組織，二者比較差異具有統(tǒng)計＜0.01。

qRT-PCR 檢測前列腺癌組織和癌旁組織標本 RUNX3 mRNA 表達水平。 RUNX3 mRNA 表達水平低于癌旁組織，二者比較差異具有統(tǒng)計學意義列腺癌細胞中 miR-301a-3p 和 RUNX3 表達水平的檢測，進一步利用 LNCaP、PC-3 和 DU-145 前列腺癌細胞檢測前a-3p 的表達水平變化，結果如圖 1.3 顯示，與 RWPE-1 前列腺

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1 馬建宏;曹開源;徐霖;鐘慧玲;張素粉;羅虹嬌;庹玖玲;張?zhí)?劉建中;;前列腺癌細胞轉移相關基因的篩選[J];熱帶醫(yī)學雜志;2015年11期

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本文編號：2729216