【摘要】：研究背景腎臟纖維化是幾乎所有慢性腎臟病(CKD)的最終歸宿,影響腎臟纖維化的原因有很多,其中氧化應激在腎臟纖維化的發(fā)生發(fā)展過程中起到了關鍵作用。氧化應激即活性氧簇(ROS)的產生和清除失衡,線粒體作為ROS產生的主要部位,更容易受到ROS的攻擊而出現(xiàn)損傷,引起線粒體功能障礙,進而導致一系列疾病。目前己有許多研究證明線粒體功能障礙與多種腎臟疾病如糖尿病腎病、梗阻性腎病、缺血-再灌注腎損傷模型密切相關,但是線粒體功能障礙加重慢性腎臟纖維化的內在機制還不是十分清楚,在此次研究中,我們探討次氯酸修飾白蛋白(HOCl-alb)在慢性腎衰竭大鼠模型中介導氧化應激和纖維化反應方面的作用和機制。研究方法32只雄性SD大鼠行5/6腎臟切除術后隨機分為四組,每組8只,分別處理如下:(1)磷酸鹽緩沖液(PBS),尾靜脈注射與HOCl-RSA等體積量;(2)次氯酸修飾白蛋白(HOCl-RSA)20mg/kg,尾靜脈注射,隔日一次;(3)抗氧化肽SS-313mg/kg,腹腔注射,每日一次;(4)同時注射HOCl-RSA及SS-31,隔日一次;另設假手術組(n=8)為對照組。于第13周將各組大鼠放置入代謝籠留取24小時尿量后處死動物,留取血液及腎組織進行后續(xù)檢測。檢測各組大鼠血肌酐(Scr),尿素氮(BUN),尿肌酐(Ucr)量,24小時尿蛋白定量(Up),計算肌酐清除率(Ccr);光鏡下觀察腎小球及腎間質纖維化程度并計算評分比較;新鮮腎組織提取線粒體后檢測線粒體膜電位(MMP),以及腎皮質勻漿中ATP含量及線粒體活性氧(mtROS)含量;檢測各組大鼠血漿及腎組織勻漿中HOCl-alb含量,錳SOD(MnSOD)活性等氧化應激相關指標;免疫組織化學法檢測各組大鼠腎臟巨噬細胞(ED-1陽性細胞)浸潤數(shù)量、轉化生長因子-1(TGF-β 1)、Ⅰ型膠原(COL-Ⅰ)、單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)、α-平滑肌激動蛋白(α-SMA)水平的表達并計算各組評分后比較。蛋白質印跡法(WestemBlot)法檢測各組大鼠腎臟線粒體及胞漿蛋白細胞色素C(Cyto C)水平,以及TGF-β 1、COL-Ⅰ、MCP-1、α-SMA水平的表達。經腎皮質提取RNA后反轉錄聚合酶鏈式反應法(RT-PCR)檢測各組大鼠線粒體DNA(mtDNA)復制數(shù)量、TGF-β 1、COL-Ⅰ、MCP-1、α-SMA水平的表達。結果與對照組相比,5/6腎臟切除大鼠出現(xiàn)線粒體功能障礙,具體表現(xiàn)為MMP下降,ATP生成減少,mtDNA復制數(shù)量減少,Cyto C從線粒體的釋放增加,MnSOD活性下降,以及大量產生的mtROS。血漿以及腎組織中HOCl-alb水平顯著升高,同時伴隨著細胞外基質的明顯沉積,大量出現(xiàn)的蛋白尿,惡化的腎功能;炎癥指標方面巨噬細胞浸潤數(shù)量增加,MCP-1表達增多,纖維化指標如TGF-β1、COL-Ⅰ、α-SMA表達水平也明顯升高。注射HOCl-RSA后顯著加重了上述指標的變化,而注射線粒體靶向抗氧化肽SS-31后大鼠腎臟各項病理指標均明顯改善。結論HOCl-alb 水平的升高可能導致腎臟的炎癥及纖維化,并且可能與線粒體氧化應激和功能障礙密切相關。此外,線粒體靶向抗氧化肽SS-31可能為治療腎臟纖維化和慢性腎衰竭(CRF)提供了新的思路和方法。
【圖文】：

