【摘要】：目的:前列腺癌(Prostate Cancer,PCa)在男性泌尿系統(tǒng)腫瘤中是最常見的惡性腫瘤之一,其主要特點是發(fā)病率和病死率高,而且其發(fā)病后對男性健康帶來的危害以及社會醫(yī)療資源的消耗也不容忽視,所以目前越來越受到全球人們的關(guān)注。在我國,人們的生活習(xí)慣、飲食結(jié)構(gòu)的改變,以及人口老齡化的日趨嚴重程度,以及人們對該病的日益重視程度和近年來現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的診斷和治療水平的不斷提高,前列腺癌在男性泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤中的發(fā)病率和病死率分別位居第六位和第九位,而且以年增長率10%的速度在男性泌尿系腫瘤的發(fā)病率中位居首位。但由于前列腺癌早期癥狀的非典型性和疾病篩查的相對滯后性,使得仍有約5%的患者就診時已經(jīng)發(fā)現(xiàn)有遠處轉(zhuǎn)移。針對此病的治療,傳統(tǒng)治療方案就是去勢治療(Androgen Deprivation Therapy,ADT),也稱為雄激素剝奪治療,包括藥物去勢和手術(shù)去勢,主要通過阻斷雄激素和雄激素受體(Androgen Receptor,AR)結(jié)合這一機制來起到抑制前列腺腫瘤的生長,降低前列腺特異性抗原(Protate Specific Antigen,PSA),提高患者生活質(zhì)量以及延長其生存時間。大多數(shù)患者能從去勢治療中獲益,但治療18-30個月后,絕大多數(shù)患者便會轉(zhuǎn)入去勢抵抗性前列腺癌(Castration Resistant Prostate Cancer,CRPC),導(dǎo)致目前現(xiàn)有的治療手段效果不佳,其中位生存時間僅僅約18-24個月。近年來,隨著廣大臨床工作者和科研人員對于去勢抵抗性前列腺癌的不斷認識和深入研究,對此病的發(fā)生機制以及臨床治療上有了很大進步。2-甲氧基雌二醇(2-ME_2),開始是在妊娠期女性的尿液當中被發(fā)現(xiàn)。后研究發(fā)現(xiàn)其具有抗血管生成、阻滯細胞分化周期和誘導(dǎo)細胞凋亡的作用,而且文獻報道其抗腫瘤譜越來越廣泛,如乳腺癌、肝癌、鼻咽癌、造血系統(tǒng)腫瘤等,并且由于其不良反應(yīng)較小,所以研究價值很高。本實驗選擇非激素依賴性人體前列腺癌組織細胞PC-3細胞株作為研究對象,通過藥物2-甲氧基雌二醇(2-ME_2)和黃柏素(Nexrutine)作用于PC-3細胞后觀察起凋亡水品的變化情況,以此研究2-甲氧基雌二醇(2-ME_2)和黃柏素(Nexrutine)對于前列腺癌細胞凋亡的影響。方法:本實驗以人前列腺癌組織PC-3細胞株為研究對象,細胞株培養(yǎng)在含有10%胎牛血清的標準RPMI 1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,培養(yǎng)瓶放置在設(shè)定條件為5%CO_2、37℃飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱內(nèi)進行常規(guī)孵育。細胞生長到一定密度后接種到六孔板內(nèi)繼續(xù)孵育,達到實驗要求后用藥物進行干預(yù),干預(yù)前后均使用倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化情況。(1)用不同濃度(0.5um/l、1.0um/l、5.0um/l及10.0um/l)的2-甲氧基雌二醇及(2.5ug/ml、5.0ug/ml、10.0ug/ml及20.0ug/ml)黃柏素(Nexrutine)分別干預(yù)細胞24小時和48小時后收集標本用RT-PCR來測量c-FLIP mRNA的表達變化,用Western-blot測量c-FLIP蛋白的表達變化情況;(2)用2.5ug/ml濃度的黃柏素聯(lián)合不同濃度(0.5um/l、1.0um/l、5.0um/l及10.0um/l)的2-甲氧基雌二醇共同干預(yù)細胞后再用上述兩種方法測量目標基因和目標蛋白的變化情況,各組均設(shè)定空白對照。所得數(shù)據(jù)使用應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析,采用析因設(shè)計的方差分析方法,檢驗水準ɑ=0.05,P0.05差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1.倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化情況正常培養(yǎng)的前列腺癌PC-3細胞為單層貼壁生長細胞,細胞可以呈梭形、三角形或不規(guī)則形態(tài)。細胞漿飽滿,胞質(zhì)透光性好,細胞核可以單核,也可以多核。而使用2-ME_2和黃柏素這兩種藥物干預(yù)后的PC-3細胞生長速度較正常細胞有所下降,且細胞形態(tài)可以變圓,鏡下可見部分細胞出現(xiàn)胞膜皺縮、胞漿渾濁,少量細胞胞核也可以出現(xiàn)濃縮現(xiàn)象,折光性較差,貼壁能力下降。而且隨著干預(yù)時間的延長細胞間隙明顯增大,部分細胞體積較正常明顯縮小,細胞核染色質(zhì)和細胞質(zhì)明顯濃縮,死亡懸浮細胞增多。兩種藥物聯(lián)合使用后,死亡細胞明顯增多,總細胞數(shù)也明顯減少,而且對與藥物濃度、藥物作用時間依賴性更明顯。2.RT-PCR測定c-FLIP mRNA相對表達不僅單用2-甲氧基雌二醇和黃柏素能夠明顯抑制PC-3細胞內(nèi)c-FLIP mRNA的相對表達,聯(lián)合黃柏素后2-甲氧基雌二醇使PC-3細胞內(nèi)c-FLIP mRNA的相對表達降低更加明顯,從而證實兩種藥物可以誘導(dǎo)PC-3細胞的凋亡作用,而且黃柏素可以增強2-甲氧基雌二醇對于腫瘤細胞凋亡的誘導(dǎo)作用,而且都存在時間和濃度依賴性。3.Western Blot測定c-FLIP蛋白的相對表達結(jié)果同樣顯示,單用2-甲氧基雌二醇和黃柏素時能夠明顯抑制PC-3細胞內(nèi)c-FLIP蛋白的相對表達,而且聯(lián)合黃柏素后2-甲氧基雌二醇使PC-3細胞內(nèi)c-FLIP蛋白的相對表達降低更加明顯,也可以驗證這兩種藥物都可以誘導(dǎo)PC-3細胞的凋亡,而且黃柏素可以增強2-甲氧基雌二醇對其凋亡的誘導(dǎo)作用,并且都存在時間和濃度依賴性。結(jié)論:2-甲氧基雌二醇和黃柏素對人前列腺癌PC-3細胞的凋亡都存在明顯的誘導(dǎo)作用,而且黃柏素可以增強2-甲氧基雌二醇誘導(dǎo)前列腺癌細胞的凋亡作用。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R737.25

【參考文獻】

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本文編號：2620470