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石墨烯經NF-κBp65信號通路介導人腎小球足細胞上皮間質轉分化

發(fā)布時間:2020-05-06 06:53
【摘要】:背景與目的近期侯凡凡及其團隊研究發(fā)現(xiàn):長期暴露于霧霾當中會增加膜性腎病的發(fā)病率,但其內在的發(fā)病機制如何卻未有說明,既往文獻也無報道。但是既往報道表明作為腎小球毛細血管網過濾血液的最后一道關卡,足細胞的結構受損和蛋白尿的出現(xiàn)密切相關,特別是臨床上以大量蛋白尿為主的腎小球腎炎,如膜性腎病(MN)、糖尿病腎病(DN),微小病變腎小球腎炎(MCD)等病理類型,并在腎臟病進展中扮演重要角色。其中足細胞上皮間質轉分化(EMT)在足細胞損傷中起著重要的作用。本研究目的:石墨烯是一種完全由碳原子組成二維納米材料,因其由炭元素組成及納米級粒子直徑的物理性質,可以作為PM2.5的模型之一來探究霧霾引起膜性腎病的內在機制。方法(1)體外培養(yǎng)足細胞石墨烯以濃度0、10、20、40ug/ml的濃度刺激足細胞24h;(2)實時定量PCR及Western BLOT檢測EMT相關上皮表型蛋白ZO-1、Nephrin、E-cadherin及間質表型蛋白α-SMA、Desmin的m RNA及蛋白表達,Western BLOT檢測信號通路蛋白NF-κBp65表達(3)在20ug/ml石墨烯中加入NF-κB特異性抑制劑BAY 11-7082后,實時定量PCR及Western BLOT檢測EMT相關蛋白Nephrin、E-cadherin及α-SMA、Desmin m RNA及蛋白表達(4)免疫熒光染色法觀察各個濃度石墨烯刺激下Nephrin和α-SMA足細胞EMT相關表型蛋白的變化。結果與對照組相比不同石墨烯濃度刺激下信號通路蛋白NF-κBp65的蛋白表達升高,EMT相關蛋ZO-1、Nephrin、E-cadherin表達量下降,RT-PCR檢測上述蛋白m RNA表達量與蛋白表達一致;α-SMA、Desmin分子蛋白及m RNA表達量升高。與20ug/ml石墨烯濃度相比,使用NF-κBp65信號通路特異性抑制劑BAY11-7082后EMT相關蛋白Nephrin、E-cadherin表達量升高,α-SMA、Desmin表達量下降,RT-PCR檢測上述蛋白m RNA表達量與蛋白表達一致結論石墨烯經NF-κBp65信號通路促進腎小球足細胞上皮間質轉分化,抑制NF-κB信號通路能夠抑制足細胞上皮間質轉分化。
【圖文】:

足細胞,石墨,免疫熒光,熒光


石墨烯對足細胞Nephrin,,α-SMA免疫熒光的影響(細胞免疫熒光200)
【學位授予單位】:鄭州大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2019
【分類號】:R692

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