【摘要】：目的:探討?zhàn)囸I誘導(dǎo)的自噬對(duì)膀胱癌侵襲轉(zhuǎn)移的影響以及其可能的機(jī)制。方法:用HBSS培育膀胱癌細(xì)胞株T24和5637,以此來(lái)模擬腫瘤細(xì)胞所處的營(yíng)養(yǎng)缺乏環(huán)境。Western blot法檢測(cè)饑餓處理細(xì)胞后自噬的水平變化。Transwell遷移、侵襲實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)饑餓處理對(duì)膀胱癌細(xì)胞株侵襲轉(zhuǎn)移的影響。應(yīng)用自噬抑制劑3-MA和CQ抑制饑餓狀態(tài)下T24和5637的自噬后,Transwell法檢測(cè)細(xì)胞株侵襲轉(zhuǎn)移能力的變化,以此探討自噬對(duì)膀胱癌細(xì)胞株侵襲轉(zhuǎn)移的影響。Western blot法檢測(cè)不同處理組的E-鈣黏蛋白和波形蛋白的表達(dá)變化,進(jìn)而探討EMT是否參與饑餓誘導(dǎo)的自噬對(duì)膀胱癌細(xì)胞株侵襲轉(zhuǎn)移的影響。應(yīng)用TGF-β受體抑制劑sb431542處理細(xì)胞后,Transwell法檢測(cè)細(xì)胞株侵襲轉(zhuǎn)移能力的變化;Western blot法檢測(cè)不同處理組TGF-β1/Smad3通路相關(guān)因子表達(dá)的變化;以及Western blot法檢測(cè)應(yīng)用外源重組TGF-β1細(xì)胞因子刺激細(xì)胞后的自噬狀態(tài),旨在探討?zhàn)囸I誘導(dǎo)自噬影響膀胱癌細(xì)胞株侵襲轉(zhuǎn)移的潛在機(jī)制。結(jié)果:饑餓處理膀胱癌細(xì)胞株T24、5637后,自噬相關(guān)蛋白指標(biāo)LC3B-Ⅱ的表達(dá)升高而P62的表達(dá)下降,EMT相關(guān)蛋白E-鈣黏蛋白表達(dá)下降而波形蛋白表達(dá)上升;同時(shí)饑餓處理增加了細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力;3-MA、CQ抑制自噬后,細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力下降并伴隨E-鈣黏蛋白和波形蛋白表達(dá)發(fā)生逆轉(zhuǎn);在單純饑餓處理組,TGF-β1和p-Smad3的表達(dá)升高,抑制自噬后其表達(dá)均降低;饑餓狀態(tài)同時(shí)加用sb431542處理組相對(duì)于單純饑餓處理組,細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力下降且E-鈣黏蛋白表達(dá)上升、波形蛋白表達(dá)下降。另外,應(yīng)用外源重組TGF-β1細(xì)胞因子處理細(xì)胞,LC3B-Ⅱ表達(dá)升高,P62表達(dá)下降;應(yīng)用TGF-β受體抑制劑sb431542后,LC3B-Ⅱ表達(dá)下降,P62表達(dá)上升。結(jié)論:饑餓誘導(dǎo)的自噬通過(guò)TGFβ1/Smad3信號(hào)通路誘導(dǎo)EMT促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞株T24、5637的侵襲轉(zhuǎn)移。此外,自噬和TGF-β1可形成一個(gè)正反饋回路,協(xié)同促進(jìn)細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移。
【圖文】：

15圖 1.饑餓處理誘導(dǎo)膀胱癌細(xì)胞自噬Figure 1. HBSS induces autophagy in T24 and 5637 cells. (Aand B) T24 and 5637 cells weretreated with HBSS for the indicated times. The indicated proteins were detected by westernblotting. GAPDH was detected as the loading control. (C and D and E) T24 and 5637 cells werecultured in HBSS with CQ (20 μmol/L) or 3MA (5 mmol/l) for 6 h. The indicated proteins weredetected by western blotting. GAPDH was detected as the loading control. *P < 0.05, **P<0.01.

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文2.2 饑餓誘導(dǎo)自噬促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移Transwell 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，單純饑餓處理組穿過(guò)小室膜的細(xì)胞數(shù)量以及穿過(guò)基質(zhì)膠的細(xì)胞數(shù)量相對(duì)于對(duì)照組均明顯增加(圖 2A 和 2B)。細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力用穿過(guò)小室膜的細(xì)胞數(shù)量評(píng)估（圖 2A），，細(xì)胞的侵襲能力用穿過(guò)基質(zhì)膠的細(xì)胞數(shù)量/穿過(guò)小室膜的細(xì)胞數(shù)量評(píng)估（圖 2C）。接著，我們通過(guò)抑制自噬來(lái)檢測(cè)自噬對(duì)細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的作用。3-MA 使 LC3B-II 表達(dá)下降，P62 表達(dá)上升(圖 1D 和 1E)；CQ 使 LC3B-II累積，P62 表達(dá)上升(圖 1C 和 1E)，這表明 3-MA 和 CQ 均能有效抑制自噬。Transwell 實(shí)驗(yàn)檢測(cè),在饑餓聯(lián)合自噬抑制劑（3-MA 或 CQ）組，穿過(guò)小室膜的細(xì)胞數(shù)量以及穿過(guò)基質(zhì)膠的細(xì)胞數(shù)量相對(duì)于單純饑餓組均明顯降低（圖 2A 和 2B）。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R737.14

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本文編號(hào)：2606923