發(fā)布時(shí)間：2020-04-04 22:11

【摘要】：目的:通過(guò)體外高糖誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞構(gòu)建糖尿病腎病的模型,觀察依普利酮(Eplerenone,EP)對(duì)糖尿病腎病腎纖維化的影響,并探討其可能的作用機(jī)制,為臨床用藥提供相關(guān)的依據(jù)和參考。方法:1.細(xì)胞培養(yǎng):細(xì)胞株為人近曲腎小管上皮細(xì)胞(human renal tubular epithelial cell,HK-2),實(shí)驗(yàn)使用第3~5代細(xì)胞。HK-2細(xì)胞生長(zhǎng)于含10%的胎牛血清DMEM/F12培養(yǎng)基中,置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行孵育,使用0.25%胰酶進(jìn)行消化、傳代;2.細(xì)胞分組:(1)低糖對(duì)照組:葡萄糖終濃度為5.5 mmol/L,并用DMEM/F12培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞;(2)高糖組:高糖DMEM/F12培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞,葡萄糖終濃度為30 mmol/L;(3)依普利酮+高糖組:在高糖組的基礎(chǔ)上分別加入濃度為1×10-4 mol/L、1×10-5 mol/L、1×10-6mol/L的依普利酮;3.以上各組細(xì)胞作用72 h后,分別收集細(xì)胞,通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-PCR)檢測(cè)各組細(xì)胞TGF-β1 mRNA、FN mRNA的表達(dá),并用免疫蛋白印跡法(Western blot)檢測(cè)各組細(xì)胞TGF-β1、FN蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:1.RT-PCR結(jié)果顯示,在5.5 mmol/L低糖對(duì)照組中,TGF-β1 mRNA、FN mRNA水平呈低表達(dá),與低糖對(duì)照組相比,30mmol/L高糖組TGF-β1 mRNA、FN mRNA的表達(dá)水平顯著增加(P0.01),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;而依普利酮干預(yù)后TGF-β1 mRNA、FN mRNA的表達(dá)與高糖組相比明顯下降(P0.05),且TGF-β1mRNA、FN mRNA的表達(dá)隨著依普利酮的濃度的增高而逐漸降低,呈濃度依賴性;2.Western blot結(jié)果顯示:與RT-PCR結(jié)果一樣,低糖對(duì)照組TGF-β1、FN蛋白呈低表達(dá),高糖組與低糖組相比,TGF-β1、FN蛋白表達(dá)明顯增加(P0.05),依普利酮干預(yù)后TGF-β1、FN蛋白表達(dá)與高糖組相比明顯下降(P0.05)。結(jié)論:1.高糖刺激可導(dǎo)致腎小管上皮細(xì)胞TGF-β1、FN纖維化因子表達(dá)增高,而通過(guò)依普利酮的干預(yù)后可降低體外高糖誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞的TGF-β1、FN的表達(dá)水平;2.依普利酮對(duì)腎功能的保護(hù)作用可能與下調(diào)TGF-β1、FN的表達(dá),從而減輕腎纖維化對(duì)腎臟的損害有關(guān)。
【圖文】：

TGF-β1/GAPDH 0.17±0.12 1.67±0.17# 0.54±0.10* 0.65±0.08* 1.22±0.18*低糖對(duì)照組相比，P<0.05；*表示與高糖L H E1 E2 E3TG

各組TGF-β1蛋白表達(dá)量#：VSLgroup，，P<0.05；*：VSHgroup，P<0.05
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R587.2;R692.9

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 孫廣萍;朱凱;李德天;;Rho激酶介導(dǎo)醛固酮致人近端腎小管上皮細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化[J];實(shí)用藥物與臨床;2015年08期

2 張琪;徐瑞;;醛固酮及其合酶基因多態(tài)性與高血壓腎損害關(guān)系的研究進(jìn)展[J];中華高血壓雜志;2015年01期

3 梁麗娟;王箏;王蕊;沈正東;李莉;姜國(guó)旺;張曉曼;安亞娟;許慶友;;依普利酮下調(diào)TNF-α、NF-κB抑制細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的研究[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2013年11期

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本文編號(hào)：2614133