發(fā)布時間：2020-04-30 17:56

【摘要】：目的研究分析Ces5a基因在大鼠睪丸發(fā)育過程中的表達情況,探究該基因在精子發(fā)生過程中可能起的作用,為男性不育相關(guān)疾病的研究提供一定的理論基礎(chǔ),為今后對該基因的研究提供相應(yīng)的數(shù)據(jù)支持。方法(1)取出生后2-65日齡,共21個時間點的雄性Wistar大鼠,每個時間點分別取四只不同窩別的大鼠,睪丸組織提取總mRNA和總蛋白;(2)將總mRNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA,采用Real-time PCR方法檢測不同時間點大鼠睪丸組織中Ces5a基因mRNA的轉(zhuǎn)錄水平。(3)用Western blot方法檢測不同時間點大鼠睪丸組織中Ces5a蛋白表達水平。(4)用免疫組織化學(xué)方法分別觀察12日齡、20日齡、40日齡、60日齡的大鼠睪丸組織中Ces5a蛋白表達定位情況。結(jié)果(1)Real-time PCR檢測Ces5a基因mRNA轉(zhuǎn)錄情況,結(jié)果可以看出該基因mRNA在大鼠出生后的第2至第65天均有表達。在大鼠出生后第2-12天Ces5a基因mRNA的表達量較低;與2-12天相比,14-16天mRNA的表達量下降至最低水平(P0.05);與14-16天相比,20-35天該基因mRNA的表達量有顯著升高(P0.05);與20-35天相比,40-65天該基因mRNA的表達量有顯著升高,達到高峰(P0.05)。(2)Western blot方法檢測Ces5a蛋白表達水平,結(jié)果可知,在大鼠出生后第2至第65天Ces5a蛋白均有表達。在大鼠出生后第2-12天Ces5a蛋白的表達量較低;與2-12天相比,14-16天Ces5a蛋白的表達量無顯著變化(P0.05);與14-16天相比,20-35天該蛋白的表達量有顯著升高(P0.05);與20-35天相比,40-65天該蛋白的表達量無顯著變化(P0.05)。(3)通過免疫組織化學(xué)方法觀察Ces5a蛋白表達的定位,該蛋白在12日齡,20日齡,40日齡,60日齡的睪丸組織中均有表達,陽性表達呈棕黃色。其中精原細胞、精母細胞及圓形精子細胞處被染為棕黃色,呈陽性,說明Ces5a蛋白在該處有表達。結(jié)論(1)Ces5a基因可能參與了大鼠精原細胞增殖過程及減數(shù)分裂過程。(2)Ces5a基因在圓形精子細胞處有少量表達,長形精子細胞處沒有表達,提示我們該基因可能在圓形精子發(fā)生和精子變形過程中發(fā)揮了特殊的作用。
【圖文】：

圖1. SYCP3基因在大鼠出生后第2,4,6,8,10,12,15,20,25,30天的轉(zhuǎn)錄水平Figure 1. Transcriptional levels of the SYCP3 gene at 2, 4, 6, 8, 10, 12, 15, 20, 25, 30 daysafter birth in rats.（Liu TD, Yu BY, Luo FH, et al,2012）

Ces5a和GAPDH的溶解曲線和擴增曲線
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R698.2

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6 王永杰;李雷;秦永剛;嚴s，

本文編號：2646033