【摘要】：目的:觀察凋亡抑制蛋白Livin(Inhibitor of Apoptosis Proteins,IAPs,Livin)在腎間質纖維化(renal interstitial fibrosis,RIF)時的表達。方法:(1)不同劑量的轉化生長因子TGF-β1(0、1、2、5及10ng/ml)作用于標準培養(yǎng)的腎小管上皮細胞(HK-2細胞)48小時,倒置相差顯微鏡下觀察各濃度組HK-2細胞的形態(tài)學變化,Western blot實驗檢測各濃度組HK-2細胞Livin蛋白的表達趨勢。(2)將24只CD1雄性小鼠隨機平均分為對照組(ⅰ組)與單側輸尿管梗阻模型組(unilateral ureteral occlusion,UUO,ⅱ組),手術前1天ⅰ組、ⅱ組均給予等量生理鹽水灌胃。術后14天摘取梗阻側腎臟,切片分別行免疫組化實驗檢測E-鈣粘蛋白(E-cad)、α-平滑肌肌動蛋白(α-Sma)、Livin蛋白在腎臟的表達。結果:(1)TGF-β1刺激HK-2細胞后,倒置光學顯微鏡顯示細胞形態(tài)從鵝卵石樣向成纖維細胞轉化,細胞變大、變梭,細胞間距明顯增大;Western blot實驗顯示Livin蛋白在正常HK-2細胞中僅有少量表達,當TGF-β1誘導HK-2細胞發(fā)生腎間質纖維化時表達明顯增加,且在TGF-β1作用劑量為2ng/ml、作用時間為48小時時表達最為顯著,且各濃度組與TGF-β1作用劑量為0ng/ml,作用時間為48小時比較,Image-Pro Plus 6.0圖像分析軟件計算平均光密度值(累積光密度值/視野面積),P0.001,差異極顯著,均具有統(tǒng)計學意義。(2)免疫組化SP實驗結果提示:與ⅰ組相比,ⅱ組腎組織中E-Cad表達減少,而α-Sma、Livin表達增加,先用Image-Pro Plus 6.0圖像分析軟件計算平均光密度值,取均值后采用SPSS21.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計分析,P0.05,差異有統(tǒng)計學意義。結論:凋亡抑制蛋白Livin與腎間質纖維化有關,但孰非因果有待更多試驗探索。
【圖文】：

同一視野范圍內(nèi)細胞數(shù)量減少。見圖 1。ontrol TGF-β1-β1 誘導前后 HK-2 細胞的形態(tài)學變化(倒置光學顯微鏡,x200)不同劑量 TGF-β1 誘導下 Livin 的表達blot 結果顯示，不同濃度（0、1、2、5、10ng/ml）的 TGF-β1 分別Livin 在 TGF-β1 劑量為 2ng/ml 時表達最多，且各濃度組與對照組具有統(tǒng)計學意義（P <0.001）。見圖 2,圖 3。

各濃度組（0、l、2、5 及 10ng/ml）TGF-β1 刺激下 HK-2 細胞中 Livin 吸光度分析，P <組化 SP 法檢測各組小鼠腎組織中 E-Cad、Livin、α-SMA 的表達Cad 在各組小鼠腎臟的表達：與ⅰ組相比，ⅱ組小鼠腎組織中 E-Cad 表達明顯減學意義（P <0.01）。見圖 4，，表 1。
【學位授予單位】：中國醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R692

【參考文獻】

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本文編號：2607221