發(fā)布時間：2020-04-07 13:45

【摘要】：[目的]本研究通過體外實(shí)驗探索中華眼鏡蛇膜毒素MT-12對膀胱癌細(xì)胞系(RT4、T24)增殖、凋亡、遷移、黏附能力的影響。[方法]1.利用CCK8法檢測不同濃度的MT-12(0,0.25和0.5 μg/mL)處理膀胱癌RT4、T24細(xì)胞1,2,3,4,5d后,對膀胱癌RT4、T24細(xì)胞增殖能力的影響,對照組加入等量不含MT-12的PSA。2.利用流式細(xì)胞術(shù)檢測MT-12(0,0.5 μg/mL)處理膀胱癌RT4、T24細(xì)胞(6,24h)后,對膀胱癌RT4、T24細(xì)胞凋亡的影響,主要是通過凋亡細(xì)胞率,觀察在凋亡方面的改變。3.采用細(xì)胞劃痕實(shí)驗檢測MT-12對膀胱癌RT4、T24細(xì)胞遷移能力的影響,0,0.25和0.5 μg/mL的MT-12處理膀胱癌RT4、T24細(xì)胞24h后,通過細(xì)胞的劃痕距離的變化檢測細(xì)胞的遷移能力。4.黏附實(shí)驗通過不同濃度MT-12(0,0.25和0.5μg/mL)處理膀胱癌RT4、T24細(xì)胞24h后,檢測OD值來判斷MT-12對膀胱癌RT4、T24細(xì)胞的黏附能力的影響。[結(jié)果]1.CCK8檢測結(jié)果顯示,不同濃度MT-12(0,0.25和0.5μg/mL)處理膀胱癌RT4、T24細(xì)胞1,2,3,4,5d后,發(fā)現(xiàn)MT-12可以顯著抑制膀胱癌RT4、T24細(xì)胞增殖能力。2.流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡的結(jié)果顯示,兩種濃度的MT-12(0,0.5 μ g/mL)膀胱癌RT4、T24細(xì)胞6、24小時后,實(shí)驗組可以顯著增加凋亡細(xì)胞的比例細(xì)胞。3.細(xì)胞劃痕實(shí)驗結(jié)果顯示,不同濃度MT-12(0,0.25和0.5μg/mL)處理膀胱癌RT4、T24細(xì)胞24h后,實(shí)驗組可以顯著抑制細(xì)胞的遷移能力。4.黏附實(shí)驗結(jié)果顯示,不同濃度MT-12(0,0.25和0.5μg/mL)處理膀胱癌RT4、T24細(xì)胞24h后,實(shí)驗組可以明顯抑制膀胱癌細(xì)胞的黏附能力。[結(jié)論]中華眼鏡蛇毒膜毒素以濃度一時間依賴的方式抑制膀胱癌RT4、T24細(xì)胞系的增殖能力,并誘導(dǎo)其調(diào)亡,同時抑制了膀胱癌RT4、T24細(xì)胞系的遷移、黏附能力。
【圖文】：

１、２、３、４、５天，ＣＣＫ８染色法檢測ＭＴ－１２處理后膀胱癌細(xì)胞的增殖情況。逡逑１．１邐ＲＴ４細(xì)胞逡逑表１－１及圖１－１結(jié)果顯示，在起始時間，各組的０Ｄ值都是０．２０±０．００，邋２４ｈ逡逑后對照組的０Ｄ值為０．２７±０．０６；邋ＭＴ－１２處理組（０．１、０．２５和０．５ｕｇ／ｍＬ）的逡逑０Ｄ值分別為０．２６±０．０１，０．２３±０．０３及０．２２±０．０２，實(shí)驗組與對照組無統(tǒng)計學(xué)逡逑差異。４８ｈ后，對照組的０Ｄ值為０．５１±０．０１；邋ＭＴ－１２處理組（０．１、０．２５和０．５逡逑Ｕｇ／ｍＬ）的邋０Ｄ邋值分另ｌｊ為邋０．４３±０．０３、０．邋３０±０．０１邋及邋０．邋３１±０．０２，其中邋０．５ｙ逡逑ｇ／ｍＬ邋ＭＴ－１２處理組與對照組有統(tǒng)計學(xué)意義（ｐ＜０．０５）。７２ｈ后，對照組的ＯＤ值逡逑為邋０．邋７２±０．邋０３；邋ＭＴ－１２邋處理組（０．１、０．邋２５邋和邋０？邋５邋ｙ邋ｇ／ｍＬ）的邋０Ｄ邋值分別為邋０．邋６７逡逑±０．０１，邋０．４６±０．０４邋及邋０．４０±０．０２，，０．２５、０．５ｕｇ／ｍＬＭＴ－１２邋處理組與對照組逡逑有統(tǒng)計學(xué)意義（ｐ〈0．邋０５）。ＭＴ－１２邋作用邋９６ｈ邋及邋１２０ｈ邋后，除了邋９６ｈ，邋０．１邋ｗ邋ｇ／ｍＬ邋ＭＴ－１２逡逑處理組與對照組有統(tǒng)計學(xué)差異（ｐ＜0．邋０５），其余各ＭＴ－１２處理組的０Ｄ值與對照逡逑組相比

采用Ａｎｎｅｘｉｎ邋Ｖ－ＦＩＴＣ／ＰＩ凋亡試劑盒來了解ＭＴ－１２對ＩＴＴ４、Ｔ２４逡逑膀胱癌細(xì)胞的生長抑制作用是否與細(xì)胞凋亡相關(guān)。逡逑如圖２－１所示，用０．邋５邋ｕ邋ｇ／ｍＬ邋ＭＴ－１２處理ＲＴ４、Ｔ２４細(xì)胞６ｈ后，即可明顯觀逡逑察出燈４、Ｔ２４細(xì)胞凋亡的顯著增加。逡逑在表２中，在６ｈ、２４ｈ時收樣，兩組膀胱癌細(xì)胞的空白對照與溶媒對照相比逡逑較，凋亡率無明顯統(tǒng)計學(xué)差異，證明溶媒液體對實(shí)驗未有干擾。６ｈ時Ｔ２４、ＲＴ４逡逑細(xì)胞凋亡率分別為（９．２２±０．３１）邋％、（２０．６３±１．５４）邋％；邋２４ｈ時凋亡率大幅度逡逑增加為（３０．２７±３．５）邋％、（２７．９３±２．４１）邋％，實(shí)驗組與對照組差異顯著，ｐ制逡逑均小于０．邋０Ｕ如圖２－２凋亡二維散點(diǎn)圖所示，ＭＴ－１２能夠誘導(dǎo)Ｔ２４細(xì)胞的早期凋逡逑亡和晚期凋亡，而ＲＴ４則是主要發(fā)生早期凋亡。細(xì)胞的凋亡率隨著時間的延長而逡逑升高。因此，該結(jié)果與增殖實(shí)驗的結(jié)果趨勢一致，ＭＴ－１２作用于Ｔ２４、ＲＴ４細(xì)胞逡逑后
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R737.14

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2617982