【摘要】：背景:膀胱癌(Bladder Cancer BC)是膀胱上皮組織起源的惡性腫瘤,在我國,膀胱癌發(fā)病率位列泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤中的第一位,而在國外,其發(fā)病率僅次于前列腺癌,是泌尿生殖系統(tǒng)中最常見的惡性腫瘤,且為全身十大惡性腫瘤之一。雖然隨著醫(yī)療技術(shù)及醫(yī)療手段的不斷豐富,但是針對膀胱癌治療的有效手段卻仍然十分缺乏。目前,主要通過手術(shù)切除早期及中期膀胱癌原發(fā)病灶,但術(shù)后依然具有較高的復(fù)發(fā)風(fēng)險。而對于晚期膀胱癌患者,由于往往已經(jīng)侵犯臨近組織或出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等,手術(shù)治療已經(jīng)不能切除病灶,因此多采用放療、化療或免疫療法等姑息性治療措施,治療過程中死亡率高且造成患者沉重的經(jīng)濟(jì)及心理負(fù)擔(dān)。根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查,膀胱癌的發(fā)病率正逐年上升,已成為嚴(yán)重危害人類生命健康的重大公共衛(wèi)生問題。然而,膀胱癌的病因非常復(fù)雜,其不僅存在自身的遺傳因素,同時也有環(huán)境因素的影響。得益于基因測序工作的深入研究,從而快速精確的獲得了基因間相互聯(lián)系、相互調(diào)控的海量數(shù)據(jù),揭示了基因與基因之間或基因產(chǎn)物之間存在的邏輯關(guān)系,闡明基因表達(dá)調(diào)控并不是單一孤立的存在,而是相互關(guān)聯(lián),相互制約。因此,通過進(jìn)一步研究膀胱癌發(fā)生發(fā)展過程中分子生物學(xué)機(jī)制,探索膀胱癌診療新靶點,具有重要的臨床實際意義。長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA lncRNA)是一種從基因組轉(zhuǎn)錄出來的長度超過200nt的RNA分子,但是lncRNA分子卻并不會通過翻譯編碼蛋白而發(fā)揮作用,在以往研究中被認(rèn)為是轉(zhuǎn)錄過程中的噪音而不被重視。隨著基因研究工作的深入進(jìn)展,lncRNA重新被人們所認(rèn)識,大量研究報道lncRNA在基因的表達(dá)調(diào)控方面發(fā)揮重要作用,參與腫瘤等疾病發(fā)生發(fā)展的過程,并發(fā)揮重要的調(diào)控作用。基因間長鏈非編碼RNA(long intergenic non-coding RNA lincRNA)就是存在于基因間的一種長鏈非編碼RNA,與腫瘤等疾病的內(nèi)在分子機(jī)制聯(lián)系十分密切。谷氨酰胺代謝活動被認(rèn)為是癌癥的一個重要的顯著特征,癌細(xì)胞通過谷氨酰胺代謝活動獲得能量和營養(yǎng)物質(zhì),以支持癌細(xì)胞的生長和增殖。另外,谷氨酰胺代謝受到細(xì)胞內(nèi)一些致癌基因或抗癌基因的影響,而谷氨酰胺酶(glutaminase GLS)是調(diào)節(jié)谷氨酰胺代謝過程中的關(guān)鍵酶。因此,研究長鏈非編碼RNA對谷氨酰胺酶的影響可能會發(fā)現(xiàn)膀胱癌診斷和治療的潛在新靶點,但這仍需要通過客觀的科學(xué)實驗及臨床實踐進(jìn)一步驗證。目的:研究lincRNA-p21在膀胱癌組織標(biāo)本及細(xì)胞系中的表達(dá)及其生物學(xué)功能,探索lincRNA-p21影響膀胱癌生物學(xué)功能的作用機(jī)制。方法:通過實時定量PCR技術(shù)(qRT-PCR)實驗方法檢測lincRNA-p21及谷氨酰胺酶在膀胱癌組織標(biāo)本及膀胱癌細(xì)胞系中的表達(dá)水平。使用特異性靶向lincRNA-p21及GLS的小干擾RNA(siRNA)及過表達(dá)質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染膀胱癌細(xì)胞系,CCK、克隆形成實驗驗證膀胱癌細(xì)胞生長增殖情況,并通過qRT-PCR、Western blot檢測谷氨酰胺酶的表達(dá)及代謝物測定方法測定谷氨酰胺代謝產(chǎn)物。結(jié)果:在膀胱癌組織標(biāo)本中,lincRNA-p21的表達(dá)水平與其匹配的癌旁正常組織相比明顯下降(P0.01),而相反,GLS表達(dá)水平顯著高于配對癌旁組織(P0.01)。過表達(dá)lincRNA-p21能顯著性抑制膀胱癌細(xì)胞增殖(P0.05)及生長(P0.01),且抑制谷氨酰胺酶表達(dá)(P0.05),從而抑制谷氨酰胺代謝水平降低(P0.05),代謝產(chǎn)物下降(P0.05)。相反,沉默lincRNA-p21會促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞增殖(P0.05)及生長(P0.01),且促進(jìn)谷氨酰胺酶表達(dá)(P0.05),從而促進(jìn)谷氨酰胺代謝水平升高(P0.05),代謝產(chǎn)物增多(P0.05)。結(jié)論:lincRNA-p21在膀胱癌細(xì)胞系及膀胱癌組織標(biāo)本中的表達(dá)水平相對較低,提示可能與抑癌作用有關(guān),具有抑制膀胱癌細(xì)胞增殖生長的生物學(xué)作用,參與膀胱癌細(xì)胞生長增殖過程中的生物學(xué)調(diào)控等,在膀胱癌中有著抑癌基因的作用�？赡艹蔀闈撛诘陌螂装┰\療新靶點,為膀胱癌診療提供有利的研究方向。
【圖文】：

且具有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異（圖1A）。圖 1 膀胱癌組織中 LincRNA-p21 與谷氨酰胺酶表達(dá)水平。（A、C）利用 qRT-PCR 方法檢測 LincRNA-p21在膀胱癌組織（n=11）和正常組織（n=7）中的相對表達(dá)水平。（B、D）利用 qRT-PCR 方法檢測 LincRNA-p21在膀胱癌組織及其配對癌旁正常組織（n=6）中的相對表達(dá)水平。誤差線：平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤，**表示 P＜0.01，***表示 P＜0.001。

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文3A、D），，表明 lincRNA-p21 過表達(dá)后顯著降低了 BIU87 細(xì)胞的增殖能力。另外，克隆形成實驗結(jié)果表明，實驗組中的膀胱癌細(xì)胞系生長能力較對照組明顯降低，量化結(jié)果顯示實驗組與對照組結(jié)果具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義（圖 3B、3C），表明lincRNA-p21 降低了 BIU87 細(xì)胞的集落形成能力。同時，在對照組和 lincRNA-p21過表達(dá)的 5637 穩(wěn)轉(zhuǎn)株細(xì)胞系中，我們也觀察到了與 BIU87 細(xì)胞系相一致的結(jié)果（圖 3D、3F）。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R737.14

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本文編號：2614043