【摘要】：目的:探討G蛋白偶聯(lián)雌激素受體(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)對SD大鼠腎臟缺血再灌注損傷(Ischemia Reperfusion Injure,IRI)后腎葉間動脈舒縮功能的影響及其機制研究。方法:本研究采用正常雌性SD大鼠建立去卵巢(Ovariectomy,OVX)模型,兩周后將去卵巢的雌性大鼠分為OVX組,OVX+IR組,OVX+IR+G1(GPER激動劑)組,OVX+IR+G1+G15(GPER阻斷劑)組,OVX+IR+G1+L-NAME(一氧化氮合酶抑制劑)組。切除右腎,使用無創(chuàng)動脈夾夾閉左側(cè)腎蒂,制備大鼠腎臟缺血再灌注損傷模型。腹主動脈采血測定血清肌酐(SCr)及尿素氮(BUN)含量,檢測腎臟功能。腎臟組織切片進行末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的脫氧三磷酸尿苷缺口末端標(biāo)記(TUNEL染色)和蘇木精—伊紅染色(hematoxylin-eosin,HE)及Paller式評分,評價腎臟組織及腎葉間動脈的損傷程度。離體分離腎葉間動脈,利用體外微血管壓力直徑測量技術(shù)檢測每組腎葉間動脈的收縮與舒張活動。免疫熒光技術(shù)用于觀察腎葉間動脈中GPER和一氧化氮合酶(e NOS)的定位和表達。通過Western Blot檢測每組腎葉間動脈中的GPER和e NOS蛋白表達水平。使用硝酸鹽還原酶法檢測各組血清中一氧化氮(NO)含量。結(jié)果:(1)TUNEL染色顯示腎臟缺血再灌注后腎小管上皮細胞凋亡顯著增多(P0.01);(2)腎臟缺血再灌注損傷后血清肌酐(SCr)和血尿素氮(BUN)水平顯著增高(P0.01),腎小球出現(xiàn)皺縮變形,腎小管上皮細胞結(jié)構(gòu)被破壞,Paller式評分顯示腎臟組織損傷增加(P0.01)。同時腎葉間動脈結(jié)構(gòu)受到明顯破壞。干預(yù)G1可以使缺血再灌注損傷后血清BUN和SCr水平明顯下降(P0.01),并且可以使腎臟組織及腎葉間動脈內(nèi)皮細胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)保持完整,G15和L-NAME部分逆轉(zhuǎn)G1的效果(P0.01);(3)腎臟缺血再灌注損傷后,腎葉間動脈收縮率和血管收縮速率均明顯下降(P0.01)。G1干預(yù)后改善了血管的收縮率和收縮速率(P0.01),G15和L-NAME干預(yù)后部分逆轉(zhuǎn)了這種效果(P0.01)。(4)免疫熒光技術(shù)顯示GPER在腎葉間動脈平滑肌細胞和內(nèi)皮細胞中表達,并且缺血再灌注后GPER的熒光強度上升,e NOS的熒光強度下降(P0.01)。(5)Western blot結(jié)果顯示,缺血再灌注損傷后GPER蛋白表達含量增加(P0.01),e NOS蛋白表達明顯下降(P0.01)。G1干預(yù)后,GPER蛋白表達含量未見明顯變化,而e NOS含量明顯增加(P0.01)。(6)缺血再灌注后,血清中一氧化氮含量下降,G1干預(yù)后其水平有所增加(P0.01),G15和L-NAME不同程度地逆轉(zhuǎn)了G1的效果(P0.01)結(jié)論:GPER在腎葉間動脈中表達,在缺血再灌注損傷后GPER的表達升高。激活GPER可以明顯改善腎臟缺血再灌注后的腎臟功能,減輕腎臟組織的損傷及改善腎葉間動脈內(nèi)皮細胞的結(jié)構(gòu)變化,改善腎葉間動脈的舒縮活動。同時激活GPER可以使腎葉間動脈上的e NOS表達含量增加,并且增加血清中一氧化氮的含量。結(jié)果表明激活GPER可以通過增加NO含量來改善腎葉間動脈的功能,從而防治腎臟缺血再灌注損傷。
【圖文】：

大鼠腎臟缺血再灌注24小時后各組尿素氮含量的變化

大鼠腎臟缺血再灌注24小時后各組血清肌酐含量的變化
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R692

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本文編號：2700634