圖１．注射ＨＯＣ１－ＲＳＡ及ＳＳ－３１對于各組大鼠血肌酐（Ａ），尿素氮（Ｂ），肌酐清除率（Ｃ）２４小時尿蛋白（Ｄ）的影響。變量使用均數(shù)士標準差表示（ｎ＝８）邋．＊表示與假手術組相比，逡逑／Ｋ０．０５；邋＃表示與邋５／６ＮＸ＋ｖｅｈｉｃｌｅ邋相比，ｐ＜０．０５；邋△表示與邋５／６ＮＸ＋ＨＯＣ１－ＲＳＡ邋相比，ｐ＜０．０５Ｆｉｇｕｒｅ邋１．邋Ｅｆｆｅｃｔｓ邋ｏｆ邋ＨＯＣ１－ＲＳＡ邋ａｎｄ邋ＳＳ－３１邋ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ邋ｏｎ邋Ｓｃｒ邋（Ａ），邋ＢＵＮ邋（Ｂ），邋Ｃｃｒ邋（Ｃ）邋ａｎｄ邋Ｕｐ逡逑（Ｄ）邋ｉｎ邋５／６邋ＮＸ邋ｒａｔｓ．邋Ｄａｔａ邋ａｒｅ邋ｓｈｏｗｎ邋ａｓ邋ｍｅａｎｓ±ＳＤ（ｎ＝８）．邋ＡＮＯＶＡ，邋Ｐ＜０．０１邋ｉｎＡ，邋Ｂ，邋Ｃ邋ａｎｄ邋Ｄ．邋＊逡逑ｐ＜０．０５邋ｖｓ邋ｓｈａｍ邋ｏｐｅｒａｔｉｏｎ邋ｒａｔｓ；邋＃邋ｐ＜０．０５邋ｖｓ邋５／６ＮＸ＋ｖｅｈｉｃｌｅ邋ｇｒｏｕｐ；Ａ邋ｐ＜０．０５邋ｖｓ邋５／６ＮＸ＋逡逑ＨＯＣ１－ＲＳＡ邋ｇｒｏｕｐ．邋ＮＸ，邋ｎｅｐｈｒｅｃｔｏｍｙ；邋Ｓｃｒ，邋ｓｅｒｕｍ邋ｃｒｅａｔｉｎｉｎｅ；邋ＢＵＮ，邋ｂｌｏｏｄ邋ｕｒｅａ邋ｎｉｔｒｏｇｅｎ；邋Ｃｃｒ，逡逑ｃｌｅａｒａｎｃｅ邋ｒａｔｅ邋ｏｆ邋ｃｒｅａｔｉｎｉｎｅ；邋Ｕｐ，邋ｕｒｉｎａｒｙ邋ｐｒｏｔｅｉｎ．逡逑二、注射ＨＯＣｌ－ＲＳＡ對５／６腎切除大鼠腎組織損傷的影響逡逑１．注射ＨＯＣ１－ＲＳＡ可加重５／６腎切除大鼠腎小球硬化程度逡逑與假手術組大鼠相比，其余各組５／６腎切除大鼠腎小球均出現(xiàn)不同程度的化損傷，具體表現(xiàn)為：系膜細胞增生，，系膜基質增多，局灶性節(jié)段性腎小球硬逡逑３０逡逑

逡逑圖２－Ａ．腎臟組織ＰＡＳ染色（４００倍）及腎小球硬化指數(shù)。變量使用均數(shù)土標準差表示（ｎ＝８）．＊逡逑表示與假手術組相比，ｐ＜0．0５；邋＃表示與５／６ＮＸ＋ｖｅｈｉｃｌｅ相比，／Ｋ０．０５；邋Ａ表示與逡逑５／６ＮＸ＋ＨＯＣ１－ＲＳＡ邋相比，／Ｋ０．０５。逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－Ａ．邋ｋｉｄｎｅｙ邋ｓｅｃｔｉｏｎｓ邋ｗｅｒｅ邋ｓｔａｉｎｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ｐｅｒｉｏｄｉｃ邋ａｃｉｄ邋Ｓｃｈｉｆｆ邋（ＰＡＳ，邋ｏｒｉｇｉｎａｌ邋ｍａｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ：逡逑４００）；邋ｒｅｎａｌ邋ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ邋ｆｉｂｒｏｓｉｓ邋ｓｃｏｒｅ邋ｗｅｒｅ邋ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ．邋Ｄａｔａ邋ａｒｅ邋ｓｈｏｗｎ邋ａｓ邋ｍｅａｎｓ±ＳＤ．邋＊Ｐ＜０．０５邋ｖｓ逡逑ｓｈａｍ邋ｏｐｅｒａｔｉｏｎ邋ｒａｔｓ；邋＃Ｐ＜０．０５邋ｖｓ邋５／６ＮＸ＋ｖｅｈｉｃｌｅ邋ｇｒｏｕｐ；ＡＰ＜０．０５邋ｖｓ邋５／６ＮＸ＋ＨＯＣ１－ＲＳＡ邋ｇｒｏｕｐ．逡逑Ｂ逡逑Ｓｈａｍ邐５／６邋ＮＸ＋ｖｅｈｉｃｌｅ邐５／６邋ＮＸ＋ＨＯＣＩ－ＲＳＡ逡逑■Ｍｉｌ逡逑５／６邋ＮＸ＋＋ＳＳ－３１邐５／６邋ＮＸ＋ＨＯＣＩ－ＲＳＡ＋ＳＳ－３１逡逑圖２－Ｂ．腎臟組織ＭＡＳＳＯＮ染色（２００倍）及腎間質纖維化評分。變量使用均數(shù)土標準差表逡逑示（ｎ＝８）邋．＊表示與假手術組相比，ｐ＜０．０５；邋＃表示與５／６ＮＸ＋ｖｅｈｉｃｌｅ相比，ｐ＜０．０５；邋Ａ表示與逡逑５／６ＮＸ＋ＨＯＣ１－ＲＳＡ邋相比
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R692

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本文編號：2573106