【摘要】：目的:觀察凋亡抑制蛋白Livin(Inhibitor of Apoptosis Proteins,IAPs,Livin)在腎間質(zhì)纖維化(renal interstitial fibrosis,RIF)時(shí)的表達(dá)。方法:(1)不同劑量的轉(zhuǎn)化生長因子TGF-β1(0、1、2、5及10ng/ml)作用于標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)的腎小管上皮細(xì)胞(HK-2細(xì)胞)48小時(shí),倒置相差顯微鏡下觀察各濃度組HK-2細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化,Western blot實(shí)驗(yàn)檢測各濃度組HK-2細(xì)胞Livin蛋白的表達(dá)趨勢。(2)將24只CD1雄性小鼠隨機(jī)平均分為對照組(ⅰ組)與單側(cè)輸尿管梗阻模型組(unilateral ureteral occlusion,UUO,ⅱ組),手術(shù)前1天ⅰ組、ⅱ組均給予等量生理鹽水灌胃。術(shù)后14天摘取梗阻側(cè)腎臟,切片分別行免疫組化實(shí)驗(yàn)檢測E-鈣粘蛋白(E-cad)、α-平滑肌肌動蛋白(α-Sma)、Livin蛋白在腎臟的表達(dá)。結(jié)果:(1)TGF-β1刺激HK-2細(xì)胞后,倒置光學(xué)顯微鏡顯示細(xì)胞形態(tài)從鵝卵石樣向成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化,細(xì)胞變大、變梭,細(xì)胞間距明顯增大;Western blot實(shí)驗(yàn)顯示Livin蛋白在正常HK-2細(xì)胞中僅有少量表達(dá),當(dāng)TGF-β1誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞發(fā)生腎間質(zhì)纖維化時(shí)表達(dá)明顯增加,且在TGF-β1作用劑量為2ng/ml、作用時(shí)間為48小時(shí)時(shí)表達(dá)最為顯著,且各濃度組與TGF-β1作用劑量為0ng/ml,作用時(shí)間為48小時(shí)比較,Image-Pro Plus 6.0圖像分析軟件計(jì)算平均光密度值(累積光密度值/視野面積),P0.001,差異極顯著,均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)免疫組化SP實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示:與ⅰ組相比,ⅱ組腎組織中E-Cad表達(dá)減少,而α-Sma、Livin表達(dá)增加,先用Image-Pro Plus 6.0圖像分析軟件計(jì)算平均光密度值,取均值后采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:凋亡抑制蛋白Livin與腎間質(zhì)纖維化有關(guān),但孰非因果有待更多試驗(yàn)探索。
【圖文】：

同一視野范圍內(nèi)細(xì)胞數(shù)量減少。見圖 1。ontrol TGF-β1-β1 誘導(dǎo)前后 HK-2 細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化(倒置光學(xué)顯微鏡,x200)不同劑量 TGF-β1 誘導(dǎo)下 Livin 的表達(dá)blot 結(jié)果顯示，不同濃度（0、1、2、5、10ng/ml）的 TGF-β1 分別Livin 在 TGF-β1 劑量為 2ng/ml 時(shí)表達(dá)最多，且各濃度組與對照組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P <0.001）。見圖 2,圖 3。

各濃度組（0、l、2、5 及 10ng/ml）TGF-β1 刺激下 HK-2 細(xì)胞中 Livin 吸光度分析，P <組化 SP 法檢測各組小鼠腎組織中 E-Cad、Livin、α-SMA 的表達(dá)Cad 在各組小鼠腎臟的表達(dá)：與ⅰ組相比，ⅱ組小鼠腎組織中 E-Cad 表達(dá)明顯減學(xué)意義（P <0.01）。見圖 4，，表 1。
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R692

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2607221