【摘要】：目的:初步探討偽基因和長鏈非編碼RNA(Long non-coding RNA,LncRNA)作為腎透明細(xì)胞癌非侵入性生物標(biāo)記物的可行性。方法:結(jié)合本課題組前期研究,并在查閱相關(guān)文獻(xiàn)后,我們選取了8個(gè)LncRNA和10個(gè)偽基因,使用腎透明細(xì)胞癌患者和健康成年人血漿對(duì)其表達(dá)差異進(jìn)行了初步檢驗(yàn),這些具體步驟包括提取血漿總RNA、反轉(zhuǎn)錄為cDNA、以及使用5sRNA為內(nèi)參,進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢驗(yàn)等。經(jīng)過初步檢驗(yàn)后,我們進(jìn)一步獲得了在腎透明細(xì)胞癌患者和健康成年人之間血漿中表達(dá)差異較為顯著的1個(gè)LncRNA和4個(gè)偽基因。隨后,我們采用了較大的樣本量并使用類似方法進(jìn)行驗(yàn)證和篩選,其中包括了55個(gè)腎透明細(xì)胞癌患者以及26位健康成年人的血漿樣本,以初步判斷其作為腎透明細(xì)胞癌診斷性非侵入性生物標(biāo)記物的潛能。最后,對(duì)篩選出的LncRNA和偽基因進(jìn)行了在線樣本分析,以判斷其與預(yù)后的顯著相關(guān)性,探究其作為腎癌預(yù)后非侵入性生物標(biāo)記物的潛能及其影響腎癌發(fā)生、發(fā)展的可能機(jī)制。結(jié)果:對(duì)于被選出的部分LncRNA和偽基因,我們采集了腎透明細(xì)胞癌患者和健康成年人的血樣對(duì)其表達(dá)水平進(jìn)行了初步檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)樣本中偽基因PLEKHA8P1、CXCR2P1、KLRAP1、PDXDC2P、FER1L4和LncRNA TLX1NB、LINC00482、DIO3OS表達(dá)水平改變較為一致且較為顯著。隨后,在使用更大的樣本容量進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證后,我們發(fā)現(xiàn)偽基因CXCR2P1(RQ=2.017,p=0.016)、KLRAP1(RQ=3.152,p=0.010)、PLEKHA8P1(RQ=2.782,p=0.014)、PDXDC2P(RQ=2.625,p=0.029)以及LncRNA TLX1NB(RQ=1.904,p=0.013)在腎透明細(xì)胞癌患者血漿中的表達(dá)水平上升均較為顯著,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。最后,經(jīng)生物信息學(xué)分析,我們發(fā)現(xiàn)偽基因CXCR2P1、KLRAP1、PLEKHA8P1以及LncRNA TLX1NB與腎透明細(xì)胞癌患者預(yù)后相關(guān)。結(jié)論:1.成功創(chuàng)建并驗(yàn)證了在血漿中提取LncRNA和偽基因,直至進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測其表達(dá)水平的體系。2.血漿偽基因CXCR2P1、KLRAP1、PLEKHA8P、PDXDC2P以及LncRNA TLX1NB可能成為腎透明細(xì)胞癌的診斷性非侵入性生物標(biāo)記物。3.血漿偽基因CXCR2P1、KLRAP1、PLEKHA8P以及LncRNA TLX1NB可能成為腎透明細(xì)胞癌預(yù)后的非侵入性生物標(biāo)記物。
【圖文】：

圖 1.1 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 擴(kuò)增曲線Fig1.1 Real-time Quantitative PCR amplification curve3.3 血漿中 LncRNA 和偽基因差異表達(dá)分析我們已通過前期研究篩選出一些在腎透明細(xì)胞癌癌組織中與預(yù)后顯著相關(guān)的 LncRNA 和偽基因。而本章節(jié)研究中，我們?cè)噲D探尋腎透明細(xì)胞癌患者血漿中這些 LncRNA 和偽基因的表達(dá)與健康成年人相比是否會(huì)出現(xiàn)異常。本章節(jié)研究中，我們使用 5sRNA 為內(nèi)參，初步分析了 2 位健康成年人和 2 位腎透明細(xì)胞癌血漿中部分 LncRNA 和偽基因的表達(dá)水平差異。這 10 個(gè)偽基因包括：PLEKHA8P1、OR2A9P、CXCR2P1、KLRAP1、PDXDC2P、SPACA6P、RNF216P、CFL1P1、FER1L4、PIPSL，，而 8 個(gè) LncRNA 為 TLX1NB、LINC00482、DIO3OS、HAR1A、LINC00623、LINC001565、FAM225B、CDKN2A-AS1。在經(jīng)實(shí)時(shí)熒光

22圖 1.3 腎透明細(xì)胞癌患者與健康成年人血漿中的 LncRNA 表達(dá)情況差異Fig1.3 Differences in the expression level of LncRNAs in plasma between ccRCC patientsand healthy adults（注：圖 a：DIO3OS;圖 b：LINC00482;圖 c：TLX1NB；Normal：健康成年人組；ccRCC：腎透明細(xì)胞癌患者組）
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R737.11

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2670953